簡介：內(nèi)蒙古醫(yī)學院碩士學位論文皮膚光老化的分子生物學機制及其防護治療研究姓名張國惠申請學位級別碩士專業(yè)免疫學指導教師博曉真20070501中文摘要目的通過研究皮膚光老化的機制，進而探討第三代維甲酸他扎羅汀對皮膚光老化的預防及臨床治療作用。方法應用免疫組化方法檢測MMPL、CJM及ICAM1光老化皮膚在治療前后的不同表達及不同年齡組中治療前后的表達水平；結(jié)果1光老化皮膚中，仇口一L、CJM及ICAM1在治療前后的表達有顯著性差異PO05；2不同年齡組中H心伊一L、CJM及ICAM一1在治療前的表達有顯著性差異P005；在治療后的表達也有顯著性差異PO05，但較治療前的差異減小。3岱伊一1與CJ吼在光老化皮膚中的表達呈正相關PO01，MMP一1與ICAM一1的表達也呈正相關P0OR。結(jié)論1他扎羅汀是第三代維甲酸新藥，可能通過調(diào)控光老化皮膚中MMPL、CJ吼及ICAM一1的表達而抑制膠原的減少。2在光老化皮膚中MMP一1不僅與CJM的表達密切相關，也與ICAML的表達密切相關。3他扎羅汀通過抑制膠原的減少，可延緩和治療皮膚光老化。關鍵詞N伊一1CJMICAM1皮膚光老化他扎羅汀

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簡介：上海第二醫(yī)科大學博士學位論文從系統(tǒng)生物學水平研究白血病治療的分子機制姓名王侃侃申請學位級別博士專業(yè)遺傳學指導教師陳竺20050501上海第二醫(yī)辯大學璃士論文從系統(tǒng)生物學水平研究自盤病治療的分子視制中文攘羹研究重大疾病的發(fā)生、發(fā)展及治療等復雜過程需要以科學假說為懿提，從蛙闋、空闋黔恁發(fā)，逶過離遙攮的手段對瘸交組織釋緇胞豹鼙西及蘊商進行大規(guī)模的定量檢測，從褥達到了鰓生甥學信息在該過程中的運佧規(guī)籜。急滋舉翁粒緇藏性囪斑瘸APL是應用誘導分化／凋亡治療人類腫瘤的成功范例，維甲酸RA與三氯化二砷ATO的聯(lián)合熙騖可默使大多數(shù)病人獲得離質(zhì)量的筏時闖無瘸生存期。為了揭示這一高效治療的復雜機捌，我們J敷用系鏡生甥學妁理念和方法，遺過整合基因芯片、二維凝蔽毫泳及矮譜分轎等手段，對APL細胞棟NB4分剮瘸ILA、ATO及RA／ATO進行處理，并牧集不秘對瀚段黥樣本，靖基灝幫蛋自豹表達大蕊摸魂避行動態(tài)性的寇豢分析。高通贛、多層顢?shù)亩嘌芯慨a(chǎn)生海量的生物學數(shù)握，為了準確無談逸黲輯這些數(shù)據(jù)中掰蕊藏的矍耪學信患及其遙律麓棒，我稍痘璃了CPPSOMCOMPONENTPLANEPRESENTATIONINTEGRATEDSELFORGANIZINGⅨAP、多項式曲線瓠合及多重假設稔驗、基閡／諼自功能富集分析、自然語言文本挖援及功麓鼴終鶼建立等詩算鴦甥學辯生懿信患學方法。崧茂基磴上，我們發(fā)現(xiàn)了一系列與粒系分化及凋亡相關的分子調(diào)控網(wǎng)絡的鞭特點，包撼轉(zhuǎn)蒙慰子及轆助轉(zhuǎn)淥豳子、鈣倦號遙路、干擾豢遴潞、泛素～簧囪酶體系統(tǒng)韻激滔，PMLRAR氈器自的隧解秘駭髂NUCLEARBODY熟莛建，纓腿鼴麓黻滯及凋亡潛能的羹新獲得等。簡對，對予受RA調(diào)變酌基閑，我們還對其上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列邀露轉(zhuǎn)滎囂予縫合廖列豹頻棗拱撼、權(quán)鬟艇陣秘概率模型分拼簿數(shù)理統(tǒng)計的處理，發(fā)現(xiàn)包括RARE維甲酸反應元件在內(nèi)的一些特定轉(zhuǎn)淥趿子的縫合序列在這些LA壤變的基因中存在著蜜集分布的現(xiàn)象，觚兩在基掰組水平對轉(zhuǎn)錄組放蛋盤質(zhì)綴懿信惑避行了霄力的羚充。我們遂黢察到不嗣蓊臻濃度翡淞辯敉系分純相關拘轉(zhuǎn)蒙因子的激活及粒系特征

簡介：該研究是為了觀察后縱韌帶骨化患者非骨化部位的脊柱韌帶在體外培養(yǎng)條件下的形態(tài)學特征、成骨能力BMP2及TNFΑ在后縱韌帶組織中的表達情況骨形態(tài)發(fā)生蛋白2與腫瘤壞死因子Α及兩者協(xié)同作用在后縱韌帶成纖維細胞體外培養(yǎng)條件下的細胞增殖、膠原合成、ALP活性及骨鈣素分泌水平的影響同時探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白2與腫瘤壞死因子Α聯(lián)合誘導脊柱韌帶成纖維細胞表達成骨細胞表型中核結(jié)合因子CBFAL表達的可能性、SMAD1與SMAD5在其中的信號傳導作用及分子機制結(jié)論①后縱韌帶骨化患者脊柱韌帶細胞體外培養(yǎng)可表達成骨細胞表型后縱韌帶骨化患者的某些成骨因子可能分泌異常②TNFΑ與BMP2聯(lián)合作用可誘導脊柱韌帶成纖維細胞表達成骨細胞表型BMP2與TNFΑ在OPLL的發(fā)生中可能起著重要作用③TNFΑ的刺激可能為BMP2提供了與其結(jié)合的受體它還可能通過RAS激活的ERK途徑誘導成纖維細胞表達成骨細胞相關基因④TNFΑ與BMP2在誘導成纖維細胞表達成骨細胞表型中起著協(xié)同作用

簡介：生物醫(yī)用材料是材料科學技術的一個分支，相關研究涉及生物醫(yī)學領域中最基本的科學問題。為了探討無生命的物質(zhì)參與構(gòu)建有生命組織的機制，開展了鈣磷降解材料生物礦化的細胞分子生物學基礎研究。設計并建立了細胞培養(yǎng)→基因克隆→基因表達→蛋白質(zhì)純化→蛋白質(zhì)分子與材料作用的系統(tǒng)研究模式。首先采用酶消化法和植塊法從WISTAR乳鼠顱骨體外分離培養(yǎng)了大鼠成骨細胞，兩種方法獲得的成骨細胞經(jīng)傳代培養(yǎng)和純化后，顯示出高的堿性磷酸酶活性和鈣結(jié)節(jié)形成能力，具有良好的生物學特性。將原代培養(yǎng)后傳至第3代、經(jīng)過純化、狀態(tài)良好的成骨細胞進行凍存，復蘇后存活率達93％，堿性磷酸酶染色呈強陽性，有鈣結(jié)節(jié)形成，可擴增堿性磷酸酶基因，與未凍存細胞比較，復蘇細胞的生物學特性無明顯改變；設計了一對PCR反應特異性引物F1、R1，從酶消化法分離培養(yǎng)的WISTAR乳鼠成骨細胞總RNA中擴增出骨粘連蛋白的編碼區(qū)CDNA序列，將PCR產(chǎn)物插入PBST載體，測序并與GENBANK核酸數(shù)據(jù)庫比對，其序列與GENBANK核酸數(shù)據(jù)庫中收錄的一致；將大鼠骨粘連蛋白基因重組到原核表達載體PGEXKG中，構(gòu)建了正確的表達載體PGEXKGON，在大腸桿菌ECOLIBL21DE3PLYSS中實現(xiàn)了全長表達，表達的融合蛋白存在于細菌裂解液上清中，上清中的目的蛋白采用硫酸銨分級沉淀、超濾膜分離、GST親和層析逐步純化，獲得了高純度的大鼠骨粘連蛋白；將大鼠成骨細胞與鈣磷材料混合培養(yǎng)，顯微鏡下可觀察到成骨細胞對鈣磷材料有明顯的吞噬作用；細胞計數(shù)、MTT和CKK8等實驗結(jié)果表明，鈣磷材料有利于成骨細胞增殖；將骨粘連蛋白與CA2離子作用，采用等離子體發(fā)射光譜儀進行檢測，證明所獲得的骨粘連蛋白可結(jié)合鈣離子；骨粘連蛋白與鈣磷材料作用后，SEM、XRD、XPS測試結(jié)果顯示，蛋白在鈣磷材料表面發(fā)生了吸附和鍵合反應。骨粘連蛋白通過CA2離子結(jié)合位點結(jié)合CA2，通過NH3結(jié)合PO43，并啟動羥基磷灰石晶核形成，以高的親和力吸附羥基磷灰石晶核后，從材料表面解吸，通過膠原結(jié)合位點在膠原纖維上吸附，實現(xiàn)其結(jié)合鈣磷、轉(zhuǎn)運鈣磷、結(jié)合膠原蛋白的功能，引導鈣鹽在基質(zhì)中沉積和骨的礦化。

簡介：中國醫(yī)科大學碩士學位論文RNA干涉RPS12基因?qū)ξ赴┘毎飳W特性的影響及分子機制探討姓名閆楊申請學位級別碩士專業(yè)遺傳學指導教師孫秀菊20070401中文論著摘要RNA干涉RPSL2基因?qū)ξ赴┘毎飳W特性的影響及分子機制探討摘要胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類的健康。多種癌基因和抑癌基因的異常與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，但是目前關于對胃癌防治具有重要意義的靶基因報道很少。因此，研究與胃癌密切相關的基因十分必要。為此本課題組前期應用抑制消減雜交SSH篩查發(fā)現(xiàn)一些在胃癌中差異表達的基因，進一步應用基因芯片、斑點雜交等技術檢測相關基因在異型增生、早期胃癌、進展期胃癌組織、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌以及癌旁組織中的表達，進一步證實了這些基因在胃癌發(fā)生發(fā)展不同階段的差異表達情況。核糖體蛋白12RIBOSOMALPROTEINS12，脬酣2基因是其中之一。該基因在胃癌發(fā)生發(fā)展不同階段病變的標本中表達增高，是胃癌發(fā)生、發(fā)展不同階段的重要差異表達基因。但是該基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用究竟如何，有待通過進一步實驗證實。在前期工作的基礎上，為深入研究RPSL2基因在胃癌中的作用，本課題擬構(gòu)建RPSL2基因SHRNA表達載體，轉(zhuǎn)染胃癌細胞并證實對RPSL2基因的抑制作用后，觀察對胃癌細胞生物學特性如細胞凋亡、增殖的影響，并探討其分子機制。本研究將加深對胃癌分子機制的理解，并有望發(fā)現(xiàn)胃癌診治、預后判定的新標志。材料及方法1．實驗材料胃癌細胞系BGC823、RPMLL640培養(yǎng)基、TRIZOLREAGENT、TAQDNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒QIAGEN；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒INVITROGEN，BAMHI、HINDIII、ECORI核酸內(nèi)切酶TAKARA；PI、JML09感受

簡介：新近研究證實一類新型的間質(zhì)細胞存在，其特征是伴有長（數(shù)十至數(shù)千微米不等）而纖細（直徑寬約0105微米）的突起。該群細胞被命名為TELOCYTES，其突起命名為TELOPODES。迄今，在包括心臟在內(nèi)的哺乳動物多臟器中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TELOCYTES的空間分布。通過TELOPODES，TELOCYTES能夠與其他類別的心臟原位細胞，毛細血管或者神經(jīng)末梢相互作用。并且，他們一同組成一個間質(zhì)系統(tǒng)，能夠起作用于心臟更新，再生以及修復。雖然一些與協(xié)調(diào)相關的功能在當前已有所研究，例如對心外膜干細胞池中的心肌祖細胞的調(diào)控以及在心肌梗死病理下血管新生，然而，涉及這些機制的系統(tǒng)化研究需要從心臟組織中純化此類細胞。在TELOCYTES特有的細胞形態(tài)之外，其分子生物標記也已有所明確。相應于此，我們運用流式細胞儀，以其細胞膜表面CD34和CD117為分子靶向，成功的分離出心臟TELOCYTES?；诩兓毎幕A上，此后相繼開展了電生理、生物化學以及蛋白質(zhì)組學技術從而進一步揭示此類細胞的基本特性。同時，也發(fā)現(xiàn)了心臟TELOCYTES能夠通過旁分泌方式和促進微血管內(nèi)皮細胞自分泌血管內(nèi)皮生長因子方式來加快微血管內(nèi)皮細胞增殖。上述發(fā)現(xiàn)必將為理解局部血管新生及心臟生理和防護提供新的理念。第一部分心臟TELOCYTES分離、培養(yǎng)、純化、鑒定及培養(yǎng)基優(yōu)化目的純化心臟TELOCYTES并優(yōu)化其培養(yǎng)基。方法利用6周齡的C57BL6J小鼠，消化法分離心臟原位細胞，依據(jù)細胞間貼壁時間的差異，初步篩選并培養(yǎng)原代心臟TELOCYTES，借助流式細胞儀純化原代中CD34CD117表達細胞，激光共聚焦顯微鏡掃描VIMENTIN表達及普通顯微鏡觀察TELOCYTES特征形態(tài)。通過CCK8對TELOCYTES在4種不同基礎培養(yǎng)基低糖DMEM伴10％胎牛血清、低糖DMEM伴20％胎牛血清、高糖DMEM伴10％胎牛血清、高糖DMEM伴20％胎牛血清，中增殖活力進行檢測，優(yōu)化適合TELOCYTES生長環(huán)境。結(jié)果原代培養(yǎng)細胞經(jīng)流式細胞儀分析CD34CD117240％CD34CD11774％，CD34CD11746％，CD34CD11764％。CD34CD117表達細胞在普通顯微鏡下觀察其特異形態(tài)結(jié)構(gòu)細而長的細胞突起伴不規(guī)則串珠樣膨起，這符合TELOCYTES的特征性的結(jié)構(gòu)TELOPODESCD34CD117表達細胞在激光共聚焦顯微鏡下可見骨架蛋白VIMENTIN在胞體和細胞突起的陽性表達，這符合TELOCYTESCD34CD117VIMENTIN的特異性表達。在4種不同基礎培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)高糖DMEM伴10％胎牛血清同低糖DMEM伴10％胎牛血清、低糖DMEM伴20％胎牛血清及高糖DMEM伴20％胎牛血清相比較，在1H至4HTELOCYTES的細胞增殖活力明顯升高。結(jié)論在原代細胞培養(yǎng)的基礎上采用CD34CD117表達分選的細胞具備TELOCYTES特征性結(jié)構(gòu)和蛋白表達，高糖DMEM伴10％胎牛血清為最優(yōu)TELOCYTES的培養(yǎng)基。第二部分心臟TELOCYTES增殖、TELOPODES演變及端粒酶活性分析目的時序性觀察TELOCYTES的增殖過程及TELOPODES的生長進程。方法利用6周齡的C57BL6J小鼠，在心臟原代細胞培養(yǎng)的基礎上采用流式細胞儀分選CD34CD117表達的TELOCYTES細胞，將其種植于6孔板中，借助CELLIQRIMAGINGPLATFM定時（20分鐘）連續(xù)（96小時）拍攝TELOCYTES分裂增殖的全部過程以及在TELOCYTES生長進程中細胞突起TELOPODES的演變選取與心臟TELOCYTES同量的骨髓間充質(zhì)干細胞、心臟成纖維細胞以及心肌細胞，通過實時定量PCR測定各組端粒酶濃度的差異。結(jié)果在活細胞成像平臺下，貼壁的TELOCYTES在12H開始進入界面構(gòu)象，48H出現(xiàn)雙核及胞體內(nèi)陷的縱向分裂征象，56H可見特征性的TELOPODES伴隨著子細胞向相反的方向移動而逐漸成形。在TELOCYTES貼壁后的16H24H，細胞特征性突起TELOPODES在伴隨細胞生長進程中不斷出現(xiàn)脫落和新生，脫落的TELOPODES分散成PODOMS和PODOMERS，布滿在TELOCYTES周圍空間。骨髓間充質(zhì)干細胞、心臟成纖維細胞，心臟TELOCYTES以及心肌細胞中端粒酶檢測濃度分別為00668，01637，00974以及00006AMOLESUL。結(jié)論縱向分裂的TELOCYTES傳代時程較長，端粒酶活性相對較低，細胞生長過程可見TELOPODES新生與脫落交替出現(xiàn)，并以PODOMS和PODOMERS形式存在周圍空間。第三部分心臟TELOCYTES電生理特性及蛋白質(zhì)組學意義目的分析TELOCYTES的電生理特性及全細胞比較蛋白組學功能趨向。方法利用6周齡的C57BL6J小鼠，在心臟原代細胞培養(yǎng)的基礎上采用流式細胞儀分選CD34CD117表達的TELOCYTES細胞，將其種植于GLASSBOTTOMDISH，運用激光共聚焦顯微鏡掃描NA，K，CA2離子通道在細胞膜表達將其種植于圓形載玻片上，在細胞外液140MMOLLNACL，5MMOLLKCL，2MMOLLCACL22MMOLLMGCL210MMOLLHEPES12MMOLLGLUCOSE2MMOLLCOCL22MMOLL4AP，2MMOLLBACL2，PH74，以15MLMIN的流速細胞內(nèi)液130MMOLLKASPARTATE6MMOLLNACL10MMOLLHEPES2MMOLLMGCL214MMOLLEGTA，2MMOLLCACL2，5MMOLLNA2ATP，PH74的環(huán)境下，保持電位為40MV，自110MV至10MV，以階差為20MV，運用全細胞膜片鉗檢測TELOCYTES的基本電生理特性。提取心臟TELOCYTES全細胞蛋白，運用同位素標簽相對和絕對定量技術，質(zhì)譜分析肽段并鑒定蛋白組分，同時，與心臟干細胞、心臟微血管內(nèi)皮細胞及心臟神經(jīng)嵴細胞之間蛋白定量比較，分析心臟TELOCYTES全細胞蛋白相對功能趨向。結(jié)果激光共聚焦顯微鏡掃描心臟TELOCYTES可見胞體及細胞突起膜表面NA，K，CA2離子通道分布表達運用全細胞膜片鉗技術將CA2染色指示劑FURA2注入胞體觀察到TELOCYTES特征性形態(tài)以及胞體強表達和PODOMERS、PODOMS弱表達刺穿細胞膜后檢測TELOCYTES平均電容和平均電阻分別為2253PF和1565GΩ自110MV至10MV誘發(fā)TELOCYTES，未見動作電位出現(xiàn)。心臟TELOCYTES與心臟微血管內(nèi)皮細胞、心臟干細胞及心臟神經(jīng)嵴細胞全細胞比較蛋白組學發(fā)現(xiàn)分別存在16，32及90個差異表達蛋白，TELOCYTES分別上調(diào)表達細胞成分的形態(tài)發(fā)生K2C7，CTRO，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)運輸SNAG，F(xiàn)LOT2，GBLP，和代謝過程GLO2，VPS4B核MRNA剪接SFRS5，代謝過程NOL5AIDH3A，免疫系統(tǒng)的過程SAA3和運輸FABP4細胞運動MYH9，ODFP2，細胞成分的形態(tài)發(fā)生MYH9，LMNA，SPTA2，K1CL3，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)運輸RAB31，CHMP3，ARF3，NIPS1，細胞內(nèi)氨基酸的生物合成和代謝過程AL4AL，SCLYAATM，MMSA，CLTC，GLSL，PROD2，免疫系統(tǒng)的過程SODM，CATASBP1MOSC2GSTM1PRDX6THTRDNJA3BPHLPPIAEST31GST01，蛋白合成與代謝過程TCPQ，CH10，TCPB，UK114，CALR，TCPZ，TCPG，呼吸鏈電子傳遞和三羧酸循環(huán)QCR1，ETFD，MDHC，ODO1，SUCB2，CP2CT。結(jié)論心臟TELOCYTES膜表面存在NA，K，CA2離子通道，但沒有動作電位發(fā)生，細胞間不以電信號傳遞差異蛋白組學提示心臟TELOCYTES在細胞成分的形態(tài)發(fā)生等方面高表達。第四部分心臟TELOCYTES空間分布及其對微血管內(nèi)皮細胞增殖影響目的觀察心臟TELOCYTES與心臟微血管內(nèi)皮細胞空間毗鄰位置關系以及對其增殖的影響。方法將6周齡的C57BL6J小鼠心臟，分離成1MM3大小，經(jīng)4％戊二醛PH73在4℃固定4H，后經(jīng)沖洗、梯度脫水、浸潤、包埋，加工超薄切片70NM，鋪FMVARCOATED銅網(wǎng)，醋酸鈾和檸檬酸鉛染色，透射電鏡下觀察心臟TELOCYTES形態(tài)及與心臟微血管內(nèi)皮細胞空間毗鄰位置關系。分離心臟TELOCYTES與心臟微血管內(nèi)皮細胞，運用TRANSWELL技術將兩者共培養(yǎng)72H，采用碘化吡啶染色心臟微血管內(nèi)皮細胞核，借助流式細胞儀分析共培養(yǎng)組及對照組心臟微血管內(nèi)皮細胞之間細胞周期的差異。結(jié)果透射電鏡下，心臟TELOCYTES位于心臟間質(zhì)，心肌束之間，特征性結(jié)構(gòu)TELOPODES圍繞在微血管周圍，與微血管內(nèi)皮細胞毗鄰。TRANSWELL技術共培養(yǎng)心臟TELOCYTES與心臟微血管內(nèi)皮細胞發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)組SG2M期153％117％，對照組SG2M期118％556％。結(jié)論心臟TELOCYTES與心臟微血管內(nèi)皮細胞之間存在重要的毗鄰空間位置關系，且心臟TELOCYTES旁分泌明顯促進心臟微血管內(nèi)皮細胞增殖。第五部分心臟TELOCYTES旁分泌及其促微血管內(nèi)皮細胞自分泌研究目的分析心臟TELOCYTES旁分泌細胞因子、生物功能，及其對微血管內(nèi)皮細胞自分泌血管內(nèi)皮生長因子的影響。方法利用6周齡的C57BL6J小鼠，在心臟原代細胞培養(yǎng)的基礎上采用流式細胞儀分選CD34CD117表達的TELOCYTES細胞，將其種植于6孔板中，貼壁后，無血清連續(xù)培養(yǎng)48H，分別在0，6，12，24和48H取上清液，運用細胞因子抗體芯片技術，定量檢測120種細胞因子，選取48H時終濃度大于100PGML的細胞因子，并分析其參與機體生物功能。運用TRANSWELL技術將心臟TELOCYTES和微血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)72H后，分別在2，6，12，24，48及72H收集微血管內(nèi)皮細胞無血清培養(yǎng)基，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗技術定量檢測血管內(nèi)皮生長因子含量。結(jié)果在48小時選取終點，36種細胞因子濃度大于100PGML，主要涉及免疫反應、炎癥反應、信號轉(zhuǎn)導、細胞間通信、化學因子、細胞粘附、凋亡、細胞增殖、生長發(fā)育及細胞表面受體相關轉(zhuǎn)導方面，其中，13分泌因子與細胞生長相關。ELISA檢測發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)組較對照組，在48H和72H時，微血管內(nèi)皮細胞自分泌血管內(nèi)皮生長因子明顯增高。結(jié)論心臟TELOCYTES分泌細胞因子參與多種反應，細胞生長相關占主位心臟TELOCYTES旁分泌作用能直接促進微血管內(nèi)皮細胞自分泌血管內(nèi)皮生長因子釋放。

簡介：廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所里交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名_二疆日期矽，歸鑰，廠日關于學位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名囪查塹論文導師簽名日期為，肇年Q月，擴日2．活動期UC患者中醫(yī)干預組L與西醫(yī)治療組1兩組問血漿MMP一1、TIMP一1、PGE2表達水平差異無統(tǒng)計學意義D0．05。3．緩解期UC患者中醫(yī)干預組2與西醫(yī)治療組2兩組間血漿MMP一1、TIMP一1、PGE2表達水平差異無統(tǒng)計學意義P0．05。二血漿刪P一1、TIMPI、PGE2的表達水平與UC病情的關系1．血漿MMP一1、TIMP一1、PGE2在UC不同病情中的表達1血漿涮P一1在中度UC中的表達顯著高于輕度、緩解期UCP0．05。2血漿中TIMPI、PGE2在中度、輕度UC中表達均較緩解期組顯著增高KO．05，且中度UC中表達較輕度UC明顯增高P0．05。研究結(jié)論一、MIDP一1、TIMP一1、PGE2三因子在血漿中的表達與UC發(fā)病機制及病情密切相關。二、伏毒理論指導下的中醫(yī)藥治療UC在降低相關血漿細胞因子方面優(yōu)勢顯著，主要體現(xiàn)在緩解期，具體表現(xiàn)在降低MMP一1、TIMP一1水平方面。三、“伏毒”之“毒”與分子水平的MMP一1、TIMP一1存在一種客觀的比類關系，同時伏毒之“伏”亦體現(xiàn)在UC分期的緩解期。四、伏毒與UC的關系一定程度上實現(xiàn)了客觀化，促進了中醫(yī)理論嚴謹化。關鍵詞潰瘍性結(jié)腸炎，中醫(yī)伏毒理論，發(fā)病機制，MMPL、TIMP一1、PGE2

簡介：目的了解整合子在部分銅綠假單胞菌臨床分離株中的分布及耐藥性情況，分析整合子與銅綠假單胞菌耐藥和多重耐藥的相關性。了解整合子可變區(qū)攜帶的耐藥基因型，研究其分子生物學特征，探討整合子在細菌耐藥性產(chǎn)生和傳播擴散中的作用。材料與方法1菌株來源1997年至2003年問江蘇省人民醫(yī)院收集并隨機抽取的非重復性并具有臨床意義的銅綠假單胞茵菌株，共47株。2方法以煮沸法提取47株銅綠假單胞菌的總DNA為模板，根據(jù)1、3類整合子各自整合酶基因保守區(qū)設計的引物，PCR擴增以篩選出各自陽性菌株；再將整合子陽性菌株與銅綠假單胞菌PU21共孵，行轉(zhuǎn)移接合試驗；采用瓊脂平皿稀釋法對47株菌株以及轉(zhuǎn)移接合子進行MIC測定，分析藥敏情況。對1類整合子陽性菌株，根據(jù)1類整合子5’和3’保守區(qū)設計的通用可變區(qū)引物，PCR擴增其可變區(qū)。將可變區(qū)PCR產(chǎn)物膠回收純化后，進行序列分析，結(jié)果與GENBANK序列進行比對，確定可變區(qū)所含耐藥基因盒。以1類整合子陽性菌株與其對應接合子的總DNA為模板，根據(jù)1類整合子可變區(qū)測序結(jié)果設計所含耐藥基因盒對應的引物，PCR擴增每一個耐藥基因以確認克隆測序結(jié)果及初步檢驗整合子是否處于質(zhì)粒上。采用堿裂解法抽取整合子陽性菌株與其對應接合子的質(zhì)粒。采用脈沖場凝膠電泳PULSEDFIELDGELELECTROPHESIS，PFGE分析整合子陽性菌株的同源性。結(jié)果47株銅綠假單胞菌經(jīng)PCR法29株檢測到含有1類整合酶，占所有分離菌株的617％2947，3類整合子未檢出。藥敏結(jié)果顯示1類整合子陽性菌株較陰性菌株耐藥率明顯升高；整合子陽性菌株對哌拉西林、頭孢他啶、阿米卡星、慶大霉素、氯霉素、鏈霉素的耐藥率最高，達到100％。29株1類整合子陽性菌株均轉(zhuǎn)移接合成功；轉(zhuǎn)移接合子與野生株比較，對哌拉西林他唑巴坦、亞胺培南、環(huán)丙沙星均敏感，MIC90分別下降了8、128和128倍。29株攜帶的1類整合子可變區(qū)擴增產(chǎn)物均約為43KB。序列分析結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)該可變區(qū)包含4個耐藥基因盒，形成一個新的組合形式AAC6’ⅡAADA13CMLA8OXA10，已提交GENBANK，序列號為EU182575。其中AADA13首次在銅綠假單胞菌中發(fā)現(xiàn)。同時第三個開放閱讀框的序列未見報道，與已知的CM1A5同源性最高為95％，將其命名為CM1A8。無論野生株或接合子經(jīng)PCR均分別擴增出上述4個耐藥基因盒，序列測定與克隆測序一致。無論野生株或接合子均抽提出大小一致，大于10KB的耐藥性質(zhì)粒。脈沖場凝膠電泳的分析結(jié)果顯示，所有1類整合子陽性菌株具有高度同源性，存在克隆傳播和可能相關關系。結(jié)論本院銅綠假單胞菌臨床分離株中有1類整合子的流行。1類整合子陽性的菌株較陰性菌株對多種抗生素更容易產(chǎn)生耐藥。結(jié)合藥敏表型及整合子攜帶耐藥基因的基因型，整合子與銅綠假單胞茵耐藥和多重耐藥相關。和野生株相比，轉(zhuǎn)移接合子對哌拉西林他唑巴坦、亞胺培南、環(huán)丙沙星均敏感。該1類整合子可變區(qū)基因相同，攜帶有新的耐藥基因盒組合形式。整合子位于接合性質(zhì)粒。這些1類整合子陽性菌株間存在著水平或垂直傳播的可能性。

簡介：安徽醫(yī)科大學碩士學位論文產(chǎn)SHV型超廣譜Β內(nèi)酰胺酶腸桿菌耐藥基因的分子生物學研究姓名盛大平申請學位級別碩士專業(yè)臨床檢驗診斷學指導教師徐元宏20050701MICMLNIMUMINHIBLTORYCONCENTRATION最低抑菌濃度NCCLSNATLONALCOMMTTEEFORCHNLCAL美國國家臨床實驗LABORATORYSTANDARDS標準化委員會PLISOELETRICPOINT等電點PFGEPULSEFIELDGELELECTROPHORESIS脈沖場電泳儀PCRPOLYMERASECHALNREACTION聚合酶鏈反應KPNKLEBSIELLAEPNEUMONIAE肺炎克雷伯菌ECOESCHERICHIACOLI大腸埃希菌LEULLEUCINE亮氨酸GLNQGLUTAMINE谷氨酰胺GLYGGLYCINE甘氨酸SERSSERINE絲氨酸GLUEGLUTAMICACID谷氨酸LYSKLYCINE賴氨酸ARGRARGININE精氨酸THRTTHREONINE蘇氨酸ALAAALANINE丙氨酸VALVVALINE纈氨酸ASNNASPARAGINE天冬酰胺ASPDASPARTLCACID天冬氨酸ILEIISOLEUCINE異亮氨酸PROPPROLINE脯氨酸LEULLEUCINE亮氨酸METMMETHIONINE蛋氨酸TRPWTRPTOLPHAN色氨酸CYSCCYSTEINE半胱氨酸TYRYTYROSINE酪氨酸HISHHISTIDINE組氨酸3

簡介：Y1407150分類號R75密級學位類別科學學位日專業(yè)學位口學校代碼10062學號20T52321天滓醬耕垮TIANJINMEOLCLUNIVERSLLLR碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目蕈樣肉芽腫T細胞受體基因重排的分子生物學診斷研究TITLEMOLECULARDIAGNOSISOFMYCOSISFUNGOIDESWITHREARRANGEMENTOFTCELLRECEPTOR一級學科臨床醫(yī)學二級學科皮膚病與性病學論文作者徐敏指導教師紀巖文教授導師組成員張理濤副主任醫(yī)師天津醫(yī)科大學研究生院二OO八年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文技術檢測TCR基因重排。且本方法省時省力，最大程度的避免在提取過程中DNA的損失。2．紅斑期蕈樣肉芽腫出現(xiàn)典型病理特征的比例較少，僅靠病理組織學診斷紅斑期蕈樣肉芽腫較為困難。斑塊期和腫瘤期蕈樣肉芽腫病理特征突出，診斷相對容易。3．研究結(jié)果顯示6L例蕈樣肉芽腫患者中82．0％發(fā)生TCR吖基因重排，其陽性率較高。4．對照組中亞急性皮炎、急性痘瘡樣糠疹和點滴型副銀屑病中也都有陽性克隆，尤其是亞急性皮炎的陽性率較高，提示有出現(xiàn)假陽性的可能。5．應用PCR技術檢測MF石蠟包埋組織的TCRY基因重排，并結(jié)合臨床表現(xiàn)，病理和免疫組化等可用于MF的診斷。關鍵詞蕈樣肉芽腫；T細胞受體；基因重排基因診斷；聚合酶鏈反應II

簡介：分類號分類號R75105密級密級公開公開單位代碼單位代碼10760學號學號107601110534新疆醫(yī)科大學XINJIANGMEDICALUNIVERSITY博士學位論文士學位論文THESISOFDOCTORDEGREE臨床醫(yī)學專業(yè)學位臨床醫(yī)學專業(yè)學位學位教育學位教育論文題目論文題目氨甲環(huán)酸對培養(yǎng)氨甲環(huán)酸對培養(yǎng)人黑素細胞生物學影響和相關分子黑素細胞生物學影響和相關分子機制的研究機制的研究研究生研究生安彩霞安彩霞指導教師指導教師普雄明雄明教授教授專業(yè)學位領域?qū)I(yè)學位領域皮膚皮膚病與病與性病學性病學研究方向研究方向色素性皮膚病色素性皮膚病研究起止時間研究起止時間2012年3月2013年9月所在學院所在學院自治區(qū)人民醫(yī)院自治區(qū)人民醫(yī)院2013年10月ASTUDYONTHEBIOLOGICALEFFECTRELATEDMOLECULARMECHANISMOFTRANEXAMICACIDONMELANOGENESISINCULTUREDHUMANMELANOCYTESＡDISSERTATIONSUBMITTEDTOXINJIANGMEDICALUNIVERSITYINPARTIALFULLFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFDOCTOFMEDICINEBYANCAIXIADERMATOLOGYVENEREOLOGYDISSERTATIONSUPERVISPROFPUXIONGMINGOCT2013

簡介：研究背景血管長期暴露于搏動性血流的作用下，后者產(chǎn)生的機械生物力對于正常的血管結(jié)構(gòu)和功能的維持具有關鍵作用。血管中的搏動性血流主要產(chǎn)生兩種形式的機械生物力，分別是平行于血管長軸的剪切力SHEARSTRESS和垂直于血管長軸的機械牽張力STRETCHSTRESS。內(nèi)皮細胞襯于血管最里面，直接與血流接觸，因此剪切力主要作用于血管內(nèi)皮細胞。而牽張力主要是由于心臟周期性搏動引起的血管擴張產(chǎn)生的，因此作用于血管各層細胞，但血管平滑肌細胞VSMCS是其主要的靶細胞。大量的體內(nèi)外研究證實，機械牽張力調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞的增殖、凋亡、遷移以及表型等生物學功能。一般認為，在正常情況下牽張力9％～12％ELONGATION抑制平滑肌細胞的增殖、凋亡等功能，對于維持血管平衡具有重要調(diào)節(jié)作用，而在高血壓、動脈粥樣硬化等病理情況下，異常增高的牽張力＞15％ELONGATION則促進平滑肌細胞的增殖、遷移、凋亡等功能，誘導正常的血管結(jié)構(gòu)改變和功能失調(diào)。近年來國內(nèi)外學者對機械牽張力調(diào)控平滑肌細胞生物學功能的分子機制做了深入研究，認為細胞表面具有力學信號感受作用的各種分子可以將胞外的機械信號轉(zhuǎn)化為胞內(nèi)的化學信號，通過激活一系列的信號通路和轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)各種基因的表達，從而誘導細胞生物學功能改變。但是目前對這一機械信號轉(zhuǎn)導過程中的諸多機制尚不清楚，比如細胞表面是否存在特異性的力學信號感受分子，細胞內(nèi)各信號分子之間的相互作用模式，以及在轉(zhuǎn)錄水平之外的基因表達調(diào)節(jié)機制等。進一步深入了解牽張力調(diào)節(jié)細胞功能的分子機制，對于尋找新的高血壓、冠心病等心血管疾病干預靶點具有重要的意義。MICRNASMIRNAS是一類內(nèi)源性的非編碼小RNA分子，通過抑制靶基因的翻譯或促進MRNA的降解在轉(zhuǎn)錄后水平負調(diào)控基因表達。研究證實，MIRNAS在心血管系統(tǒng)的正常發(fā)育以及多種病理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，MIRNAS也參與機械生物力調(diào)節(jié)血管細胞的生物學效應，與靜止培養(yǎng)相比，剪切力誘導多個內(nèi)皮細胞MIRNAS表達改變，其中MIR19A與MIR23B在剪切力調(diào)控細胞周期中發(fā)揮關鍵作用，MIR92A介導剪切力對內(nèi)皮細胞NO的水平的調(diào)控。但是關于牽張力對血管細胞MIRNAS表達的影響，以及后者在牽張力介導的細胞生物學功能中的作用目前還不清楚。MIR21是近年廣泛研究的一種MIRNA，其在多種實體腫瘤細胞中表達升高，具有顯著的促進細胞增殖、抑制細胞凋亡作用。此外，MIR21在血管細胞中也有豐富表達，并且在損傷血管中表達上調(diào)，促進新生內(nèi)膜的形成。新近的研究發(fā)現(xiàn)，MIR21在內(nèi)皮細胞中的表達受到剪切力的調(diào)節(jié)，并且不同形式的剪切力對MIR21表達的影響是不同的，MIR21分別在剪切力介導的內(nèi)皮炎癥、NO生成中發(fā)揮重要調(diào)控作用。MIR21在血管平滑肌細胞中的表達豐度明顯高于內(nèi)皮細胞中，鑒于MIR21在細胞增殖、凋亡調(diào)節(jié)中的作用以及機械牽張力對平滑肌細胞生物學功能的影響，我們推測牽張力可能通過調(diào)節(jié)MIR21在血管平滑肌細胞中的水平影響細胞功能。目前對MIRNAS的研究多集中在其生物學效應方面，而對MIRNAS本身的表達調(diào)控機制知之甚少，MIR21基因位于蛋白編碼基因之間，具有獨立的啟動子區(qū)域，研究發(fā)現(xiàn)AP1，NFΚB等轉(zhuǎn)錄因子可能參與MIR21表達調(diào)控，但是在牽張力的作用下，參與調(diào)節(jié)MIR21表達的轉(zhuǎn)錄因子尚不明確。深入了解MIRNAS的表達調(diào)控機制有利于系統(tǒng)的認識牽張力調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞功能的分子機制，因此，在本研究中我們也初步探討牽張力調(diào)節(jié)MIR21表達的上游分子機制。研究目的1在體外細胞水平，明確牽張力對血管平滑肌細胞MIR21表達的影響。2明確MIR21在牽張力介導的血管平滑肌細胞增殖與凋亡中的作用。3明確牽張力調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞MIR21表達的分子機制。研究方法1人主動脈平滑肌細胞HASMCS培養(yǎng)HASMCS細胞株購自美國SCIENCELL公司，細胞生長至完全融合后，吸去培養(yǎng)基，用PBS沖洗細胞一遍以去除殘留的血清，然后加入適量預熱的025％胰蛋白酶，在顯微鏡下觀察到細胞細胞變圓后，吸去胰酶，加入新的平滑肌細胞完全培養(yǎng)基吹打均勻，轉(zhuǎn)入新的細胞培養(yǎng)瓶放入含5％CO2的37℃細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。2機械牽張力干預體外培養(yǎng)的HASMCS接種HASMCS至鋪有Ⅰ型鼠尾膠原的FLEXCELL6孔板中105細胞孔，待細胞生長至80％～90％融合時，利用無血清培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)24小時后，更換新的完全培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基，使用FLEXCELL5000細胞牽張力儀給予HASMCS不同強度的牽張力刺激，分組如下110％牽張力組分別給予最大牽拉強度為10％，頻率為1HZ的周期性牽張力分別刺激細胞0、3、6、12、24小時。216％牽張力組分別給予最大牽拉強度為16％，頻率為1HZ的周期性牽張力分別刺激細胞0、3、6、12、24小時。3實時熒光定量PCR檢測MIR21表達水平使用INVITROGEN公司的TRIZOL提取包含MIRNAS的HASMCS總RNA，利用丹麥EXIQON公司的MIRNDNA合成試劑盒和MIRNASSYRBGREENMASTERMIX試劑盒分別進行逆轉(zhuǎn)錄和實時熒光定量PCR反應，小RNAU6作為各樣本MIR21表達水平的內(nèi)參照，每組樣本重復檢測4次。U6及MIR21PCR引物均購自EXIQON公司。4細胞轉(zhuǎn)染利用INVITROGEN公司的LIPOFECTAMINE2000分別轉(zhuǎn)染不同濃度的MIR21INHIBIT和MIMICS，調(diào)節(jié)HASMCSMIR21的表達水平，化學修飾的MIR21INHIBIT和MIMICS均由上海吉瑪公司合成，轉(zhuǎn)染PDCD4表達質(zhì)粒上調(diào)HASMCSPDCD4蛋白水平。轉(zhuǎn)染細胞48小時后，給予細胞牽張力刺激，觀察相應的細胞功能或目的蛋白水平變化。5HASMCS增殖檢測牽張力干預體外培養(yǎng)的HASMCS12小時，利用美國羅氏公司的BRDU細胞增殖檢測試劑盒或細胞計數(shù)儀檢測牽張力對HASMCS增殖的影響轉(zhuǎn)染MIR21INHIBIT或MIMICS48小時后，再給予牽張力干預12小時后，BRDU摻入法和細胞計數(shù)法檢測HASMCS增殖水平，明確MIR21在牽張力介導的HASMCS增殖中的作用。6WESTERNBLOT牽張力刺激HASMCS結(jié)束后，提取胞漿蛋白，測定蛋白濃度后加蛋白上樣緩沖液煮沸5分鐘。取15～20UG蛋白進行SDSPAGE電泳，利用WESTERNBLOT分別檢測P27，PRB，以及PDCD4蛋白表達。每個樣本重復檢測4次，ΒACTIN作為內(nèi)參。7細胞凋亡檢測利用BIPEC公司的ANNEXINVFITCAPOPTOSISDETECTIONKIT檢測HASMCS凋亡情況。牽張力干預結(jié)束后，用胰酶消化的方法收集細胞，每個樣本用400ULBINDINGBUFFER重懸，經(jīng)過15分鐘的ANNEXINVFITC標記，5分鐘PI標記后，在1小時內(nèi)進行細胞流式分析，每個樣本在流式分析中計數(shù)10000個細胞。8實時熒光定量PCR測定PRIMIR21、PREMIR21、PDCD4MRNA水平牽張力刺激HASMCS結(jié)束后，利用TRIZOL提取細胞總RNA。使用日本TAKARA公司的CDNA合成試劑盒將樣本總RNA逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，然后利用TAKARA公司的SYBRGREEN實時定量PCR試劑盒進行PCR反應。PCR引物由上海吉瑪公司合成。PCR反應結(jié)束后得到CT值，并計算2△△CT，ΒACTIN作為PRIMIR21、PREMIR21、PDCD4MRNA表達水平的內(nèi)參。9細胞免疫熒光16％牽張力刺激體外培養(yǎng)的HASMCS3小時后，利用免疫熒光方法觀察CFOS、CJUN的表達變化。牽張力刺激細胞結(jié)束后，免疫染色固定液固定30分鐘，PBS沖洗后加01％TRITONX100室溫下孵育8分鐘，繼之用5％BSA封閉30分鐘，經(jīng)PBS沖洗后4℃條件下分別孵育CFOS，CJUN抗體CELLSIGNALINGTECHNOLOGY1∶200過夜，次日，經(jīng)過熒光二抗孵育1小時，DAPI染核后，在激光共聚焦顯微鏡下，觀察目的蛋白的表達水平。10凝膠遷移實驗EMSA利用EMSA方法檢測16％牽張力對轉(zhuǎn)錄因子AP1與NFΚB活性的影響。牽張力干預平滑肌細胞結(jié)束后，利用PIERCE細胞核蛋白提取試劑盒收集細胞核蛋白，并利用BCA方法檢測核蛋白的濃度。使用T4連接酶在AP1與NFΚB雙鏈核苷酸探針末端標記Γ32PATP，取8UG核蛋白與標記的轉(zhuǎn)錄因子探針及試劑盒其它成分共計20UL預混后，冰上孵育30分鐘，然后用4％非變性膠進行電泳，根據(jù)PIERCEEMSA試劑盒說明書操作具體步驟。11統(tǒng)計學分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤表示，使用SPSS130統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，兩組之間的比較采用非配對T檢驗，多組之間的比較采單因素方差分析，P＜005認為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1機械牽張力對體外培養(yǎng)的人主動脈平滑肌細胞HASMCSMIR21表達水平的影響研究結(jié)果顯示，在無血清條件下，與靜止培養(yǎng)的細胞相比，16％牽張力自6小時開始顯著上調(diào)體外培養(yǎng)的HASMCSMIR21的表達水平，上調(diào)趨勢保持到24小時，表達高峰在12小時P＜001）而10％牽張力對HASMCSMIR21的表達水平?jīng)]有顯著影響P＞005）。在有血清刺激的條件下，16％牽張力仍然持續(xù)上調(diào)MIR21的表達P＜001，但上調(diào)幅度沒有無血清條件下明顯而10％牽張力明顯抑制MIR21的表達，與靜止對照相比，MIR21的表達6小時開始顯著下調(diào)P＜005，12小時下調(diào)最明顯。2MIR21在機械牽張力調(diào)控人主動脈平滑肌細胞增殖中的作用利用BRDU摻入法與細胞計數(shù)的方法檢測MIR21在牽張力調(diào)節(jié)的HASMCS增殖中的作用。實驗結(jié)果顯示，與靜止培養(yǎng)的細胞相比16％牽張力顯著增強HASMCS的增殖水平轉(zhuǎn)染MIR21抑制物INHIBIT抑制MIR21的水平，結(jié)果與MIRNA陰性對照INHIBIT相比，MIR21的表達水平下調(diào)42倍P＜001，而轉(zhuǎn)染MIR21INHIBIT的HASMCS增殖水平顯著下降P＜001。同樣的實驗條件下，利用胰酶消化的方法收集細胞后進行細胞計數(shù)，結(jié)果顯示與BRDU摻入法一致P＜005。由于在含血清條件下，10％牽張力抑制MIR21的表達，轉(zhuǎn)染化學修飾的MIR21類似物MIMICS上調(diào)MIR21的表達水平，結(jié)果顯示MIR21MIMICS升高MIR21的表達70倍P＜001）而BRDU摻入法結(jié)果顯示，與靜止培養(yǎng)的HASMCS相比，10％牽張力顯著抑制細胞的增殖水平P＜001，而轉(zhuǎn)染MIR21MIMICS顯著降低10％牽張力對HASMCS增殖的抑制作用P＜005。WESTERNBLOT結(jié)果顯示16％牽張力抑制細胞周期抑制因子P27的表達，促進PRB的表達P＜001而與轉(zhuǎn)染MIRNA陰性對照INHIBIT相比，MIR21INHIBIT部分逆轉(zhuǎn)16％牽張力對P27，PRB表達的影響P＜001）。3MIR21在機械牽張力介導的人主動脈平滑肌細胞凋亡中的作用利用ANNEXINFITC與PI雙染細胞凋亡試劑盒檢測牽張力對細胞凋亡的影響，結(jié)果顯示與靜止對照組比較，16％牽張力增加體外培養(yǎng)的HASMCS凋亡水平919±066VS133±012，P＜001轉(zhuǎn)染MIR21INHIBIT抑制MIR21的水平，結(jié)果顯示與陰性對照MIRNAINHIBIT相比較，MIR21INHIBIT顯著增強了16％牽張力對HASMCS的促凋亡作用255±161VS938±157，P＜001在靜止培養(yǎng)的HASMCS中，轉(zhuǎn)染MIR21INHIBIT對細胞凋亡沒有顯著的影響。在有血清條件下，對靜止對照組相比較，10％牽張力對HASMCS的凋亡沒有顯著影響P＞005。4PDCD4在16％牽張力介導的人主動脈平滑肌細胞凋亡中的作用利用TAKARACDNA合成與SYBRGREENPCR定量試劑盒檢測16％牽張力對HASMCSPDCDMRNA水平的影響，結(jié)果顯示與靜止對照組相比，16％牽張力增加PDCD的MRNA水平198倍P＜005，而WESTERNBLOT結(jié)果顯示，16％牽張力顯著抑制PDCD的蛋白水平055倍P＜005）。轉(zhuǎn)染MIR21INHIBIT后，16％牽張力對HASMCSPDCD4蛋白水平的抑制作用明顯減輕P＜005。為明確PDCD4在牽張力誘導的HASMCS凋亡中的作用，轉(zhuǎn)染PDCD4表達質(zhì)粒上調(diào)其蛋白表達水平，再給予16％牽張力刺激，細胞流式結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染PDCD4表達質(zhì)粒明顯促進16％牽張力的誘導細胞凋亡作用P＜001）。516％牽張力對人主動脈平滑肌細胞AP1、NFΚB活性的影響利用實時熒光定量PCR的方法檢測16％牽張力對HASMCSMIR21轉(zhuǎn)錄初級產(chǎn)物PRIMIR21，前體PREMIR21水平的影響，結(jié)果顯示對靜止對照相比，16％牽張力分別增加PRIMIR21水平173倍P＜005，PREMIR21水平285倍P＜001。AP1、NFΚB是介導機械牽張力調(diào)控平滑肌細胞生物學功能的重要轉(zhuǎn)錄因子，在特定條件下也參與MIR21的表達調(diào)控。WESTERNBLOT結(jié)果顯示，16％牽張力明顯增加NFΚBP65的磷酸化水平，高峰在牽張力干預后1、3小時，至6小時恢復至靜止對照水平，而16％牽張力對NFΚBP65的蛋白水平?jīng)]有顯著影響16％牽張力持續(xù)引起CJUN的表達水平和磷酸化水平顯著增高，但對CFOS蛋白的表達水平及磷酸化水平?jīng)]有明顯影響。細胞免疫熒光結(jié)果顯示，16％牽張力增加CJUN在細胞核中的表達，而增加CFOS在胞漿中的表達，CFOS在胞核中的表達沒有顯著變化。EMSA結(jié)果顯示，16％牽張力顯著增加HASMCSAP1與NFΚB的活性P＜005。6AP1、NFΚB在16％牽張力誘導HASMCSMIR21表達中的作用利用LIPO2000轉(zhuǎn)染CJUNSIRNA下調(diào)HASMCSCJUN的表達，16％牽張力干預HASMCS前1小時，加入NFΚB抑制劑SN50抑制其活性P＜001。結(jié)果顯示，CJUNSIRNA明顯抑制HASMCS中CJUN的表達，16％牽張力誘導的AP1活性顯著下降P＜001。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，CJUNSIRNA抑制16％牽張力誘導的MIR21表達P＜001，而SN50對16％牽張力誘導的MIR21表達沒有明顯作用P＞005。結(jié)論116％機械牽張力上調(diào)人主動脈平滑肌細胞MIR21的表達，而在有血清條件下，10％牽張力抑制MIR21的表達水平。2MIR21參與介導機械牽張力調(diào)節(jié)人主動脈平滑肌細胞增殖與凋亡的作用。3機械牽張力通過增強轉(zhuǎn)錄因子AP1CJUN的活性上調(diào)人主動脈平滑肌細胞MIR21表達。

簡介：蘇州大學碩士學位論文惡性血液病患者侵襲性曲霉菌感染的早期抗原和分子生物學診斷研究姓名徐明珠申請學位級別碩士專業(yè)血液病學指導教師孫愛寧20090501惡性血液病患者侵襲性曲霉菌感染的早期抗原和分子生物學診斷研究中文摘要為75．1％，陰性預測值為100％，三者聯(lián)合，診斷的敏感度明顯提高，特異度僅輕度下降。4本研究中的前瞻性研究發(fā)現(xiàn)，三種檢測方法陽性結(jié)果出現(xiàn)均比臨床痰培養(yǎng)及典型影像學表現(xiàn)要早表3．6，REALTIMEPCR結(jié)果提示陽性較GM，BG抗原檢測要提前，但T檢驗盧O．824，戶O．641，差異均無統(tǒng)計學意義。538例完成針對曲霉菌感染搶先治療的患者，按療效分為有效組及無效組，分別于靜脈抗真菌藥物使用前一3、0、3、7、1L、15D，6個時點檢測GM，BG，CT均值，結(jié)果如下A．治療有效組GM值呈下降趨勢并降至正常，治療無效組GM值反而上升。對無效組與有效組在不同檢測時點GM值總體分布位置進行WILCOXON秩和檢驗。有效組與無效組在治療前GM值分布無差異PO．864，在治療7D后其檢測值分布差異有統(tǒng)計學意義P0．05，治療后在各檢測時點其CT值差異亦無統(tǒng)計學意義PO．05。因此，動態(tài)檢測GM，BG抗原對抗真菌療效的評價有著一定的意義，而動態(tài)監(jiān)NCT值對評價療效無顯著性意義。結(jié)論血清BG，GM抗原檢測以及實時熒光定量PCR可以為早期診斷IA提供有力證據(jù)，聯(lián)合BG，GM抗原兩種檢測方法有利于判斷假陽性試驗結(jié)果，動態(tài)檢測GM、BG抗原水平，有利于判斷療效及預后；REALTIMEPCR，以標本兩孔CT均值430定義為陽性，可以獲得較高的敏感度及特異度，動態(tài)監(jiān)NCT值對評價療效無顯著性意義。關鍵詞曲霉??；血液??；半乳甘露聚糖；1，3一BD葡聚糖；REALTIMEPCR；診斷H作者徐明珠指導老師孫愛寧