簡介：目的研究體外培養(yǎng)日本血吸蟲成蟲細胞試圖引起血吸蟲成蟲細胞的分裂尋求引起血吸蟲細胞增殖分裂的有效物質(zhì)為獲得日本血吸蟲體外培養(yǎng)無限增殖的細胞系提供參考和依據(jù)。模擬自然界的疫水富集毛蚴并提取毛蚴基因組DNA建立一種靈敏、特異的痕量檢測日本血吸蟲毛蚴的PCR方法。研究日本血吸蟲DNA序列片段的2D圖形表示和3D圖形表示從不同角度反映隱藏在DNA序列中的生物學上的特征來尋找所隱藏的生物學的基本規(guī)律為下一步在生物學的實驗中驗證規(guī)律指導實驗并發(fā)掘更深層次生命的本質(zhì)奠定基礎。方法取感染7～8W日本血吸蟲的小鼠頸椎脫臼法處死無菌條件下挑取日本血吸蟲成蟲若干條以20條為一組剪碎后用改良日本血吸蟲細胞體外培養(yǎng)方法培養(yǎng)OLYMPUS倒置顯微鏡下拍照記錄實驗結果。隨機抽取兩個培養(yǎng)瓶離心收集細胞制備日本血吸蟲染色體OLYMPUSCX31顯微鏡下觀察鑒定日本血吸蟲成蟲細胞的存活狀況。把培養(yǎng)瓶隨機分為三組分別向其中加促細胞分裂物質(zhì)BFGFIL2和CONA并對培養(yǎng)瓶依次做標記放在相同的環(huán)境和條件中進行培養(yǎng)定點定位連續(xù)觀察體外培養(yǎng)日本血吸蟲成蟲細胞的生長狀況并用OLYMPUS數(shù)碼相機在OLYMPUS倒置顯微鏡下進行顯微攝影。取感染6～8W日本血吸蟲的小鼠肝臟碾磨后沉淀孵化并利用間接連續(xù)離心法富集毛蚴采用蛋白酶K苯酚法提取毛蚴基因組DNA。登陸GENBANK查詢獲得日本血吸蟲保守序列18S小亞基單位核糖體脫氧核酸18SRDNA基因利用引物設計軟件PRIMERPREMIER50和OLIGO6自主設計一對引物建立水體檢測日本血吸蟲毛蚴的PCR方法。梯度稀釋血吸蟲毛蚴基因組DNA進行PCR方法的靈敏性試驗設置陰性對照PCR產(chǎn)物通過電泳鑒定。選取平面直角坐標系的兩個坐標軸的4個方向分別代表4種核苷酸堿基來作DNA序列片段的2D圖形表示。畫出相互間隔一個單位的4條水平線并讓ACGT這4種堿基分別與這4條水平線對應對應堿基描點用直線連接所有相鄰的點最終得到DNA序列片段的“四水平線”圖。將4個三維空間中的向量分別賦予DNA序列的4種堿基100→A010→C001→G和111→T。根據(jù)向量來制作DNA序列片段的點的坐標。再用直線連接相鄰的點而得到DNA序列片段的3D曲線。最后將DNA序列片段的3D曲線投影到2維平面比較其形狀并進行分析。找出DNA序列的特征序列構建基于特征序列的DNA序列片段的“雙水平線”圖。構建DNA序列片段的有向圖作圖方法同前面的DNA序列片段的2D圖形表示一樣只不過在連接相鄰的點時用的是有向箭頭而非線段。結果1血吸蟲成蟲細胞在OLYMPUS倒置顯微鏡下呈球形、色澤鮮亮不添加任何促細胞分裂物質(zhì)的情況下細胞數(shù)量起初隨時間的增長而有所增多。但隨著時間進一步推移觀察定位的血吸蟲細胞卻“不增殖、不傳代”幾乎很難看到細胞密度的明顯變化。制備日本血吸蟲染色體在油鏡下觀察發(fā)現(xiàn)隨機抽取的兩瓶細胞均存在分裂中期相并且染色體數(shù)目N8。不同的促細胞分裂物質(zhì)對血吸’蟲成蟲細胞的影響不完全相同。添加BFGF的血吸蟲細胞增殖并不明顯而添加IL2和CONA的血吸蟲細胞個數(shù)明顯增多。其中添加IL2的血吸蟲細胞增殖個數(shù)最多最為明顯。2PCR擴增日本血吸蟲毛蚴得到特異性DNA片段片段長度為463BP陰性對照組無擴增產(chǎn)物。PCR法可檢測出日本血吸蟲毛蚴DNA的最低濃度為625PGΜL。3依次得到了DNA序列片段的2D圖形表示、“四水平線”圖、3D曲線、“雙水平線”圖和DNA序列片段的有向圖并進行比較分析。結論在不添加任何促細胞分裂物質(zhì)的情況下日本血吸蟲成蟲細胞體外培養(yǎng)“不增殖、不傳代”幾乎很難看到細胞密度的明顯變化；促細胞分裂物質(zhì)BFGF對日本血吸蟲成蟲細胞的增殖沒有明顯促進作用而IL2和CONA對日本血吸蟲成蟲細胞的增殖有明顯促進作用并且IL2的促進作用最為明顯。建立的水體檢測日本血吸蟲毛蚴的PCR方法靈敏、特異具有一定的預警作用。DNA序列片段的2D圖形表示和3D圖形表示能從不同角度反映隱藏在DNA序列中的生物學上的特征。DNA序列片段的2D圖形表示由于簡并現(xiàn)象導致信息丟失但DNA序列片段的3D曲線卻避免了因與自身相交或重疊而導致的簡并現(xiàn)象。DNA序列片段的有向圖表示的簡并度比相應無向圖的低得多甚至在某些時候下將不再出現(xiàn)簡并現(xiàn)象。而且在有向圖中我們所看到的實際上正是沿著生物序列“游走”時的“歷史”。因此有向圖更容易激發(fā)人們的形象思維從而有利于人們迅速地抓住生物序列的特征。

簡介：中國醫(yī)科大學博士學位論文潰瘍性結腸炎相關性大腸癌的分子生物學研究姓名王赫申請學位級別博士專業(yè)內(nèi)科學指導教師李巖200341得潰瘍性結腸炎組織中的腺細胞和炎性細胞與間質(zhì)細胞作為對照；上述方法獲得的細胞用一步法提取DNA。應用酚一氯仿法提取散發(fā)性大腸癌中癌組織和相應的淋巴結組織作為對照的DNA。應用聚合酶鏈式反應一單鏈構像多態(tài)性方法IOCRSSCP檢測潰瘍性結腸炎、潰瘍性結腸炎伴不典型增生及潰瘍性結腸炎相關性大腸癌組織中的微衛(wèi)星狀態(tài)6個位點LNSCA、MDF41、D18S47、D2S123、D3S1317、D13S158。結果判定標準與正常組織相比，若腫瘤組織DNA出現(xiàn)電泳帶的移位、缺失或額外新的電泳帶即確定為該位點微衛(wèi)星不穩(wěn)定。分析組間差異性及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與HMSH2蛋白表達缺失的相關性。第三部分潰瘍性結腸炎相關性大腸癌組織中HMSH2基因啟動子區(qū)域甲基化測定實驗組潰瘍性結腸炎伴不典型增生7例，潰瘍性結腸炎相關性大腸癌8例；對照組散發(fā)性大腸癌30例。應用DNA甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶HPAⅡ消化DNA，37℃水浴4小時后，HMSH2基因啟動子區(qū)域PCR擴增。甲基化分析取8VAPCR擴增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上電泳，若出現(xiàn)擴增帶107BP，則所檢測的組織存在甲基化，否則為非甲基化。同樣的標本在無HPAⅡ酶切情況下作相同的處理作為對照。分析HMSH2基因啟動子區(qū)域甲基化與HMSH2蛋白表達缺失的相關性。統(tǒng)計學方法用X2檢驗，分析組間差異性，檢驗水準A0．05雙側，全部數(shù)據(jù)用SPSS10．0FORWINDOWS95軟件包進行分析，P0．05時為差異有統(tǒng)計學意義，P0．01時為差異顯著。結果P53蛋白過表達的陽性率在潰瘍性結腸炎、潰瘍性結腸炎伴不典型增生、潰瘍性結腸炎相關性大腸癌、散發(fā)性大腸癌、慢性結腸炎等不同組織中分別為4％、44．44％、85．71％、60．61％和O％。統(tǒng)計學分析表明P53蛋白過表達率在潰瘍性結腸炎與慢性結腸炎、潰瘍性結腸炎相關性大腸癌與散發(fā)性大腸癌、潰瘍性結腸炎伴不典型增生與潰瘍性結腸炎相關性大腸癌組間的差異無統(tǒng)計學意義。但在潰瘍性結腸炎與潰瘍性結腸炎伴不典型增生組問的差異有統(tǒng)計學意義P0．05，潰瘍性結腸炎與潰瘍性結腸炎相關性大腸癌組間的差異顯著PO．01O2

簡介：廈門大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學位論文是本人在導師指導下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當方式明確標明，并符合法律規(guī)范和廈門大學研究生學術活動規(guī)范試行。另外，該學位論文為彩阻碼課題組的研究成果，獲得幣陋碼課題組經(jīng)費或?qū)嶒炇业馁Y助，在啦約實驗室完成。請在以上括號內(nèi)填寫課題或課題組負責人或?qū)嶒炇颐Q，未有此項聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。聲明人簽名T沂弘彥年6月／鄉(xiāng)日目錄目錄目錄■I摘要VII第一章前言。111染色體不穩(wěn)定性與染色體異倍化現(xiàn)象1111簡介1112中心體的復制和形成2113中心體增殖復制導致染色體不穩(wěn)定性的發(fā)生2114細胞對異常數(shù)目中心體的反應4115中心體額外增殖導致染色體異倍化412絲氨酸、蘇氨酸激奠POLOLIKEKINASE15121簡介5122PLKL的基因與蛋白結構功能6123調(diào)控PLKI的方式7124有絲分裂G2期到M期的轉換過程中PLKL的功能813微管蛋白1R與環(huán)狀蛋白復合體丫TURC13131簡介13132徽管蛋白丫復合體與微管成核機制。13133徽管蛋白1，復合體在細胞周期中的定位與功能。16134徽管蛋白Y復合體對微管正極結構的動態(tài)調(diào)控1714多功能的架構蛋白AXIN18141簡介18142AXIN的基因型與蛋白結構18143AXIN的生物學功能20144AXIN的調(diào)控方式2615立置背景28

簡介：南開大學博士學位論文Ⅰ前列腺癌微轉移分子生物學檢測指標的研究Ⅱ基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制因子在前列腺癌中異常表達的研究姓名趙洪申請學位級別博士專業(yè)遺傳學指導教師張琚200241南開大學博士研究生畢業(yè)學位論文ABSTRACTOBJECTIVETOSTUDYTHEHIGHSENSITIVITYANDSPECIFICITYMARKERANDMETHODFORDETECTINGTHEMICROMETASTASISOFPROSTATECANCER,INORDERTOALLOWMOREPRECISESTAGEANDPROGNOSISOFPATIENTSWITHPROSTATECANCER．METHODSPERIPHERALBLOODWASOBTAINEDFROM32HEALTHYPERSONS，33PATIENTSSUFFERINGFROMBPHAND51PATIENTSWITHPROSTATECANCER20WITHPROSTATECONFINEDTUMOR；17WITHEXTRAPROSTATICPROSTATECANCER；14WIMMETASTATICDISEASE．THEMONONUCLEARCELLSAREISOLATEDBYFICOLLGRADIENT．THEENTIRERTNESTEDPERASSAYFORPSA，HK2ANDPSMASMARKERSWASPERFORMEDTODETECTCIRCULATINGPROSTATECELLS．THERESTLLTSOFRTNESTEDPERASSAYWERECOMPAREDWITHCLINICALPARAMETERSANDANALYZEDBYSTATISTICSMEMOD．RESULTSRTNESTEDPERPOSITIVITYFORPSA，HK2ANDPSMARE52．94％，43．14％AND68．63％RESPECTIVELYINPROSTATECANCERGROUP，AND29．23％，7．69％AND4．62％RESPECTIVELYINCONTROLGROUP．THEREISAHIGHLYSIGNIFICANTDIFFERENCEP0．01TODISTINGUISHPATIENTSWITHPROSTATECANCERFROMBPHPATIENTSANDHEALTHYMENBYDETECTINGTHETHREEMARKERS．RTNESTEDPERSENSITIVITYFORPSMWAS74．2％INPATIENTSWITHMETASTATICDISEASECD．HIGHERTHANPSA61．29％、HK256．61％．THERTNESTEDPCRPOSITIVITYOFPSAANDHK2INCREASEDASCLINICALSTAGESEVOLVED，BUTDIDNOTEXHIBITSTATISTICALSIGNIFICANCE．THERTNESTEDPERPOSITIVITYFORPSMWASHIGHERTHANTHATOFPSAANDHK2INEACHSTAGE，ANDINCREASEDASCLINICALSTAGESEVOLVED．THEREISASIGNIFICANTDIFFERENCECOMPAREDTHESTAGEOFPATIENTSWITHRTNESTEDPERPSMPOSITIVITYP0．05．THETESTHASASSAYSENSITIVITYOFATLEASTLLNCAPCELLPSA，HK2ANDPSMPOSITIVECONTR01PER107LEUKOCYTESFORDETECTIONOFPSA，HK2ANDPER108LEUKOCYTESFORDETECTIONOFPSM．CONCLUSIONTHESENSITIVITYANDSPECIFICITYOFRTNESTEDPERFORPSMASAMARKERISHIGHERTHANTHATFORPSAANDHK2．THERESULTSHAVESHOWNACORRELATIONBETWEENRT．NESTEDPCRPSMPOSITIVEANDSTAGINGDIAGNOSIS．PSMRTNESTEDPERMETHODTODETECTTHEMICROMETASTASISOFPROSTATECANCERMAYHAVEAGREATERVALUEINPROSTATICCANCER’SDIAGNOSIS，THERAPYCHOICEANDPROGNOSTICEVALUATION．．KEYWORDSPROSTATESPECIFICANTIGEN；HUMANKALLIKREIN2PROSTATESPECIFICMEMBRANEANTIGEN；RTNESTEDPCRPROSTATECANCER2

簡介：點擊查看更多枸櫞酸桿菌中質(zhì)粒介導喹諾酮耐藥基因的分子生物學特征及qnrB24基因分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多地奧心血康對血管內(nèi)皮細胞凋亡等影響的分子生物學研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：蘇州大學博士學位論文膠質(zhì)瘤干/祖細胞的細胞與分子生物學特征研究姓名吳銀艷申請學位級別博士專業(yè)神經(jīng)外科學指導教師黃強20080401膠質(zhì)瘤干／祖細胞的細胞與分子生物學特征研究中文摘要第二部分原發(fā)和復發(fā)膠質(zhì)瘤干／祖細胞在裸小鼠腦內(nèi)移植瘤的特征目的人源膠質(zhì)瘤干／祖細胞HUMANGLIOMASTEMCELLS／PROGENITORS，HGSCPS能分化成親本腫瘤細胞的全部亞型，在免疫缺陷動物腦內(nèi)具有高致瘤性已得到公認，但其侵襲性與親本腫瘤的關系以及GSCPS與移植瘤組織中血管細胞的關系尚未明確。本研究探討源自同一患者原發(fā)和復發(fā)腫瘤組織的GSCPS在裸小鼠顱內(nèi)原位移植瘤的特征以及GSCPS移植瘤組織中的腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞的關系，旨在證明GSCPS裸小鼠原位移植瘤的侵襲性與親本腫瘤的關系和GSCPS在腦腫瘤組織重構中所起的作用。方法將已在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)的原發(fā)和復發(fā)HGSCPS球在立體定向儀輔助下接種到裸小鼠右腦尾狀核。實驗鼠出現(xiàn)惡病質(zhì)時處死，取移植瘤組織常規(guī)石蠟包埋、切片、HE、人類白細胞抗原HUMANLEUCOCYTEANTIGEN，HLA和基質(zhì)金屬蛋白酶．1MATRIXMETALLOPROTEINASE．1，MMPL染色，觀察其致瘤率、侵襲性和血管來源細胞。結果所接種的40只裸小鼠在30天內(nèi)全部因腫瘤而發(fā)病。無論是原發(fā)還是復發(fā)HGSCPS在裸小鼠腦內(nèi)接種部位里浸潤性生長的同時，還散布于其它區(qū)域。但兩者的侵襲形式不盡相同，原發(fā)者在接種側半球，呈團塊，局限于腦實質(zhì)；復發(fā)者，還浸潤軟腦膜和對側半球，呈粟粒樣分布。MMPL細胞的分布，復發(fā)者比原發(fā)者要密集得多。HLA染色顯示移植瘤中存在人源腫瘤細胞直接構成的血管。結論HGSCPS除了具有高致瘤性，還具有高侵襲性。復發(fā)的HGSCPS侵襲性更強，除了與MMPL高表達有關，還說明HGSCPS在侵襲性上具有親本腫瘤特異性。在HGSCPS的裸小鼠移植瘤中，腫瘤細胞在宿主腦內(nèi)廣泛分布并構成了血管。GSCPS可能轉分化成腫瘤血管細胞，在腦膠質(zhì)瘤組織重構中起重要作用。關鍵詞膠質(zhì)瘤干／祖細胞；移植瘤；致瘤性；侵襲性；組織重構第三部分克隆基因工程鼠的膠質(zhì)瘤干／祖細胞和神經(jīng)干／祖細胞目的據(jù)推測膠質(zhì)瘤干虛細胞GLIOMASTEMCELLS／PROGENITORS，GSCPS源于神經(jīng)干／祖細胞NEURALSTEMCELLS／PROGENITORS，NSCPS，但缺少實驗根據(jù)?？寺∫呀?jīng)發(fā)生膠質(zhì)瘤的基因工程鼠的GSCPS和NSCPS以及同品系胎鼠的NSCPS，旨在為進一步研究兩者淵源關系提供實驗用細胞。LI

簡介：研究背景手足口?。℉FOOTMOUTHDISEASEHFMD）是由人腸道病毒（HUMANENTEROVIRUSHEV）引起的常見兒童急性傳染病，以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現(xiàn)皮疹為主要臨床特征，少數(shù)病例出現(xiàn)腦炎、心肌炎、肺水腫、急性弛緩性麻痹等嚴重并發(fā)癥，極少數(shù)情況下可引起死亡。HFMD可由許多血清型的HEV引起，但最主要的病原體為人腸道病毒71型（HEV71）和柯薩奇病毒A組16型（CVA16）。自1981年HFMD在中國上海首次報道以來，全國各地均有HFMD暴發(fā)及散發(fā)的報道。內(nèi)蒙古自治區(qū)自2007年首次報道HFMD以來，疫情基本呈逐年遞增的趨勢，而且HFMD的重癥病例和死亡病例的發(fā)病率也呈逐年增加，截至2010年全年累計報告HFMD病例18944例，重癥病例247例，死亡13例。然而到目前為止，HFMD的致病機理還不確定，而且還沒有安全有效的疫苗和藥物用于預防和控制本病，因此加強該病的流行病學、病原學及基因特征和病理學研究具有非常重要的意義。為了更好的預防和控制HFMD，我們開展了相關內(nèi)容的基礎研究。研究目的為了了解內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行情況，了解HFMD主要致病病原體的流行本底，更好地預防和控制HFMD，我們開展了相關內(nèi)容的和應用基礎研究，旨在闡明和揭示內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學特點、HEV71和CVA16分子流行病學特征和HEV71重癥病例的病理學特點。主要方法（1）采用描述性流行病學方法對2008～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學特征進行分析。（2）應用REALTIMEPCR方法對2010年12個盟市和2011年部分盟市門診疑似病例的標本進行病原鑒定，然后進行病毒分離，應用REALTIMEPCR方法對病毒分離物進行鑒定，對鑒定為其它HEV的陽性分離物進行VP4編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的HFMD患者臨床標本中分離到的HEV71隨機選取代表株進行VP1編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析，應用MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與HEV71其它各基因型和基因亞型的代表株的親緣進化關系；從選取的HEV71代表株中按年代和癥狀不同隨機選取12株進行基因組全長測序和分析，應用SIMPLOT軟件分析和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71代表株與A組其他腸道病毒的相似性和親緣進化關系。（3）對2010年在12個盟市和2011年在部分盟市門診采集的疑似HFMD病例的臨床標本進行病毒分離，應用REALTIMEPCR方法對病毒分離物進行CVA16鑒定。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的手足口病患者臨床標本中分離到的CVA16隨機選取代表株進行VP1編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析，與CVA16其它各基因型和基因亞型的代表株和內(nèi)蒙古2007年和2008年的代表株構建親緣性進化樹；從選取的CVA16代表株中按照癥狀的不同選取6株進行基因組全長序列測定和分析，應用SIMPLOT軟件和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行CVA16代表株與其他腸道病毒的相似性和親緣進化關系。（4）對2010年河南省1例HEV71引起的死亡病例進行尸體剖檢，并將多個組織分別進行福爾馬林處理和液氮保存，并分別進行病理學和免疫組織化學檢測，初步探討HEV71的致病機理。研究結果（1）2010～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的發(fā)病率不同年份、月份和盟市之間不同，統(tǒng)計學分析差異顯著；發(fā)病高峰主要集中在6～8月，比南方城市的高峰期推遲一個月；發(fā)病人群主要集中在1～10歲尤其是1～4歲，占總發(fā)病人的8233；男性發(fā)病率高于女性發(fā)病率，構成比為151，統(tǒng)計學分析差異顯著，同時盟市人口的發(fā)病率比旗縣人口的發(fā)病率高，統(tǒng)計學分析差異顯著。（2）內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的主要病原是CVA16和HEV71，同時從個別HFMD患者的臨床標本中分離出10株其他腸道病毒，重癥病例中以HEV71為主；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株屬于C4基因亞型C4A進化分支，并且存在多個傳播鏈；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與2008年北京代表株親緣關系比2007年內(nèi)蒙古代表親緣關系近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71不是獨立進化的，而是與中國流行的HEV71在共同進化；2010～2011年流行的HEV71代表株與2008臺灣代表株來源于同一個原始株，經(jīng)重組和親緣進化關系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010～2011年流行的HEV71代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結構蛋白區(qū)為主。（3）內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16代表株均屬于B1基因亞型的兩大進化分支B1A和B1B，并且存在多個傳播鏈，有兩條優(yōu)勢傳播鏈；與2009年山東、北京和2010年河南的代表株親緣關系很近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16不是獨立進化的，而是與中國流行的CVA16共同進化；2010年B1B分支的CVA16與2009年上海代表株來源于同一個原始株，屬于B1A進化分支的CVA16與2011年泰國的代表株來源于同一個原始株，同時B1B分支的CVA16進化的比較快；經(jīng)相似性和親緣進化關系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010年流行的CVA16代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結構蛋白區(qū)為主，而且非結構蛋白編碼的核苷酸與HEV71原型株同源性很近，提示CVA16與HEV71發(fā)生重組。（4）HEV71死亡病例尸體眼觀病變主要表現(xiàn)為肺淤血、水腫，支氣管管腔內(nèi)可見灰白色黏稠液體；腦水腫，蛛網(wǎng)膜下腔充血、出血。主要病理組織學病變?yōu)槟X脊髓發(fā)生水腫、管套形成、衛(wèi)星現(xiàn)象、嗜神經(jīng)元現(xiàn)象，推測HEV71引起了非化膿性腦脊髓炎；肺水腫、肺泡結締組織增生、肺泡腔內(nèi)透明膜形成、粉紅色漿液滲出、巨噬細胞和淋巴細胞浸潤、肺泡Ⅱ型細胞脫落，推測HEV71引起了病毒性肺炎。該病例的主要受害器官是腦脊髓和肺臟。免疫組化檢測，不但在神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號，還在肺、支氣管、闌尾、胃、十二指腸、肝、空腸、脾、胸腺、胰、腎組織細胞中發(fā)現(xiàn)陽性信號。據(jù)此推測HEV71是一種泛嗜性病毒；該病毒可通過多種細胞內(nèi)增殖（包括血管內(nèi)皮細胞增殖）經(jīng)血液循環(huán)在機體內(nèi)完成擴散；主侵器官是腦脊髓和肺臟，直接致死原因是神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂和呼吸衰竭。結論（1）本文闡明了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學規(guī)律，闡明了HFMD的發(fā)病時間、易感人群和地區(qū)分布與全國其它地區(qū)的異同點，以及其自身的規(guī)律性。（2）本文確定了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的病原譜以HEV71、CVA16為主，和兼有其他腸道病毒如CVB4參與致本病。（3）揭示了CVA16和HEV71的主要分子生物學特征（包括分子流行病學、病毒基因特征、進化關系等）。（4）豐富了HEV71致病的病理學特征，并在神經(jīng)組織、肺臟、支氣管、胃腸道、肝臟、胰腺、腎臟和脾臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號。

簡介：分類號R4452密級學位類別科學學位口專業(yè)學位回／學校代碼學號學科門類L00622010702292醫(yī)學又肄鼉科袁警TL囊麓JL麓麓薯蠢L驀蠢ILL罐麓I垤L爆萋1I髻碩士學位論文刑LASTER’SDISSER『I’ATION論文題目乳腺癌動態(tài)增強MM表現(xiàn)與分子生物學指標的相關性研究TITLESTUDYONCORRELATIONOFDYNAMICCONTRASTENHANCEDMAGNETICRESONANCEIMAGINGFEATURESANDMOLECULARBIOLOGYMARKERSINBREASTCANCER一級學科臨床醫(yī)學二級學科影像醫(yī)學與核醫(yī)學論文作者安麗華指導教師陳東風導師組成員王少春孫新海天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要目的分析乳腺癌動態(tài)增強MRJ表現(xiàn)與分子生物學指標雌激素受體ESTROGENRECEPTORER、孕激素受體PROGESTERONERECEPTORPR、人表皮生長因子受體2HUMANEPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR2，HER2、核增殖標志物KI一67表達的相關性。以期通過DCEM砒表現(xiàn)揭示腫瘤的生物學行為，并為腫瘤的預后評估及臨床治療方案的選擇提供影像學參考。從而提高動態(tài)增強磁共振檢查在臨床診療中的應用價值。方法收集我院2011年04月2013年08月術前行動態(tài)增強磁共振檢查，并經(jīng)手術病理證實的乳腺癌53例共55個腫塊，檢查前、術前均未行放、化療治療。采用德國西門子30T超導磁共振掃描儀，常規(guī)行T1加權成像T1WEIGHTEDIMAGING，T1WI、T2加權成像T2WEIGHTEDIMAGING，T2WI及動態(tài)增強掃描，觀察病變增強后的形態(tài)學特征腫塊大小、形態(tài)、邊緣、時間信號強度曲線TIMESIGNALINTENSITYCURVE，TIC類型、強化形式、早期增強率等。免疫組化染色測定分子生物學指標ER、PR、HER2、KI67的表達情況。分析乳腺癌動態(tài)增強磁共振DYNAMICCONTRASTENHANCEDMAGNETICRESONANCEIMAGING，DCEMRI表現(xiàn)與分子生物學指標的相關性。所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSSL90軟件處理，采用非參數(shù)統(tǒng)計中SPEARMAN等級相關檢驗，P005，腫塊越大，其鼬67陽性表達率越高。2腫塊形態(tài)與HER2陽性表達呈正相關R0305，P005，在類圓形、分葉形及不規(guī)則形腫塊中，其HER2、KI67的陽性表達率是依次增高的，腫塊傾向于分葉形、不規(guī)則形時，其HER2、飚67陽性表達較高。3腫塊邊緣與ER、PR陽性表達呈正相關R值分別為0288，、0294，P005，即

簡介：銀杏聚戊烯醇類化合物包括游離聚戊烯醇PPS和聚戊烯醇乙酸酯PPAS，是銀杏葉中除類黃酮和萜內(nèi)酯外的又一類重要次生代謝產(chǎn)物，對人類具有重要的藥用和保健作用。目前關于銀杏聚戊烯醇的研究主要集中在成分分析和含量測定上，對于其生物合成相關酶基因的克隆與表達尚未見研究。本文以銀杏不同生長時期的葉片（510月份）以及不同組織器官（葉、花、果實和根）為材料，測定和分析各器官間PPS的含量，克隆銀杏PPS合成的相關基因CPT、PT、FPS，研究銀杏PPS合成關鍵基因CPT的表達情況。主要研究結果如下1、對銀杏不同生長時期雌雄葉片中的PPS含量進行分析，發(fā)現(xiàn)在不同生長時期雌雄葉片中均可以檢測到PPS的存在，其中雄葉的含量在32092195438ΜGG1FW之間，雌葉的含量在40193229167ΜGG1FW之間。2、對銀杏雄株不同生長時期的幼葉和老葉的PPS含量進行分析，結果表明，幼葉的含量在48030196189ΜGG1FW之間，老葉的含量在32092100403ΜGG1FW之間，不同時期均為幼葉高于老葉。3、對銀杏不同器官間的PPS含量進行分析，發(fā)現(xiàn)不同器官均檢測到PPS的存在，但含量不同。其中，根中的含量為3573ΜGG1FW，花粉中的含量為5805ΜGG1FW，均明顯低于果實（54531ΜGG1FW）和葉片138962ΜGG1FW。4、以不同生長時期銀杏雌株葉片為材料，比較了CTAB法、乙二醇丁醚法和改良TRIZOL法提取銀杏葉片RNA的效果，結果表明改良TRIZOL法獲得的RNA濃度和產(chǎn)率均較高，可滿足后續(xù)分子生物學研究。5、根據(jù)不同植物順式異戊烯基轉移酶CPT基因的保守區(qū)序列，設計PCR引物，采用RTPCR和RACE技術，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1210BP的CPT基因全長CDNA。該基因789BP的開放閱讀框F編碼262個氨基酸，與其他植物CPT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBCPT，GENEBANK登錄號為JN108023。6、根據(jù)不同植物異戊烯基轉移酶PT基因的保守區(qū)序列，設計PCR引物，采用RTPCR和RACE技術，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1646BP的PT基因全長CDNA。該基因750BP的F，編碼249個氨基酸，與其他植物PT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBPT，GENEBANK登錄號為JQ303336。7、根據(jù)GENBANK中其它植物法尼基焦磷酸合成酶FPS基因序列設計引物，以銀杏葉片RNA為模板，采用3RACE方法擴增得到CDNA3端部分序列。該CDNA3端部分長701BP，包含一個316BP的F，3端有385BP的非翻譯區(qū)UTR并具有完整的POLYA尾巴，編碼104個氨基酸，與其他植物FPS基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBFPS，GENEBANK登錄號為JQ309808。8、對銀杏不同器官CPT基因相對表達水平研究表明，CPT基因的表達水平與不同器官中PPS的合成與積累變化趨勢一致，但不同發(fā)育時期葉片中CPT基因的表達水平與PPS的變化動態(tài)不一致。

簡介：目的MIRNAMICRIBONUCLEICACID，微小核糖核酸是一種單鏈非編碼小分子RNA（RIBONUCLEICACID，核糖核酸），在基因表達調(diào)控方面具有廣泛和普遍的作用，但目前對其在骨折愈合與不愈合中的調(diào)控作用尚知之甚少。本研究擬首先篩選萎縮性骨不連修復組織中異常表達的MIRNA種類，并通過生物信息學方法預測表達上調(diào)MIRNA的成骨功能相關靶基因，再從細胞水平驗證萎縮性骨不連組織中表達上調(diào)MIRNA對預測靶基因的調(diào)控作用，從而闡明MIRNA在萎縮性骨不連發(fā)病過程中的調(diào)控作用及其分子生物學機制，為骨不連的基礎和臨床研究提供理論和實踐依據(jù)。方法（1）以臨床患者萎縮性骨不連修復組織（A組，3例）與正常骨折愈合后內(nèi)固定鋼板取出時鋼板周圍骨痂組織（B組，3例）為研究對象，采用EXIQONMIRCURYLNAMICRNA芯片110版對各組織中提取的RNA進行MIRNA篩選分析。在篩選出萎縮性骨不連組織中異常表達的MIRNA后，采用熒光QRTPCR（QUANTITATIVEREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION，實時定量聚合酶鏈反應）對芯片結果中A組表達上調(diào)的MIRNA在兩種組織的表達水平進行驗證，并采用瀏覽計算機預測數(shù)據(jù)庫的生物信息學方法預測其可能的靶基因，探尋MIRNA可能參與的骨折愈合和萎縮性骨不連相關病理生理過程。（2）上調(diào)MIRNA與預測靶基因關系的驗證取人骨髓全血，離心分離HBMSCS（HUMANBONEMESENCHYMALSTEMCELLS，人骨髓基質(zhì)干細胞），傳代培養(yǎng)。將人工合成的四種表達上調(diào)MIRNA的雙鏈小RNA轉染入第四代HBMSCS，48小時后提取細胞總RNA，采用QRTPCR、WB（WESTERNBLOTTING，蛋白印跡）、雙熒光素酶報告基因檢測等多種方法，驗證MIRNA對預測靶基因的作用，確認MIRNA在萎縮性骨不連中的具體調(diào)控作用和分子生物學機制。（3）MIRNA和相應靶基因在誘導HBMSCS成骨分化過程中表達水平及功能的相關研究采用成骨誘導培養(yǎng)液誘導HBMSCS成骨分化的方法，觀察在誘導HBMSCS成骨分化過程中不同時間點（012H1D2D4D7D14D）相應MIRNA、靶基因MRNA（MESSENGERRIBONUCLEICACID，信使核糖核酸）與蛋白表達水平的變化趨勢，進一步驗證這些上調(diào)MIRNA在誘導成骨分化中的調(diào)控作用并探討成骨誘導培養(yǎng)液的誘導成分在此過程中促進成骨分化的作用。結果（1）萎縮性骨不連修復組織相對鋼板周圍骨痂組織有9種MIRNA發(fā)生15倍以上表達上調(diào)（HSAMIR149，HSAMIR221，HSAMIR6283P，HSAMIR6545P，以及5種HSAMIRPLUS），9種MIRNA發(fā)生15倍以上表達下調(diào)（HSALET7B，HSAMIR220B，HSAMIR513A3P，HSAMIR551A，HSAMIR5765P，HSAMIR1236，KSHVMIRK1265P，以及2種HSAMIRPLUS）。QRTPCR結果提示，數(shù)據(jù)庫中收錄并在A組表達上調(diào)的四種MIRNA在組織水平的表達變化趨勢與芯片結果一致。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，四種表達上調(diào)MIRNA的預測靶基因包括多種成骨功能相關基因。（2）分離培養(yǎng)的HBMSCS具有典型的干細胞形態(tài)特征，貼壁時間短，細胞融合快，體外擴增容易，可以向成骨細胞誘導，適合作為種子細胞用于后續(xù)的實驗研究。在成功將上調(diào)MIRNA的合成雙鏈小RNA轉染進第四代HBMSCS48H后，提取細胞總RNA，QRTPCR檢測表明，三種預測靶基因（HSAMIR149的預測靶基因ALPL、HSAMIR221的預測靶基因PDGFA和HSAMIR6545P的預測靶基因BMP2）的MRNA表達量受到明顯抑制，其余預測靶基因的MRNA無明顯下降；WB則表明上述三種預測靶基因的蛋白表達量均受到明顯抑制。雙熒光素酶報告基因檢測則證明三種預測靶基因的預測靶位點分別直接受到HSAMIR149、HSAMIR221和HSAMIR6545P的靶向調(diào)控，其中ALPL的兩個預測靶位點只有第二個受到HSAMIR149的直接調(diào)控。（3）誘導HBMSCS成骨分化過程中，得到確認的成骨性靶基因ALPL、PDGFA和BMP2的MRNA和蛋白表達量在多數(shù)時間點有明顯增加，尤其以誘導分化后2～7天變化最為顯著（ALPL蛋白為1～7天），第14天時又有所下降。不同時間點的MIRNA、靶基因MRNA和蛋白水平存在表達差異，其中HSAMIR149和HSAMIR6545P的變化趨勢與各自靶基因ALPL和BMP2的MRNA及蛋白表達水平總體上呈負相關，而HSAMIR221與PDGFA的變化趨勢無明顯負相關關系，兩者的關系有待進一步研究。結論（1）萎縮性骨不連修復組織中存在MIRNA的異常表達；四種在該組織中上調(diào)的MIRNAHSAMIR149、HSAMIR221、HSAMIR6283P和HSAMIR6545P有可能通過抑制多種成骨功能相關靶基因的表達，在調(diào)控骨折向萎縮性骨不連發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。（2）細胞水平驗證表明四種在組織水平上調(diào)的MIRNA中，HSAMIR149與其預測的靶基因ALPL、HSAMIR221與其預測的靶基因PDGFA、HSAMIR6545P與其預測的靶基因BMP2之間存在直接調(diào)控作用，異常上調(diào)的MIRNA通過抑制成骨功能相關靶基因ALPL、PDGFA和BMP2的表達而限制其生物學功能，引起了萎縮性骨不連的發(fā)生發(fā)展。（3）多種成骨功能相關靶基因的MRNA和蛋白表達水平在誘導HBMSCS成骨分化過程中大多數(shù)時間點發(fā)生了表達上調(diào)，HSAMIR149和HSAMIR6545P與其相應靶基因ALPL和BMP2的MRNA及蛋白表達變化趨勢呈負相關，說明這兩種MIRNA在誘導成骨分化過程中與其靶基因MRNA和蛋白表達水平的調(diào)控密切相關。簡述之，本研究從萎縮性骨不連修復組織中找到具有關鍵調(diào)控作用的MIRNA，發(fā)現(xiàn)有三種表達異常上調(diào)的MIRNA通過抑制成骨功能相關靶基因引起了萎縮性骨不連的發(fā)生發(fā)展，其中兩種MIRNA的表達水平與成骨功能相關靶基因的MRNA和蛋白表達水平密切相關。本研究可能將為萎縮性骨不連的診斷和治療提供新的理念。

簡介：近年來，氣單胞菌引起了人們越來越多的關注，一方面由氣單胞菌引起的疾病在不斷增多，不僅包括一些普通的腸胃感染，還包括一些腸外疾病，例如類炎性腸病和菌血癥。另一方面，對于氣單胞菌病理機制的研究也吸引了越來越多人的注意。然而，無論對于氣單胞菌的診斷還是對其病理機制的研究都要求建立一種快速檢測氣單胞菌的方法。目前對于氣單胞菌的檢測還主要采用傳統(tǒng)的菌種培養(yǎng)和生理生化鑒定方法，操作繁瑣復雜，檢驗周期長，交叉反應多。本課題首創(chuàng)利用環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）檢測氣單胞菌，環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）是一種新的恒溫核酸擴增方法，其特點是針對靶基因的6個區(qū)域設計4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶（BSTDNAPOLYMERASE）在等溫條件（65℃左右）保溫幾十分鐘，即可完成核酸擴增反應。它具有簡單、快速、特異性強的特點。在此課題中，我們針對氣單胞菌16S23SRRNA基因間區(qū)（INTERGENICSEQUENCEIGS）序列設計4條特異性引物（兩條內(nèi)引物和兩條外引物）進行LAMP擴增。為了檢測引物的特異性，127株氣單胞菌（包括18株典型菌株和109株臨床分離株）和84株臨床或分類上與氣單胞菌相似的菌株被鑒定。結果顯示LAMP具有很強的特異性，且其靈敏度可達到101CFU。我們將普通PCR和LAMP做了對照。結果顯示普通PCR的靈敏度最多可達102CFU。此外，我們對實際糞便樣本也進行了檢測，結果顯示LAMP的檢測結果與普通PCR和生化培養(yǎng)的檢測結果是一致的。我們深入探討了利用環(huán)介導等溫擴增技術進行氣單胞菌檢驗的程序和方法，建立了比較完善的反應體系，提高了檢驗的靈敏度和準確性，有望將檢驗時間由原來的2496小時縮短到1小時。該方法檢測氣單胞菌特異性強、靈敏度高，并且操作簡便、檢測成本低，有望發(fā)展成為快速檢測氣單胞菌的有效手段。

簡介：協(xié)同刺激信號在T細胞參與免疫應答的起始、效應和終止等不同階段都發(fā)揮了重要的調(diào)控作用且需要達到相對平衡。PD1PDL途徑介導的負性信號能有效抑制T、B細胞功能，在機體免疫應答后期的負性調(diào)節(jié)中發(fā)揮了至關重要的作用，并在腫瘤免疫、自身免疫、移植免疫和慢性病毒感染等疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要的生物學意義。PD1CD279為負性協(xié)同刺激分子受體，其最顯著的特征是胞漿區(qū)含有一個免疫受體酪氨酸抑制基序ITIM和一個免疫受體酪氨酸轉換基序ITSM。PD1主要在活化的T、B和NK等細胞上呈誘導性表達，PD1有PDL1B7H1，CD274和PDL2B7DC，CD273兩個配體。PDL1和PDL2同屬B7超家族，在蛋白結構上均包含有IGV樣區(qū)、IGC樣區(qū)、跨膜區(qū)和一個短而保守的胞漿區(qū)。PDL1廣泛組成性表達于多種實質(zhì)器官組織、免疫細胞以及多種類型的腫瘤細胞上，而PDL2僅表達于活化的巨噬細胞、樹突狀細胞、骨髓來源的基質(zhì)細胞和個別腫瘤細胞株。研究表明，PD1隨T細胞活化程度逐步上調(diào)表達，PD1PDL相互作用后觸發(fā)ITSM基序募集信號分子SHP2，引發(fā)抑制信號的產(chǎn)生，致使效應性T細胞失能并及時進入凋亡。因此，PD1PDL途徑對T細胞在免疫應答過程中恰當而有效的調(diào)節(jié)具有重要的生物學意義，通過研究PD1PDL與多種臨床疾病的相關性，闡明其作用機理，有望為這些疾病的免疫治療提供新策略。研究發(fā)現(xiàn)，多種協(xié)同刺激分子能分別以細胞膜型和可溶性兩種形式存在，包括CD28、CTLA4、CD80、CD86、ICOSL、B7H3和B7H4等?？扇苄苑肿涌梢酝ㄟ^蛋白水解酶裂解細胞上的膜型分子而形成，也可由專一的MRNA直接編碼產(chǎn)生。有些可溶性分子具有臨床診斷價值。本研究旨在構建基因轉染細胞L929PD1和L929PDL1的基礎上，進一步研制鼠抗人PD1和PDL1單克隆抗體，并對單抗的生物學特性進行研究；分別建立特異性檢測人SPD1和SPDL1的ELISA方法，并對ELISA檢測體系的穩(wěn)定性和精確性等進行分析、評價；利用SPDI的ELISA方法對健康人和自身免疫病患者外周血中的SPD1表達水平及特性進行分析，同時，對SPD1的產(chǎn)生機制進行研究，探討該可溶性因子對PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用及其在自身免疫病中的生物學意義；應用建立的ELISA分析SPDLI在人外周血和多種體外培養(yǎng)細胞上清中的表達特性，研究功能性SPDL1的產(chǎn)生機制及其對T細胞的協(xié)同刺激效應，分析肺癌患者外周SPDL1的表達及其與腫瘤細胞免疫逃逸的相關性。這些研究結果為闡明SPD1和SPDL1對PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用及其生物學意義提供了新的線索。一、鼠抗人PD1和PDL1單克隆抗體的研制及生物學特性的研究目的研制特異性鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體，為研究人PD1PDL1分子在免疫細胞上的表達特性和探討該抑制途徑對人免疫細胞的生物學效應提供必要的物質(zhì)材料。方法以穩(wěn)定高表達人PD1、PDL1分子的基因轉染細胞L929PD1、和L929PDL1為免疫原，常規(guī)免疫BALBC小鼠，采用B淋巴細胞雜交瘤技術進行細胞融合，并以基因轉染細胞和融合蛋白通過流式細胞術或ELISA方法篩選雜交瘤細胞培養(yǎng)上清，將鑒定后符合要求的雜交瘤細胞株進行反復篩選和多次克隆化培養(yǎng)，最終獲得多株分泌特異性鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體的雜交瘤細胞株；采用IG亞型快速定性試紙法、單抗單抗或單抗蛋白競爭結合抑制實驗、WESTERNBLOT和ELISA等試驗，對獲得的單克隆抗體進行生物學特性的鑒定；用間接免疫熒光法分析PD1、PDL1在不同類型細胞表面的表達特性；應用獲得的單抗對人T、DCS等細胞進行體外生物學功能的研究。結論成功菝得多株新的鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體，識別不同抗原表位的單抗為進一步應用于研制ELISA試劑盒，從而用于測定可溶性蛋白因子奠定了良好基礎。上述單抗的研制也為揭示膜型PD1和PDL1的表達特性，探討PD1PDL1抑制途徑對免疫細胞的調(diào)節(jié)作用及其生物學意義提供了必要的物質(zhì)材料。二、特異性檢測人可溶性PD1、PDL1蛋白ELISA試劑盒的研制目的研制特異性高靈敏度檢測人SPD1和SPDL1的ELISA試劑盒，為定量分析不同來源的臨床標本和研究這兩種可溶性因子的功能提供有效的檢測手段。方法利用ANTIPD1MAB489作包被抗體在碳酸鹽緩沖液中預包被ELISA板，BIOTINANTIPD1MAB9H1作為檢測抗體識別與489相結合的抗原，再與STREPTAVIDINHRP反應，最后用TMB底物進行顯色反應，建立雙抗體夾心SPD1酶聯(lián)檢測試劑盒。利用相同批次多組檢測孔進行精確性分析，利用相同批次ELISA板在不同測定時間點的準確性進行試劑盒穩(wěn)定性分析。同樣的方案，用ANTIPDL1MAB2HLL作為包被抗體和BIOTINANTIPDL1MAB10D7作為檢測抗體建立特異性檢測人SPDL1的ELISA體系。結論特異性高靈敏度檢測人SPD1和SPDL1ELISA試劑盒的建立為定量分析PD1PDL1抑制途徑中可溶性蛋白因子提供了有效的檢測手段。三、SPD1表達的特性及其對PD1PDL1途徑的阻斷作用和在自身免疫病理中的意義目的揭示健康人外周血中SPD1表達的特性，闡明機體中SPD1的產(chǎn)生機制，探討SPD1在自身免疫病患者外周異常表達的意義及其對PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用。方法利用自主研制的SPD1ELISA試劑盒檢測分析不同年齡段健康人外周血中SPD1的表達求平；流式細胞術和ELISA分析人T細胞在體外刺激活化過程中膜型和可溶性PD1的表達特性；通過RTPCR和TPPCR法克隆人全長PD1FLPD1、缺失外顯子3的PD1PD1AEX3和PD1胞外段SPD1基因，構建PLRES2EGFPFLPD1、PLRES2EGFPPD1AEX3和PLRES2EGFPSPDL重組真核表達載體，用脂質(zhì)體法瞬時轉染293T細胞，于不同時間點收集基因轉染細胞并用免疫熒光標記技術分析細胞膜上PD1的表達，用WESTERNBLOT和SPD1ELISA方法對各轉染細胞培養(yǎng)上清中SPD1進行定性和定量分析；合成PD1蛋白胞內(nèi)段特定的抗原肽，免疫新西蘭兔制備兔抗人PD1胞內(nèi)段多抗；免疫沉淀技術收集人血清中的SPD1并進行WESTERNBLOT，應用兔抗人PD1胞內(nèi)段多抗與SPD1蛋白雜交顯色，進而鑒定SPD1蛋白特性；通過競爭抑制實驗分析SPD1蛋白與PDL1、PDL2的結合能力；利用SPD1ELISA和WESTERNBLOT方法對自身免疫病患者（GRAVES’、RA和HSP）外周血中該因子進行定量和定性分析。結論功能性SPD1存在并高表達于自身免疫病患者外周為進一步闡明SPD1對PD1PDL1抑制信號的阻斷作用開拓了新的途徑，為探討該可溶性因子在生理和自身免疫病理條件下的生物學意義奠定了良好的基礎。四、SPDL1表達的特性及其對PD1PDL1途徑促進作用和在腫瘤免疫逃逸中的意義目的應用SPDL1ELISA揭示健康人外周血和多種體外培養(yǎng)細胞上清中SPDL1表達的水平和特性，闡明SPDL1的產(chǎn)生機制，探討SPDL1在腫瘤患者外周異常表達的意義及其對PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用。方法利用自主研制的SPDL1ELISA試劑盒檢測分析健康人外周血中SPDL1的表達水平；流式細胞術和ELISA分析人MODCS在體外誘導分化成熟過程中膜型PDL1MPDL1和可溶性PDL1SPDL1的表達特性；ELISA法檢測分析多種MPDL1和MPDLI細胞株產(chǎn)生SPDL1的水平；應用免疫沉淀和WESTERNBLOT技術鑒定SPDL1蛋白的分子量；在高表達SPDL1的L929PDL1和MODCS細胞培養(yǎng)體系中加入金屬蛋白酶抑制劑MMPI，于不同時間分析SPDL1的表達量；通過與PD1IG融合蛋白結合實驗分析SPDL1的生物學活性；應用CCK8摻入法體外研究SPDL1對T細胞增殖和活化的抑制作用；利用SPDL1ELISA分析該因子在肺癌患者外周血中的表達水平，將獲得的結果用統(tǒng)計學軟件與各項臨床指標作相關性分析。結論人外周血中存在的功能性SPDL1能促進PD1PDL1負性信號，該因子參與了腫瘤細胞的免疫逃逸，這為研究PD1PDL1靶向免疫治療提供了實驗依據(jù)，具有重要的理論研究和潛在的應用價值。相關，成熟MODCS產(chǎn)生高水平SPDL1；SPDL1主要由MPDL1細胞經(jīng)金屬蛋白酶MMPS剪切MPDL1產(chǎn)生；PD1SPDL1作用后能顯著抑制T細胞的增殖和活化；肺癌患者外周異常高表達SPDL1，其表達水平與腫瘤的淋巴結轉移密切相關。

簡介：第二軍醫(yī)大學碩士學位論文甲狀腺癌頸淋巴結轉移的影像學評估和相關分子生物學研究姓名張春旭申請學位級別碩士專業(yè)外科學（普外）指導教師王強20050401第二軍醫(yī)大學碩士學位論文甲狀豫頸漠巴結轉移的影像學評估和相關分子生耪學研究中文摘要目的1研究甲狀腺癌淋巴結轉移的CT特點及其在甲狀腺癌的診斷和手術方式的選擇方面的應用價值；2檢測CMET蛋白在有頸部淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌和無頸部淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌，甲狀腺濾泡狀癌及良性甲狀腺組織中的表達，探討其和甲狀腺癌頸部淋巴結轉移中的關系和臨床應用意義。方法1回顧性分析經(jīng)手術及病理診斷的50例甲狀腺癌淋巴結轉移的CT表現(xiàn)；2采用免疫組織化學的方法檢測了有頸部淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀腺癌62例，無頸部淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀腺癌50例，甲狀腺濾泡狀腺癌10例，良性甲狀腺組織30例中的C一煳蛋白的表達。結果150例中，1IM區(qū)頸淋巴結轉移14例，Ⅳ區(qū)19例，V區(qū)1例，V19例。43例甲狀腺癌中39例邊緣規(guī)則。32例乳頭狀癌中，3L例淋巴結明顯強化密度與正常甲狀腺相似，LO例有囊性變，其中8例淋巴結囊內(nèi)有明顯強化的乳頭狀結節(jié)，9例有細顆粒狀鈣化。11例濾泡癌、髓樣癌、未分化癌中，LO例淋巴結明顯強化，10例與甲狀腺原發(fā)或復發(fā)腫瘤密度一致，密度均勻或不均勻2有頸部淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中的CMET表達明顯高于其它三組P0001。四組兩兩比較結果如下有淋巴結轉移和無淋巴結轉移乳頭狀癌組PO001，有淋巴結轉移乳頭狀癌和濾泡狀癌PO001，有淋巴結轉移乳頭狀癌和良性甲狀腺PO001，無淋巴結轉移乳頭狀癌和濾泡狀癌P0002，無淋巴結轉移乳頭狀癌和良性甲狀腺P0001。濾泡狀癌和良性甲狀腺組織PO口酷無明顯差異。結論1甲狀腺癌轉移淋巴結好發(fā)部位為頸靜脈鏈周圍、氣管食管溝淋巴結明顯強化、與正常甲狀腺密度一致、囊性交、囊壁內(nèi)明顯強化的乳頭狀結節(jié)及細顆粒狀鈣化為甲狀腺乳頭狀癌的特征性改變淋巴結明顯強化、與甲狀腺腫瘤密度一致為濾泡癌、髓樣癌、末分化癌轉移淋巴結的特點。它有助于甲狀腺癌的術前診斷，和選擇甲狀腺癌的手術方式2CMET的表達是甲狀腺乳頭狀癌是否有淋巴結轉移的預測因子，是腫瘤的囊外擴展和直接侵犯的標記。它對甲狀腺癌淋巴結轉移的術前評估，乃至決定手術方式有一定指導意義。關鍵詞甲狀腺癌，淋巴結轉移，CT，C一尬T，甲狀腺乳頭狀癌，頸部淋巴結轉移

簡介：南開大學碩士學位論文原癌蛋白LM02與乳腺癌轉移的相關性研究及其分子生物學機制初探姓名李慧慧申請學位級別碩士專業(yè)生理學指導教師朱天慧201205中文摘要胞遷移能力方面可能具有重要作用，且其發(fā)揮作用的機制可能異于作為轉錄調(diào)控因子的方式，而主要通過定位于胞漿中的LM02，以某種未知的機制發(fā)揮作用。為尋找其胞漿的作用靶點，我們以LM02為誘餌蛋白進行了酵母雙雜交篩選，從結果來看，我們發(fā)現(xiàn)了多個與細胞粘附、運動相關的LM02潛在結合蛋白，包括偽足形成過程中的關鍵蛋白ARP3，GAPUNCTIONPROTEIN以及受體酪氨酸激酶NTRK2等，這些結果也進一步提示我們LM02參與了細胞粘附與遷移的調(diào)控過程。另外也篩選出了和LM02發(fā)揮轉錄調(diào)控功能相關的蛋白SAPL8，為LM02轉錄調(diào)控功能的研究提供了新的線索。關鍵詞原癌蛋白LM02；乳腺癌；酵母雙雜交II