簡介：點擊查看更多丙肝肝硬化患者脾切除術(shù)后抗病毒治療的綜合評價.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文輪狀病毒VP7基因修飾、表達及免疫原性研究姓名劉勇申請學(xué)位級別博士專業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師戴長柏200051中翻T掌科掌院中■協(xié)和置韓大掌博士研究生牛業(yè)滄文DNA疫苗誘導(dǎo)特異性抗體反應(yīng)的能力。重組蛋白與DNA疫苗聯(lián)合免疫所誘導(dǎo)的VP7抗體水平顯著高于兩種形式的疫苗單獨使用所產(chǎn)生的抗體滴度。統(tǒng)計學(xué)分析表明，重組蛋白與DNA疫苗的交互作用可顯著增強VP7特異的抗體反應(yīng)。聯(lián)合使用DNA疫苗和重組蛋白抗原可能是提高兩者免疫原性的有效途徑。此外，我們還利用細菌內(nèi)同源重組機制構(gòu)建了分別攜帶野生型和膜錨定型VP7基因的重組腺病毒基因組，轉(zhuǎn)染293細胞得到重組腺病毒。病毒基因組分析表明，外源基因以正確的方式插入腺病毒基因組E1區(qū)。用重組腺病毒感染MAL04細胞，免疫熒光實驗證明，野生型和膜錨定型VP7基因經(jīng)重組腺病毒表達后分別定位于胞質(zhì)和胞膜。表達野生型和膜錨定型VP7基因的重組腺病毒的構(gòu)建為更加廣泛深入地研究VP7基因的免疫原性提供了有力的手段。本研究為輪狀病毒基因工程疫苗研制＼奠定了基礎(chǔ)丁關(guān)鍵詞輪狀病毒VP7，基因修飾，大腸桿菌表達，DNA疫苗，重組腺病毒2

簡介：病毒是一種導(dǎo)致全球發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高的病原體?？焖凫`敏的檢測系統(tǒng)加高效的疫苗能防止病毒感染和傳播。然而目前已有的相關(guān)技術(shù)存在許多缺陷。隨著全球總?cè)丝跀?shù)量和移民數(shù)量的不斷增長，對于病毒的檢測手段和疫苗提出了更高的要求。納米材料包括了具有非常獨特和重要特性的一系列納米尺度的物質(zhì)，稱為納米結(jié)構(gòu)。其中金納米結(jié)構(gòu)是研究得最多的具有獨特表面等離子體特性的一類納米結(jié)構(gòu)。由于它們出色的生物相容性和穩(wěn)定性，一些金納米結(jié)構(gòu)在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用潛能正在被開發(fā)，它們是病毒檢測和疫苗研發(fā)中大有希望的候選材料。本論文主要通過下列兩方面的研究來評估其在病毒檢測和疫苗研發(fā)中的作用1聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器技術(shù)用于檢測乙型肝炎病毒。這一技術(shù)主要是建立了一種新型的基于聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器，共振傳感器主要由一個核心元件和多個帽狀生物納米配體組成。每個帽狀配體是由金納米粒子和乙肝病毒表面抗原PRES2的一段短肽偶聯(lián)而成而核心元件是由綠色3NM量子點上結(jié)合多個能特異性識別PRES2短肽的FAB片段而組成的。由于核心元件上的FAB片段可以特異性結(jié)合帽狀配體上的PRES2短肽，兩者形成了核心元件帽狀配體納米組件復(fù)合體。當(dāng)反應(yīng)體系中有乙肝病毒存在時，核心元件上的FAB片段會競爭性與乙肝病毒PRES2短肽結(jié)合，從而破壞核心元件帽狀配體納米組件復(fù)合體的形成。用多種技術(shù)（如紫外可見吸收光譜術(shù)、透射電子顯微鏡術(shù)、動態(tài)光散射技術(shù)、ZETA電位分析法、傅里葉變換紅外光譜術(shù)、能量色散X射線分析術(shù)、熒光光譜術(shù)、瓊脂糖凝膠電泳）均證實了核心元件、帽狀配體及其上偶聯(lián)的傳感分子以正確的形式（如單獨存在或形成復(fù)合體）和結(jié)構(gòu)存在。通過比較反應(yīng)體系中加入的乙肝病毒表面抗原和完整的乙肝病毒顆粒，評估了核心元件帽狀配體納米組件復(fù)合體用于檢測乙肝病毒的靈敏度和特異性，也進一步分析了納米組件復(fù)合體的動力學(xué)特征。結(jié)果表明，我們首創(chuàng)的聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器技術(shù)是一種快速和高靈敏度的病毒檢測技術(shù)，可以檢測到低至150個病毒粒子微升（即1018摩爾升）的水平。2納米等離子增強DNA疫苗遞送效率用于預(yù)防丙型肝炎病毒。該方法研制了一種新型的基于納米技術(shù)，提高肌注DNA疫苗的遞送效率，用于預(yù)防丙型肝炎病毒。這種新型的遞送系統(tǒng)通過在遞送DNA疫苗的鄰近部位局部注射金納米結(jié)構(gòu)，并施加幾個時間控制電脈沖而達成。我們制備了兩種特異性針對丙型肝炎病毒的DNA疫苗質(zhì)粒，分別稱為PVAX1核心與PVAX1NS3，另又制備了不同大?。?、50與100NM）的金納米結(jié)構(gòu)。上述制備物的理化特性用紫外可見吸收光譜術(shù)、透射電子顯微鏡術(shù)、動態(tài)光散射技術(shù)、ZETA電位分析法、傅里葉變換紅外光譜術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳等技術(shù)進行了分析驗證。對所開發(fā)的單一丙型肝炎病毒DNA質(zhì)粒及其組合分別進行了測試。另一方面，在不同的小鼠組測試了金納米結(jié)構(gòu)與PVAX1核心聯(lián)合給藥的效果。結(jié)果清楚地表明金納米粒子即使在很低濃度時也具有提高試驗動物免疫反應(yīng)、增強特異性抗體形成的能力。納米顆粒的大小對特異性抗體形成的水平影響甚微，而對細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)卻有顯著的影響。表面負電荷能顯著影響金納米粒子增強PVAX1核心質(zhì)粒DNA疫苗遞送和響應(yīng)的效率。同時，運用透射電子顯微鏡和HE染色技術(shù)對肌肉組織中注射的金納米粒子進行了檢測，證實金納米粒子的確進入了肌細胞，并導(dǎo)致了持續(xù)性的組織溶解和炎癥。上述結(jié)果提示，我們的聯(lián)合給藥方案中金納米粒子之所以能提高機體的免疫反應(yīng)，一方面可能由于增加了對DNA疫苗的攝入，另一方面可能因為招募了更多免疫細胞到注射部位。

簡介：目的建立多重實時熒光定量PCR檢測人博卡病毒13型（HBOV13）的檢測方法，并通過與普通PCR比較及測序來評估其特異性和敏感性；運用該檢測方法對20092010年急性下呼吸道感染住院兒童的鼻咽抽吸物（NPAS）標(biāo)本進行HBOV檢測、測序分型，并對相關(guān)臨床資料進行總結(jié)分析，以了解HBOV13型在長沙地區(qū)急性下呼吸道感染兒童中的流行特點，為本地區(qū)兒童呼吸道感染的防治及進一步的研究奠定基礎(chǔ)。方法⑴根據(jù)文獻獲得并合成HBOV13型引物、探針的基因序列，確定反應(yīng)體系。⑵選取3例已知的陽性標(biāo)本HBOV1、HBOV2、HBOV3各一份，經(jīng)普通PCR擴增，陽性擴增產(chǎn)物測序鑒定，目的基因與載體連接、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞并增菌、提取質(zhì)粒，測序確定含有目的基因的質(zhì)粒，評估質(zhì)粒質(zhì)量后十倍梯度稀釋，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑶質(zhì)粒稀釋成101108的標(biāo)準(zhǔn)品，通過多重實時熒光定量PCR進行擴增，評估靈敏度；選取已知分別含有不同的1種DNA和10種RNA病毒的標(biāo)本、多重病毒混合標(biāo)本、含有肺炎支原體和衣原體的標(biāo)本、不含病毒的標(biāo)本以及滅菌去離子水進行檢測，評估特異性；對同一HBOV陽性標(biāo)本同時進行5次測定以及連續(xù)5天對同一樣本進行重復(fù)測定，評估重復(fù)性。⑷收集2009年9月1日至2010年10月31日在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心因急性下呼吸道感染住院兒童的NPAS標(biāo)本。⑸隨機選取在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心因急性下呼吸道感染住院兒童的NPAS標(biāo)本進行多重實時熒光定量PCR和普通PCR檢測，評價它們檢測臨床標(biāo)本的敏感性和特異性。⑹收集的NPAS標(biāo)本經(jīng)提取核酸后通過建立的多重實時熒光定量PCR檢測HBOV13，同時采用PCR、RTPCR及半巢式PCR方法檢測RSV、HRV、IFVAB、PIV123、HMPV、HCOVHKU1、HCOVNL63、ADV，并測序驗證。⑺對20092010年急性下呼吸道感染住院兒童HBOV陽性檢出病例的病例資料進行分析。結(jié)果①多重實時熒光定量PCR檢測HBOV不同梯度定量模板的拷貝對數(shù)值與CT值之間呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為0999、0999和0998；重復(fù)性好，批內(nèi)CV值為095％，批間CV值在102106拷貝反應(yīng)范圍波動在092，均小于5；此方法的靈敏度可達到10拷貝反應(yīng)（最小濃度33810拷貝反應(yīng)）。且對其它呼吸道常見病毒以及肺炎支原體、肺炎衣原體進行檢測，均無擴增曲線，特異性好。②多重實時熒光定量PCR與普通PCR對171份NPAS進行了HBOV平行檢測，多重實時熒光定量PCR檢出27份陽性，普通PCR檢出16份陽性，且所有普通PCR陽性樣本均存在于多重實時熒光定量PCR檢測的陽性樣本中，兩種方法檢測的陽性產(chǎn)物均進行測序鑒定，多重實時熒光定量PCR檢出的27份陽性標(biāo)本中有4份為假陽性。③2009年9月1日～2010年10月31日共收集急性下呼吸道感染住院兒童的NPAS標(biāo)本775份，其中檢出HBOV陽性110例，總檢出率為1419；HBOV1檢出107例，檢出率為1380；HBOV2檢出3例，檢出率為039；未檢出HBOV3。在110例HBOV陽性檢出病例中，男性患兒的檢出率為1426，女性患兒的檢出率為1407，男女之比為1011，無性別差異（Χ20005，P0944）。HBOV陽性患兒的年齡在22天13歲2月之間，平均年齡為18個月。5歲以下占9636，3歲以下占8636。夏季檢出33例（1例為HBOV2）、春季30例（2例為HBOV2）、冬季26例、秋季21例。HBOV陽性檢出病例主要的診斷為支氣管肺炎、毛細支氣管炎和支氣管哮喘并肺部感染。在檢測的所有HBOV陽性標(biāo)本中，3454的為單獨感染，6545的為混合感染，在單一HBOV陽性病例中發(fā)熱者混合其他病毒陽性的病例常見（P0016）；而HBOV混合其它病毒陽性檢出病例中有基礎(chǔ)疾病的例數(shù)多于單一HBOV檢出病例（P0015），其他臨床情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論⑴成功構(gòu)建了多重實時熒光定量PCR檢測HBOV13的方法。⑵多重實時熒光定量PCR對臨床標(biāo)本HBOV的檢測比普通PCR快速、敏感。⑶采用多重實時熒光定量PCR可檢出急性下呼吸道感染住院兒童NPAS標(biāo)本中的HBOV1和HBOV2。⑷本研究期間，HBOV1的檢出率較高，可能是本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染的重要病毒病原之一。

簡介：本研究分為二部分第一部分2型糖尿病與認知功能障礙目的探討與2型糖尿病相關(guān)的認知功能障礙。方法采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的頻數(shù)匹配病例對照研究方法。病例來自2005年3月至10月于天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院就診的2型糖尿病T2DM患者共118例。對照組為同期于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院接受健康檢查的非糖尿病者共100例，對照組與病例組按年齡、性別、文化程度進行頻數(shù)匹配。認知功能測試分別采用1簡易智能狀態(tài)評價MMSE；2韋克斯勒成人智力量表中國修訂版WATSRC中的4項測驗，即填圖測驗、數(shù)字廣度、數(shù)字符號及類同測驗；3臨床記憶量表甲套全部5項測驗。綜合醫(yī)院焦慮和抑郁量表HAD評價研究對象的焦慮和抑郁狀態(tài)。采用T檢驗比較病例組與對照組認知功能評分差異，Χ2檢驗比較各調(diào)查因素在兩組間分布的差異。結(jié)果病例組與對照組MMSE得分分別為270±32和278±20，差別未達到統(tǒng)計學(xué)顯著性水平T1668，P0098；病例組在填圖測驗、數(shù)字廣度測驗、數(shù)字符號及類同測驗項目的年齡量表分均低于年齡、性別、文化程度匹配的對照組，差別均具有統(tǒng)計學(xué)意義P均＜0001，說明病例組在邏輯思維能力、抽象思維能力、分析概括能力，視覺敏銳性、注意力、記憶力、信息處理速度及神經(jīng)肌肉運動能力等方面的認知功能表現(xiàn)均差于對照組；病例組與對照組的記憶商MQ分別為900±156和1003±128，兩組MQ差別具有統(tǒng)計學(xué)意義T5354，P＜0001。病例組的MQ顯著低于常模均數(shù)100T6926，P＜0001，而對照組MQ與常模均數(shù)比較，無統(tǒng)計學(xué)差異T0251，P0803，說明病例組存在記憶力損害。病例組在指向記憶、聯(lián)想記憶、圖像自由回憶、無意義圖形再認、人像特點回憶五項分測驗的年齡量表分均顯著低于年齡、性別、文化程度匹配的對照組P均＜0005，說明病例組的言語記憶學(xué)習(xí)記憶和非言語記憶視空記憶能力均存在不同程度的損害。本研究發(fā)現(xiàn)，不同年齡組55歲以下組、55歲及以上組，不同性別的T2DM患者的多項認知功能測驗得分均顯著低于年齡、性別、文化程度匹配的對照組。說明不同年齡組、不同性別的T2DM患者均存在一定程度的認知功能障礙。病例組的抑郁量表得分高于對照組。結(jié)論T2DM患者存在著多個認知功能域的認知功能障礙，其中包括抽象分析能力，注意力，精神運動速度，學(xué)習(xí)能力，言語記憶力，視空間記憶力等。第二部分2型糖尿病認知功能障礙的危險因素分析目的探討2型糖尿病認知功能障礙的危險因素。方法采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的頻數(shù)匹配病例對照研究。病例及對照均來自2005年3月至2005年12月就診于天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院的T2DM患者。病例為伴有認知功能損害的2型糖尿病T2DMCI患者共77例，對照組為經(jīng)認知功能測試無明顯認知功能障礙的T2DM患者共95例，兩組按年齡及性別進行頻數(shù)匹配。通過調(diào)查表收集研究對象的人口統(tǒng)計學(xué)特征、生活方式、疾病史、疾病家族史、社會心理因素等資料；應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性PCRRFLP技術(shù)，分析載脂蛋白EAPOE及對氧磷脂酶2PONC311S基因多態(tài)性；運用LOGISTIC回歸模型對T2DMCI的危險因素進行分析。結(jié)果單因素LOGISTIC回歸發(fā)現(xiàn)，文化程度，血糖控制水平，T2DM病程，治療方法，血漿三酰甘油、總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇水平，伴發(fā)高血壓，伴發(fā)冠心病，合并T2DM微血管并發(fā)癥，高血壓家族史，冠心病家族史，體育鍛煉，飲茶，抑郁，焦慮等因素與T2DMCI有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)。多因素LOGISTIC回歸發(fā)現(xiàn)，文化程度高是T2DM認知功能的保護因素，值為0561，95％CI0373～0843；經(jīng)常飲茶可降低T2DMCI的危險，值為0541，95％CI0309～0947；高血脂1798，95％CI1043～3098，病程長、并發(fā)DM微血管并發(fā)癥2190，95％CI1315～3647，抑郁與焦慮1747，95％CI1153～2646，合并高血壓4710，95％CI1845～12023，合并冠心病6582，95％CI1860～23295，血糖控制差2734，95％CI1504～4970，有高血壓家族史7484，95％CI2461～22758可增加T2DMCI的發(fā)生危險；對T2DMCI各危險因素交互作用分析發(fā)現(xiàn)，高血脂與高血壓之間存在相乘模型交互作用，伴有高血脂伴及高血壓的T2DM患者發(fā)生T2DMCI的危險性是不具有該危險因素者的2337倍95％CI1550～3522。通過對APOE及PON2C311S基因多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)，病例組與對照組APOEΕ4等位基因頻率分別為204％和104％，兩組有統(tǒng)計學(xué)差別Χ28859，P0012；病例組SS基因頻率高于對照組775％VS615％，Χ24465，P0030。LOGISTIC回歸分析發(fā)現(xiàn)，攜帶APOEΕ4等位基因為T2DMCI的危險因素，值為2325，95％CI1159～4666；交互作用分析發(fā)現(xiàn)，攜帶APOEΕ4等位基因與高血壓7040，95％CI2488～19918、冠心病3333，95％CI1524～7791及T2DM微血管并發(fā)癥2585，95％CI1178～5670對T2DMCI的發(fā)生具有交互作用。本研究發(fā)現(xiàn)，攜帶PONS等位基因可增加T2DMCI的危險，值為214895％CI1068～4321；并且，PONS等位基因與高血壓5018，95％CI2208～11408、冠心病2878，95％CI1392～5925、T2DM微血管并發(fā)癥2795，95％CI1340～5829及高血脂298395％CI1123～7927交互作用可增加T2DMCI的發(fā)生的危險性。通過對APOEΕ4與PON2S等位基因交互作用分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)同時攜帶APOEΕ4與PON2S等位基因時，與不同時攜帶APOEΕ4與PON2S等位基因組比較，發(fā)生T2DMCI的危險性顯著增加，值為261895％CI1241～5522。結(jié)論T2DMCI與多種因素有關(guān)，其中既包括環(huán)境因素，也包括遺傳因素。并且多種因素之間的交互作用可能改變T2DMCI的相對危險性。

簡介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV的持續(xù)感染是肝細胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC發(fā)生的最主要因素。HBVXHBX基因在肝細胞基因組中的整合和X蛋白的反式激活作用對HCC的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義但其致癌的分子機制目前尚不十分清楚。對HBX的研究大多著眼于X蛋白的反式激活功能而忽略了HBX基因在肝細胞基因組整合的作用。研究表明在HBV導(dǎo)致肝癌發(fā)生過程中病毒DNA在宿主基因組中有高頻率的整合整合部位隨機分布于多條染色體上這種整合多發(fā)生在HBVX基因區(qū)域。前期研究發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定整合HBX基因的人正常肝胞系LO2X發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化推測HBX基因的整合可能與肝癌發(fā)生有直接關(guān)系。此外HBX蛋白對HCC的發(fā)生和轉(zhuǎn)移具有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)骨橋蛋白OSTEOPONTINOPN及鈣蛋白酶小亞基1CALPAINSMALLSUBUNIT1CAPN4與腫瘤細胞的生長、增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此HBX蛋白可能通過OPN及CAPN4促進肝癌細胞遷移。為了進一步闡明HBX基因蛋白與肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系本研究應(yīng)用細胞模型和病人肝癌組織標(biāo)本探討了HBX基因整合在肝癌發(fā)生中的直接作用和HBX蛋白促進肝癌細胞遷移作用的分子機制主要研究內(nèi)容如下第一部分HBX基因整合與肝癌發(fā)生關(guān)系的研究一、HBX基因突變體穩(wěn)定整合細胞模型的建立前期研究發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定整合HBX基因的人正常肝胞系LO2X發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化因此推測HBX基因的整合可能與肝癌發(fā)生有直接關(guān)系。但是其中包含了HBX蛋白的反式激活作用。為了探討HBX基因整合與肝細胞轉(zhuǎn)化的直接關(guān)系首先建立了無反式激活功能的HBX基因突變體穩(wěn)定整合的細胞模型。本研究中HBX基因被隨機分成五個片段并分別克隆到真核表達載體PCMVTAG2B獲得的質(zhì)粒分別命名為PCMVX1、PCMVX2、PCMVX3、PCMVX4和CMVX5。將此五個質(zhì)粒及克隆有全長HBX基因的質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染人肝細胞LO2使其蛋白過表達同時檢測對核因子ΚBNFΚB和人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶HTERT啟動子活性的影響發(fā)現(xiàn)與野生型相比五個突變的HBX基因片段失去了對NFΚB和HTERT啟動子活性的上調(diào)作用。通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將克隆有這五個片段的質(zhì)粒分別導(dǎo)入人正常肝細胞系LO2和人肝癌細胞系H7402中經(jīng)G418篩選獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系分別命名為LO2X1、LO2X2、LO2X3、LO2X4和LO2X5或H7402X1、H7402X2、H7402X3、H7402X4和H7402X5。二、HBX基因片段整合導(dǎo)致肝細胞惡性轉(zhuǎn)化的作用為了闡明LO2X1、LO2X2、LO2X3、LO2X4和LO2X5細胞系的惡性表型進行了免疫印跡實驗。結(jié)果顯示與對照組相比在LO2X3和LO2X5細胞中有甲胎蛋白AFP表達而LO2X1、LO2X2和LO2X4則檢測不到AFP。軟瓊脂克隆形成實驗顯示與對照組相比LO2X3和LO2X5細胞克隆形成能力顯著增強而LO2X1、LO2X2和LO2X4細胞克隆形成能力與對照組相比無明顯差異。進一步研究發(fā)現(xiàn)將LO2X1、LO2X2、LO2X3、LO2X4和LO2X5分別皮下接種裸鼠后LO2X3和LO2X5細胞接種的裸鼠在接種部位形成原位瘤而LO2X1、LO2X2和LO2X4細胞接種的裸鼠則未能成瘤。本結(jié)果說明整合有HBX基因片段的LO2X3和LO2X5細胞發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化HBX基因整合與肝細胞的轉(zhuǎn)化直接相關(guān)。三、HBX基因整合導(dǎo)致肝細胞轉(zhuǎn)化分子機制的研究1、HBX基因整合模式的鑒定。提取LO2X細胞基因組DNA應(yīng)用HBXALUPCR方法檢測HBX基因整合模式測序結(jié)果顯示HBX基因整合到ALU核心序列和亞端粒DNASUBTELOMERICDNA序列上游整合后HBX基因發(fā)生了3’末端381465BP缺失產(chǎn)生HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組體。然后設(shè)計針對該重組體中HBX基因和亞端粒的引物進行PCR在其他HBX基因穩(wěn)定整合的細胞系如H7402X、3T3X、HEPG2X和HEPG2215中檢測上述重組體是否存在。結(jié)果顯示僅在H7402X細胞系中檢測到該重組體。2、HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組體與肝細胞轉(zhuǎn)化的關(guān)系。為了闡明該重組體是否參與肝細胞的轉(zhuǎn)化應(yīng)用上述特異于HBX基因和亞端粒的引物在穩(wěn)定整合HBX基因突變體的細胞系LO2X1、LO2X2、LO2X3、LO2X4和LO2X5；H7402X1、H7402X2、H7402X3、H7402X4和H7402X5中進行驗證。結(jié)果顯示在上述發(fā)現(xiàn)的已發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的LO2X3和LO2X5或H7402X3和H7402X5細胞中檢測到HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組體而未發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞無該重組體。為了進一步提供HBX基因ALU核心序N亞端粒DNA重組導(dǎo)致肝細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的證據(jù)應(yīng)用報告基因及免疫印跡的方法對LO2X1、LO2X2、LO2X3、LO2X4、LO2X5和LO2X或H7402X1、H7402X2、H7402X3、H7402X4、H7402X5和H7402X細胞系轉(zhuǎn)錄因子啟動子活性及癌蛋白表達進行檢測結(jié)果顯示NFΚB、AP1和HTERT啟動子活性在LO2X3、LO2X5和LO2X、或H7402X3、H7402X5和H7402X細胞中顯著增強而在LO2X1、LO2X2和LO2X4則與對照組無明顯差異。CMYC、PCNA和BCL2蛋白表達在LO2X3、LO2X5和LO2X、或H7402X3、H7402X5和H7402X細胞中顯著上調(diào)而在LO2X1、LO2X2和LO2X4細胞中則與對照組無明顯差異。提示HBX基因整合導(dǎo)致的HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組是肝細胞轉(zhuǎn)化的重要因為之一。3、在肝癌和癌旁組織中檢測HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組體。應(yīng)用PCR方法對60例肝癌組織和癌旁組織中HBX基因進行檢測發(fā)現(xiàn)HBX在60例肝癌組織及其癌旁組織中有44例733％。然后應(yīng)用PCR方法在44例HBX陽性的肝癌組織及其癌旁組織中檢測上述重組體結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有5例肝癌組織中存在與細胞模型中相同的HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組體而在其對應(yīng)的癌旁組織無上述重組體臨床標(biāo)本檢測結(jié)果進一步證實HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組與肝癌發(fā)生有密切的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)HBX基因整合與肝細胞轉(zhuǎn)化具有直接的關(guān)系HBX基因ALU核心序列亞端粒DNA重組導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定是肝細胞轉(zhuǎn)化的重要因為之一。這一發(fā)現(xiàn)首次為揭示HBVDNA在肝細胞基因組中整合的致癌作用提供了直接證據(jù)對于肝癌的預(yù)防具有重要的指導(dǎo)作用。第二部分HBX蛋白促進肝癌細胞遷移分子機制的研究近年研究發(fā)現(xiàn)OPN和CAPN4與腫瘤細胞的生長、增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此HBX蛋白可能通過OPN及CAPN4促進肝癌細胞遷移為此進行了以下研究一、HBX蛋白促進肝癌細胞遷移信號傳導(dǎo)途徑的研究本研究對HBX蛋白促進肝癌細胞遷移的信號傳導(dǎo)途徑進行了探討。前期研究發(fā)現(xiàn)HBX蛋白通過NFΚB上調(diào)肝癌細胞HEPG2和H7402中CAPN4的表達；在此基礎(chǔ)上進一步研究顯示HBX蛋白在啟動子轉(zhuǎn)錄活性、MRNA及蛋白等水平通過5脂氧化酶5LOX上調(diào)肝癌細胞HEPG2和H7402中OPN的表達；進而OPN可以通過NFΚB上調(diào)肝癌細胞HEPG2和H7402中CAPN4的表達；而CAPN4則以正反饋的形式對肝癌細胞HEPG2和H7402中OPN的表達起調(diào)節(jié)作用。體外劃痕實驗顯示HBX蛋白可顯著增強肝癌細胞HEPG2的遷移能力而對HEPG2X細胞中OPN或CAPN4進行RNA干擾后其遷移能力受到明顯抑制。表明HBX蛋白通過正反饋環(huán)HBX5LOXOPNNFΚBCAPN4OPN促進肝癌細胞遷移。二、HBX蛋白突變體HBXΔ127促進肝癌細胞遷移分子機制的研究實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)了一個新的HBX蛋白突變體將其命名為HBX△127。研究表明HBXΔ127具有明顯促進肝癌細胞增殖的作用。在此基礎(chǔ)上本研究探討了HBXΔ127對肝癌細胞遷移的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBXΔ127具有促進肝癌細胞遷移的作用。HBXΔ127可通過5LOX上調(diào)肝癌細胞中OPN的表達進而促進肝癌細胞遷移。與野生型HBX蛋白相比HBXΔ127促進肝癌細胞遷移的作用更強。上述實驗結(jié)果進一步豐富了HBX蛋白及其突變體促進肝癌細胞遷移的分子機制為肝癌的治療提供了理論基礎(chǔ)。

簡介：目的從NADPH氧化酶角度探討針刺改善血管性癡呆大鼠海馬認知水平的抗氧化機制。方法1WISTAR大鼠140只，隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組、針刺組和非穴組。選擇雙血管阻斷法復(fù)制血管性癡呆大鼠模型，針刺治療結(jié)束后，采用光澤精化學(xué)發(fā)光法檢測各組大鼠海馬NADPH氧化酶活性水平；采用WESTERNBLOTTING和PCR方法檢測海馬NADPH氧化酶質(zhì)膜亞基GP91PHOX、P22PHOX蛋白和基因表達水平；用WESTERNBLOTTING檢測各組大鼠海馬胞漿亞基P47PHOX、P40PHOX、P67PHOX蛋白表達情況；2選用GP91PHOX基因敲除KO小鼠及C57BL6野生WT小鼠各20只，全部造模后，同種小鼠隨機分為2組，分別是WT模型組，WT針刺組，KO模型組，KO針刺組模型選擇單血管阻斷法復(fù)制血管性癡呆小鼠，針刺方法同上，治療結(jié)束后，用MRIS水迷宮檢測血管性癡呆小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果1NADPH氧化酶活性評價與正常組相比，模型組NADPH氧化酶活性明顯升高，針刺后海馬NADPH氧化酶活性明顯降低P005；4NADPH氧化酶胞漿亞基P40PHOX、P47PHOX、P67PHOX蛋白表達水平評價與正常組相比，模型組海馬P40PHOX和P47PHOX總蛋白表達水平顯著升高P005；5空間學(xué)習(xí)記憶能力評價與WT模型組相比，WT針刺組逃避潛伏期和游泳距離顯著縮短P005。結(jié)論針刺可通過降低海馬NADPH氧化酶質(zhì)膜亞基GP91PHOX、P22PHOX和胞漿亞基P47PHOX、P40PHOX蛋白表達水平，減弱NADPH氧化酶活性，發(fā)揮抗氧化作用；海馬中GP91PHOX基因敲除可減弱針刺改善VD動物空間學(xué)習(xí)記憶能力的抗氧化作用。

簡介：點擊查看更多輕度認知障礙與失眠的相關(guān)性研究及清腦復(fù)神液治療輕度認知障礙合并失眠的療效觀察.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多天津市流感病毒分子流行病學(xué)的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：四川大學(xué)博士后學(xué)位論文聯(lián)合應(yīng)用可溶性FLT1基因重組腺病毒和順鉑治療舌癌的實驗研究姓名高振南申請學(xué)位級別博士后專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師魏于全20040901四川大學(xué)博士后研究工作報告結(jié)果通過用重組腺病毒感染293細胞、擴增、CSCL梯度超離心純化腺病毒的方法得到2ML感染滴度為1．281010PFU／ML的ADSFLTL重組腺病毒溶液，并得到LML感染滴度為1．121010PFU／ML的ADGFP重組腺病毒溶液，所獲得ADSFLT．1和ADGFP重組腺病毒的數(shù)量和滴度滿足實驗要求。體外檢測ADSFLT1對VEGF誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖的影響實驗發(fā)現(xiàn)來自ADSFLT．1感染舌癌細胞的條件培養(yǎng)基抑制HUVEC細胞增殖的數(shù)量相對來自ADGFP感染舌癌細胞的條件培養(yǎng)基抑制HUVEC細胞增殖的數(shù)量增加61％PO．01，相對來自未感染舌癌細胞的條件培養(yǎng)基PBS增加68％PO．01；說明被ADSFLT1重組腺病毒感染的舌癌細胞可分泌具有抑制內(nèi)皮細胞增殖的活性功能的可溶性FLT一1。用ELISA法檢測腺病毒介導(dǎo)的可溶性F1T．1基因在裸鼠體內(nèi)表達水平實驗顯示可溶性F1T．1基因表達在4天后達到最高水平8MG／ML，以后隨時間推移逐漸下降。分組裸鼠體內(nèi)治療實驗顯示單獨應(yīng)用ADSFLT1或DDP都有抑制舌癌腫瘤生長的作用，但聯(lián)合應(yīng)用ADSFLT1和DDP的抑制舌癌腫瘤生長的作用比單獨應(yīng)用ADSFLT1或單獨應(yīng)用DDP都更明顯PO．05。HE染色鏡下觀察腫瘤細胞，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞凋亡機制參與了DDP和ADSFLT1抑制舌癌生長的作用，聯(lián)合應(yīng)用ADSFLT．1和DDP誘導(dǎo)舌癌細胞凋亡的作用比單獨應(yīng)用ADSFIT．1或單獨應(yīng)用DDP誘導(dǎo)舌癌細胞的作用都更明顯。計數(shù)腫瘤細胞凋亡指數(shù)說明聯(lián)合應(yīng)用ADSFLT．J和DDP誘導(dǎo)舌癌腫瘤細胞發(fā)生凋亡的凋亡指數(shù)比單獨應(yīng)用ADSFLT一1或單獨應(yīng)用DDP誘導(dǎo)舌癌腫瘤細胞發(fā)生凋亡的凋亡指數(shù)均更高PO，05。計數(shù)微血管密度發(fā)現(xiàn)單獨應(yīng)用ADSFLT．1或DDP，

簡介：本論文工作的主要貢獻為將亞細胞蛋白質(zhì)組技術(shù)和比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法相結(jié)合，研究了丙型肝炎病毒亞基因組復(fù)制細胞及其對照細胞的差異蛋白質(zhì)組；另外采用1DSDSPAGELCMS和2DEMALDIMS兩條技術(shù)路線系統(tǒng)地研究了丙型肝炎病毒亞基因組復(fù)制細胞中膜和脂筏蛋白質(zhì)組；利用基于雙向凝膠電泳和生物質(zhì)譜方法的策略對HBSAG陽性及具有同樣背景但HBSAG陰性的轉(zhuǎn)基因鼠肝組織進行了差異蛋白質(zhì)組分析；展示了在MALDI生物質(zhì)譜基質(zhì)中加入添加劑顯著改善譜圖信噪比的效果，并將此推廣應(yīng)用于高通量的蛋白質(zhì)組研究中。本論文研究了丙型和乙型肝炎病毒感染模型中的蛋白質(zhì)組變化及其病理意義。本工作通過對多種體系進行雙向凝膠電泳分離質(zhì)譜鑒定的比較蛋白質(zhì)組定量分析，證明了該方法對于中、高豐度蛋白質(zhì)的比較分析的有效性，它直觀地展示出差異蛋白質(zhì)的表達圖譜，這種差異蛋白表達譜對疾病標(biāo)記分子的發(fā)現(xiàn)和細胞信號途徑等方面的進一步研究提供了實驗依據(jù)。

簡介：山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文太原市社區(qū)老年人輕度認知功能障礙現(xiàn)患及轉(zhuǎn)歸流行病學(xué)研究姓名馬菲申請學(xué)位級別博士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)教師曲成毅20090510山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文口學(xué)、生活方式、疾病史、人格特征、生理、血清生化及基因型別指標(biāo)對MCI發(fā)生的影響作用。③巢氏病例對照研究由600名患輕度認知功能損害的社區(qū)老年居民組成隨訪隊列，與基線調(diào)查相比，智商降低1個SD被認為認知減退，按年齡、性別、文化程度11匹配后形成認知減退組和對照組后進行影響因素分析。④隊列研究篩選600MCI對象構(gòu)成隊列人群，按半年一次隨訪預(yù)定計劃，分別于2007年11月、2008年6月、2008年12月完成三次隨訪。中文版MMSE、GDS、ADL、WAISRC比較MCI和認知正常受試者轉(zhuǎn)化為癡呆、AD或VD的年轉(zhuǎn)化率。采用COX回歸模型分析上述基線指標(biāo)一般人口學(xué)特征、疾病史、基因標(biāo)記、人格特征、血清生化指標(biāo)對MCI者發(fā)生認知減退轉(zhuǎn)化的預(yù)測價值。⑤實驗室檢查對全部MCI和老年癡呆患者抽取靜脈血，檢測血中APOEE4、全血APP基因表達、血脂系列。所有指標(biāo)均設(shè)正常對照進行群組比較研究。對所有MCI和老年癡呆患者采用16PF測定人格，同時采用韋氏成人智力量表WAISRC進行智商評估。⑥統(tǒng)計分析EPIDATE30軟件建立數(shù)據(jù)庫進行兩次數(shù)據(jù)錄入。采用SPSSL30軟件進行分析，首先進行單因素分析，在此基礎(chǔ)上結(jié)合專業(yè)知識，用多因素分析方法對某些可能引起混雜作用變量進行調(diào)整。多因素分析采用L1匹配LOGISTIC回歸模型及NM不等比匹配LOGISTIC回歸模型分析隨訪資料按照人年法計算發(fā)病密度及比較轉(zhuǎn)化為認知減退RR和95％C，；采用LOGRANK檢驗對每一指標(biāo)不同水平隨訪對象認知減退轉(zhuǎn)歸比較。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)檢驗。轉(zhuǎn)歸影響因素篩選若是不可控制變量采用COXREGRESSION過程，可控制變量采用COXW／TIMEDEPCOY過程完成。結(jié)果1現(xiàn)況研究HCL人群發(fā)生率970％95％CI962％977％，單因素結(jié)果顯示年齡、性別、文化程度、月經(jīng)濟收入和婚姻狀況P005。多因素LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示年齡、性別、文化程度、婚姻狀況和職業(yè)、年齡和性別交互作用具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P005。2病例對照研究最終入選病例423人，對照925人。通過單因素和多因素COX回歸分析，得出MCI發(fā)生危險因素，其OR值及95％C1分別是從事體力勞動139610921785；吸煙155110212359血清中較高血糖濃度135411021664；較高高密度脂蛋白水平154312321932；較高低密度脂蛋白水平129910601592；低雌激素水平1263103115471；高血壓196714382689糖尿病138111391675；抑郁癥140611101780腦血栓159313071943；較高收縮壓133111291569；APOE￡4型等位基因146211401873；保護因素有常讀書看報0610O5030740常參加公益活動0617O50207571；常做家務(wù)080406650973；退休后有第二職業(yè)0759O6360。906嗅覺敏銳0900O8450958外向人格0829O6990984果斷人格081106620993。Ⅱ

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文誘導(dǎo)腫瘤、病毒特異細胞免疫及TETRAMER技術(shù)檢測抗原特異CTL姓名李艷萍申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師徐惠綿20040401HLAIMLDAMGPL00MHCPBMCPBSP15EPFUPIRVVSA．PESDS．隊GETCRTETRAMERWIMM人白細胞抗原異丙BD半乳糖甙酶限制性稀釋分析鼠糖蛋白100主要組織相容性復(fù)合物外周血單個核細胞磷酸緩沖鹽逆病毒包膜蛋白空斑形成單位碘化丙碇重組牛痘病毒細菌蛋白藻紅蛋白一十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳T細胞受體二四聚體，WEATHERA分子醫(yī)學(xué)研究所9

簡介：背景對慢性乙型肝炎的自然史研究表明，慢性HBV感染者病情進展和預(yù)后與HBV復(fù)制密切相關(guān)。高病毒血癥、HBEAG持續(xù)陽性、ALT水平高或反復(fù)波動是發(fā)生肝硬化的主要高危因素。自發(fā)性或經(jīng)抗病毒治療后HBEAG血清轉(zhuǎn)換，且HBVDNA持續(xù)轉(zhuǎn)陰和ALT持續(xù)正常者的生存率較高。在同樣的遺傳背景下，HBV病毒負荷是肝硬化患者發(fā)生HCC的最重要的高危因素。說明HBV活動復(fù)制是影響慢性HBV感染者轉(zhuǎn)歸的最重要因素，抗病毒治療是慢性乙型肝炎治療的關(guān)鍵所在。Α干擾素類和核苷類似物是目前被公認為有效的抗乙肝病毒藥物。和Α干擾素相比，核苷類似物其毒副作用少，耐受性好，使用方便，能應(yīng)用于不能使用干擾素的慢性HBV感染患者，是目前慢性乙型肝炎抗病毒治療研究的熱點。其中，阿德福韋酯與其他幾種核苷類似物比較，一方面具有耐藥率低的特點，治療1年未檢出阿德福韋酯耐藥株；另一方面，與拉米夫定、恩替卡韋及特比夫定無交叉耐藥。因此，阿德福韋酯在核苷類似物中有著特殊的地位，已代替拉米夫定成為一線抗乙肝病毒藥物之一。阿德福韋酯可明顯抑制HBVDNA復(fù)制，但其抑制作用在不同個體中差異較大，僅部分病例獲得完全應(yīng)答。影響阿德福韋酯抗乙肝病毒療效的因素不十分清楚。血清HBVDNA、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、HBEAG血清轉(zhuǎn)換是常用于抗乙肝病毒藥物療效評價的主要指標(biāo)。從理論上講，抗病毒療效主要受到藥物、HBV和人體免疫狀態(tài)三方面的影響，如用藥療程、HBV基因型、治療前HBVDNA含量及病毒變異及ALT水平等。目的本研究的主要目的在于評價阿德福韋酯對中國慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA的抑制效果，同時，研究HBV基因型、治療前HBVDNA載量、ALT水平、HBEAG狀態(tài)等與阿德福韋酯病毒學(xué)應(yīng)答的關(guān)系，為制訂個體化抗病毒治療方案提供重要參考信息。方法符合慢性乙型肝炎診斷及方案入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)病例56例，血清HBVDNA定量≥10拷貝／ML、血清ALT水平15且拷貝／ML，0274±114LOG拷貝／MLP拷貝／ML，ALT復(fù)常率達714％40／56，HBEAG血清轉(zhuǎn)換率196％9／46。286％16／56獲得完全應(yīng)答，其中HBEAG陽性／抗HBE陰性者7例，HBEAG陰性／抗HBE陽性者9例。說明阿德福韋酯能通過抑制HBV復(fù)制改善肝功能，促進HBEAG血清轉(zhuǎn)換。HBV基因型分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，52例患者中B型和C型分別占538％和462％，未發(fā)現(xiàn)其他基因型，說明B型和C型是本地區(qū)HBV感染的主要基因型。比較兩種基因型感染者的基線HBVDNA載量、ALT水平、HBEAG狀態(tài)等無明顯差異性分布，說明慢性HBV感染者的HBVDNA載量、ALT水平及HBEAG狀態(tài)與感染HBV基因型B型或C型無顯著相關(guān)。HBV基因型與阿德福韋酯療效的關(guān)系目前并不十分清楚。比較B型和C型感染者治療40周的療效發(fā)現(xiàn)，兩組HBVDNA載量的變化、ALT復(fù)常率及HBEAG血清轉(zhuǎn)換率無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，說明感染HBV基因型B型或C型對阿德福韋酯的療效相當(dāng)，療效不受基因型影響?；€HBVDNA拷貝／ML組及基線HBVDNA≥110拷貝／ML組的HBVDNA陰轉(zhuǎn)率分別為842％、405％P拷貝／ML和732±103LOG10拷貝／MLP拷貝／ML者，使用阿德福韋酯治療后的HBVDNA陰轉(zhuǎn)率、HBEAG血清轉(zhuǎn)換率及完全應(yīng)答率均較高?；€ALT水平≥5ULN者，使用阿德福韋酯治療后HBVDNA載量下降幅度、HBVDNA陰轉(zhuǎn)率明顯高于ALT水平較低者，說明基線ALT水平也是影響阿德福韋酯療效的因素之一，基線ALT水平越高，療效越好。但本研究未顯示ALT水平對完全應(yīng)答有明顯影響。基線HBEAG陰性組和HBEAG陽性組NHBVDNAN轉(zhuǎn)率分別為923％12／13和442％19／43P拷貝／ML和737±090LOG拷貝／ML，P拷貝／ML，ALT≥5倍正常值上限是取得療效的有利因素。感染HBV基因型B型或C型、HBEAG狀態(tài)、年齡、性別、HBV感染家族史等因素與阿德福韋酯的病毒學(xué)應(yīng)答無關(guān)。

簡介：目的1構(gòu)建用于真核細胞表達的重組腺病毒載體PADXSIGFPIKK2DM；2將其包裝成腺病毒顆粒，并進一步轉(zhuǎn)染哺乳細胞HELA并驗證其在細胞中表達，為進一步研究轉(zhuǎn)IKK2DN基因在同種異體器官移植中誘導(dǎo)免疫耐受，保護移植物的作用奠定基礎(chǔ)。方法1將PACCMVPLPASRIKK2DN基因與PSHUTTLEGFPCMVTEMP重組穿梭載體經(jīng)KPNⅠHINDⅢ酶切，回收和純化。T4DNA連接酶進行連接后轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細胞DH5A，丁胺卡那霉素篩選。提取單克隆菌落，作酶切鑒定，抽取陽性菌落即得到PSHUTTLEGFPCMVTEMPIKK2DN重組穿梭載體質(zhì)粒。2將重組穿梭載體質(zhì)粒PSHUTTLEGFPCMVTEMPIKK2DN與重組腺病毒載體質(zhì)粒PADXSI經(jīng)ICEUⅠISCEⅠ雙酶切處理，回收和純化。T4DNA連接酶進行連接后轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細胞DH5A，氨芐青霉素篩選。提取單克隆菌落，作酶切鑒定，抽取陽性菌落即得到PADXSIGFPIKK2DN病毒質(zhì)粒以用于病毒包裝。3脂質(zhì)體法將重組腺病毒載體PADXSIGFPIKK2DN和LIPOFECTAMINE2000脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染于人胚腎細胞系的293T細胞。觀察細胞出毒跡象并進行包裝，收毒，凍融，擴增，再收毒并作毒種鑒定后以離心，透析方法純化腺病毒進行滴度測定及檢測。4并將腺病毒顆粒轉(zhuǎn)染哺乳細胞HELA并驗證其在細胞中表達。結(jié)果1得到74KBP的SHUTTLEGFPCMVTEMPIKK2DN重組穿梭載體質(zhì)粒。2腺病毒載體PADXSIGFPIKK2DN序列測定結(jié)果正確。3最后獲得的腺病毒載體滴度為21011PFUML。4RTPCR驗證腺病毒顆粒成功轉(zhuǎn)染哺乳細胞HELA，可供進一步實驗研究需要。結(jié)論1成功構(gòu)建SHUTTLEGFPCMVTEMPIKK2DN重組穿梭載體質(zhì)粒。2成功構(gòu)建攜帶IKK2DN基因重組腺病毒載體PADXSIGFPIKK2DN。3重組腺病毒載體PADXSIGFPIKK2DN和LIPOFECTAMINE2000脂質(zhì)體成功包裝成高滴度腺病毒顆粒。4腺病毒顆粒成功轉(zhuǎn)染哺乳細胞HELA，為進一步研究轉(zhuǎn)IKK2DN基因在同種異體器官移植中誘導(dǎo)免疫耐受，保護移植物提供了理論和實驗基礎(chǔ)。