簡介：年齡和認知方式對前瞻記憶的影響年齡和認知方式對前瞻記憶的影響摘要前瞻記憶PROSPECTIVEMEMORY是指對預定事件或行為的記憶，如記住1小時后打電話。前瞻記憶是一種特殊的長時記憶，它是相對于回溯記憶RETROSPECTIVEMEMORY而提出來的。回溯記憶是指對過去己發(fā)生的事件或行為的記憶，如昨天學習的課程內容是什么前瞻記憶研究始于二十世紀七十年代，并在近年成為記憶心理學的研究熱點。本文在綜述部分對前瞻記憶的定義、特點、分類以及前瞻記憶和回溯記憶的區(qū)別與聯(lián)系、前瞻記憶的研究方法、前瞻記憶的機制的研究、影響前瞻記憶的因素等方面進行了介紹。通過查閱國內、外資料發(fā)現(xiàn)有關兒童前瞻記憶的研究很少，而且實驗研究的分布年代較廣，各任務變量相差很大，年齡因素對前瞻記憶的影響沒有一個一致的結果，我們在更大的年齡范圍小學、初中、高中采用前瞻記憶研究的典型實驗范式來研究不同類型的前瞻記憶的長期發(fā)展軌跡。同時，個體差異是影響前瞻記憶的一個重要因素，場獨立一場依存的認知方式作為一個重要的人格緯度，表示人們在信息加工過程中依賴外部線索和內部線索的傾向性。己有研究表明，場獨立型的個體具有較成熟的元認知技能，特別是較強的注意監(jiān)控技能以及信息的提取和組織技能，場獨立型被試在元認知方面的優(yōu)勢應有利于他們完成前瞻記憶任務。因此，我們認為場依存性認知方式是影響前瞻記憶的一個因素。為探討年齡、認知方式對前瞻記憶的影響，本研究以非反義詞對包括三對同義詞對、反義詞對為實驗材料，小學三年級、初中一年級、高中一年級學生為被試，采用3年齡小學初中高中X2認知方式場獨立型場依存型X2任務類型基于事件基于時間重復測量一個因素的三因素混合實驗設計，其中年齡、認知方式為被試間因素，任務類型為被試內因素研究結果表明當進行中任務為反義詞一非反義詞判斷任務時，1場獨立者的前瞻記憶成績顯著好于場依存者2基于事件的前瞻記憶成績明顯好于基于時間的前瞻記憶成績3各年齡段前瞻記憶成績沒有顯著差異4前瞻記憶的完成需要認知資源，支持注意一搜索模型和多重加工機制。年齡和認知方式對前瞻記憶的影響THEEFFECTOFCOGNITIVESTYLEAGEONPROSPECTIVEMEMYABSTRACTPROSPECTIVEMEMORYPROMISATYPEOFMEMORYINWHICHANINDIVIDUALMUSTREMEMBERTOPERFONNANEXTENDEDACTIVITYATSOMEDESIGNATEDPOINTINTHEFURTHERFOREXAMPLEREMEMBERINGTOCALLSOMEBODYTOMORROWMORNINGPROSPECTIVEMEMORYISONESPECIALTYPEOFLONGTIMEMEMORYITISDIFERENTFROMRETROSPECTIVEMEMORYRETROMWHICHCONCERNSTHEMEMORYTAKENPLACEINTHEPARTTIMEFOREXAMPLEREMEMBERINGWHATHADLEARNEDYESTERDAYATSCHOOLBEFORE19705PROSPECTIVEMEMORYWEREUNKNOWNBUTITISBOILINGWITHIDEASANDFINDINGSRECENTYEARSINTHEINTRODUCTIONTHEDEFINITIONFEATURESANDTYPEOFPROSPECTIVEMEMORYDIFERENCEBETWEENPROSPECTIVEMEMORYANDRETROSPECTIVEMEMORY、RESEARCHMETHODOFPROSPECTIVEMEMORYTHEFACTORSTHATINFLUENCEASUBJECTSPERFORMANCEINPROSPECTIVEMEMORYTASKSMECHANISMSANDAPPLICATIONOFPROSPECTIVEMEMORYTHEIMPORTANCEOFPROSPECTIVEMEMORYRESEARCHANDSOONAREINTRODUCEDACCORDINGTHEARTICLESBEFOREWEFINDTHATNOTONLYTHEREWEREAFEWSTUDIESONPROSPECTIVEMEMORYABOUTCHILDRENBUTALSOTHESERESEARCHWEREDIFERENTINDESIGNANDRESULTSOWEEMPLOYTHETYPICALEXPERIMENTALPARADIGMTORESEARCHTHEDEVELOPINGTRACKOFPROSPECTIVEMEMORYINADDITIONPERSONALITYISANIMPORTANTFACTORTHATINFLUENCESPROSPECTIVEMEMORYTHEFIELDDEPENDENCEINDEPENDENCEFDIISANIMPORTANTCOGNITIVESTYLEITREFLECTSTHEINDIVIDUALDIFERENCEINTERMSOFTHEAUTONOMYOFEXTERNALORINTERNALREFERENTFROMTHERECENTSTUDIESCONCERNEDWITHFDIRESEARCHERSARGUETHATFIELDDEPENDENCEFDINDIVIDUALSDEVELOPTHEMETACOGNITIVEWHICHISSKILLEDMOREEARLYANDMOREEFFICIENTLYTHANFIELDINDEPENDENCEFIINDIVIDUALS，ESPECIALLYTHEATENTIONMONITORCONGNITIONRESTRUCTUREETCTHESUPERIORITYOFFDINDIVIDUALSINMETACOGNITIVEWILLBENEFITTHEPERFORMANCEOFPROSPECTIVEMEMORYSOTHEFDIMIGHTBEAFACTORTHATINFLUENCETHEPROSPECTIVEMEMORYTHEPRESENTRESEARCHSTUDIEDTHEEFECTOFFDITYPEOFTASKANDAGEONPROSPECTIVEMEMORYTHEDESIGNOFTHEEXPERIMENTWASA2COGNITIVESTYLEFDFIX2TYPEOFPROMEVENTBASEDTIMEBASEDX3AGEPRIMARYSCHOOLJUNIORMIDDLEIII

簡介：國家海洋局第三海洋研究所學校編碼學校編碼8530385303分類號分類號密級密級學號學號85303094028530309402UDCUDC碩士學位論文WSSV膜蛋白VP26與核衣殼蛋白VP51相互作用位點的鑒定及低溫保存WSSV病毒粒子方法的建立RESEARCHESONTHEINTERACTIONSITESBETWEENTHEENVELOPEPROTEINVP26NUCLEOCAPSIDPROTEINVP51OFWHITESPOTSYNDROMEVIRUSTHEMETHODOFPRESERVINGWSSVATLOWTEMPERATURE李侃指導教師姓名楊豐教授專業(yè)名稱微生物學論文提交日期2012年06月論文答辯時間2012年06月學位授予日期答辯委員會主席評閱人2012年06月國家海洋局第三海洋研究所國家海洋局第三海洋研究所學位論文著作權使用聲明學位論文著作權使用聲明本人同意國家海洋局第三海洋研究所根據(jù)中華人民共和國學位條例暫行實施辦法等規(guī)定保留和使用此學位論文，并向主管部門或其指定機構送交學位論文（包括紙質版和電子版），允許學位論文進入本所圖書館及其數(shù)據(jù)庫被查閱、借閱。本人同意國家海洋局第三海洋研究所將本學位論文的全部或部分編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其它方式合理復制方式保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于（）1在年月日解密，解密后適用上述授權。（）2不保密，適用上述授權。（請在以上相應括號內打“√”或填上相應內容。保密學位論文應是已經(jīng)國家海洋局第三海洋研究所保密委員會審定過的學位論文，未經(jīng)本所保密委員會審定的學位論文均為公開學位論文。此聲明欄不填寫的，默認為公開學位論文，均適用上述授權。）論文作者簽名日期年月日指導老師簽名日期年月日

簡介：分類號學校代碼10542密級學號2001420080654ACOGNITIVESTUDYOFXIEYINPARODYIN叫■●J_●1▲1J●JNUMNESEU0MMERCLALAAVENLSEMENTSFROMTHEPERSOECTIVEOFAUTONOMY．．DEPENDENCYANALYSISFRAMEWORK自主一依存分析框架下漢語商業(yè)廣告中諧音仿擬的認知研究指導教師姓名、職稱盜墓咽型塾撞學科專業(yè)墓適逢童塞堂湖南師范大學學位評定委員會辦公室二。一七年五月ABSTRACTX／EY／NPARODYHASCOMEINTOWIDESPREADUSEINNOWADAYSCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSTHANKSTOITSNOVEL，VIVIDANDECONOMICALWAYOFDELIVERINGPRODUCT’SSELLINGPOINTANDINCITINGTHEAUDIENCE’SPURCHASE．DESPITETHEFACTTHATLINGUISTICRESEARCHESONTHISPHENOMENONHAVEMADEFRUITFULPROGRESSFROMTHEPERSPECTIVEOFRHETORIC，PSYCHOLOGYANDPRAGMATICS，WHOSEFOCALPOINTSAREDEFINITION，CLASSIFICATIONANDEXPRESSIVEEFFECTS，THERESTILLNEEDSACOGNITIVEEXPLANATIONTOREVEALHOWITISGENERATEDBYTHEADVERTISERANDHOWITISINTERPRETEDBYTHEAUDIENCE．THISTHESISAIMSTOSTUDYXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSFROMACOGNITIVEPERSPECTIVE．ITADOPTSPROFESSORXUSHENGHUAN’SAUTONOMYDEPENDENCYANALYSISFRAMEWORKASTHETHEORETICALFOUNDATION，MAINLYEMPLOYINGAQUALITATIVEANALYSIS，DEDUCTIONANDINDUCTIONTOPROBEINTOTHEGENERATIONANDINTERPRETATIONOFXZENPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTS．THISTHESISHASANSWEREDTHEFOLLOWINGTWOQUESTIONS1HOWISXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSGENERATEDBYTHEADVERTISERS2HOWISXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSINTERPRETEDBYTHEAUDIENCETHEFINDINGSOFTHISTHESISAREASFOLLOWS1THISPHENOMENONISNOTAMERERHETORICORNAMENTBUTTHERESULTOFCOGNITIVEPROCESSREFLECTINGTHE

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簡介：北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院博士學位論文慢性活動性EPSTEINBARR病毒感染患兒的臨床診斷方法及免疫學機制的研究姓名邢燕申請學位級別博士專業(yè)兒科指導教師魏珉宋紅梅20080630中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學北京協(xié)和醫(yī)學院博士研究生學位論文AEBV血液學方面的診斷包括外周血白細胞升高且以淋巴細胞升高為主、異型淋巴細胞10％，而進一步淋巴亞群分析往往提示這些增多的細胞為CD38DRCD8的T淋巴細胞。而CAEBV在血液學和淋巴亞群方面是否有可以協(xié)助CAEBV臨床診斷的、不同于AEBV和正常兒童的特點，至今還沒有這方面的報道。外周血單個核細胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLS，PBMC總DNA水平一樣的患兒不等于EBV在各種淋巴細胞的感染程度和引起的免疫細胞應答一樣，有報道EBV感染T細胞為主型與CAEBV的高死亡率呈正相關性，需要早行骨髓移植等的更積極的治療方案。國內常規(guī)的檢測外周血EBVODNA的方法不能區(qū)分EBV感染的淋巴細胞種類，進而不能明確CAEBV患兒EBV更具體的感染情況，因此明確CAEBV的感染細胞類型，幫助A垣BV的臨床分型診斷，可能對更深入的研究其病毒學發(fā)病機制、指導個體化診治及判定預后有重要意義。關于CAEBV的發(fā)病機制方面，病毒抗原自身和宿主兩方面的因素導致EBV免疫逃逸的機制在CAEBV的發(fā)病過程中可能起了重要作用。宿主針對EBV的正常免疫應答包括固有免疫和獲得性又稱適應性免疫。國外研究顯示，宿主的適應性細胞免疫應答特別是EBV特異的CD4T細胞應答和CD8T細胞應答對EBV的清除和疾病的轉歸有著重要意義，而CAEBV患兒存在細胞免疫功能紊亂與其病情慢性活動性相關。但目前的研究大多局限于針對CAEBV患兒CD4T細胞、CD8T細胞和NK細胞的變化進行分析，尚沒有CAEBV的T細胞功能亞群、調節(jié)亞群、初始又稱純真記憶亞群和激活亞群的研究。CAEBV時宿主針對EBV特異的適應性細胞免疫應答方面，目前CAEBV的發(fā)病機制尚不完全清楚，國外研究顯示，EBV特異的細胞毒T淋巴細胞CYTOXICTLYMPHOCYTE，CTL數(shù)目的減少可能是EBV免疫逃逸的重要機制之一。然而，EBVCTL的數(shù)目并不完全代表宿主針對EBV特異的適應性細胞免疫的功能，尤其是EBVCTL功能的真實狀況，目前CAEBV感染尚沒有針對EBV肽段庫方面的CD8的EBV特異CTL功能方面的研究。2

簡介：防御素是人們在研究哺乳動物、昆蟲等防御和抵抗病原微生物侵襲及感染過程中發(fā)現(xiàn)的一種內源性陽離子多肽，因其具有廣譜抗菌作用以及不易產(chǎn)生耐藥的特點而被寄厚望成為新一代抗生素。近年來越來越多的研究表明，除了具有抗菌活性，防御素還具有顯著的抗病毒作用。此外，人們發(fā)現(xiàn)防御素作為天然免疫防線的重要成員，除可以直接殺傷、抑制病原微生物感染外，它還具有調節(jié)或激活免疫反應的作用，使其間接的協(xié)助機體抵抗病原微生物感染。人Α防御素5HUMANDEFENSIN5，HD5主要由腸道PAH細胞和女性生殖道粘膜上皮細胞表達和分泌，另外在尿道上皮組織中也檢測到HD5的存在。正是由于這些區(qū)域經(jīng)常受到外來微生物的侵入，環(huán)境選擇導致的進化壓力造就了HD5具有突出的抗病原微生物活性，因此更具開發(fā)應用價值。對于防御素的抗病毒作用，人們研究較多、較深入的是其抗包膜病毒如HIV、HSV等的作用，有關防御素對無包膜病毒的抗感染作用尚未引起人們的充分關注。人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV作為通過性傳播感染的常見的病原體，是一種典型的無包膜DNA病毒，約75的人群在其一生中均會受到HPV感染；其主要侵害人生殖器、肛門以及口咽部位的上皮細胞。研究表明，高危型HPV的感染與一些肛門生殖器區(qū)腫瘤的發(fā)生之間有著一定關聯(lián)，其中HPV16、HPV18亞型的長期感染已經(jīng)被證實為宮頸癌發(fā)生的一個主要誘因。而目市面上還前沒有針對HPV感染的特異性藥物，因此深入研究HD5的抗HPV作用，有望為防治HPV感染尋找新的治療途徑。由于HPV對宿主細胞有嚴格的特異性而且其增殖也依賴皮膚或黏膜細胞的分化，因此應用常規(guī)的組織培養(yǎng)技術不易進行大量制備；另外，從病變組織中分離獲取足夠數(shù)量的病毒用于抗病毒藥物的藥效評價也十分困難。隨著HPV假病毒制備技術的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)能夠通過質粒轉染，較簡單地使目的HPV病毒體在外培養(yǎng)的細胞內進行增殖、表達和組裝，并最終獲得足夠高滴度且包裹有熒光報告基因的HPV假病毒，從而便于病毒感染程度的直接觀察和定量分析。另外，由于防御素分子內存在著3對二硫鍵，采用化學合成法對其制備存在著很大的技術難度，從而在一定程度上限制了其開發(fā)與推廣應用。至于二硫鍵對防御素活性的影響，人們的認識并不一致，有些研究認為二硫鍵可以顯著影響防御素的抗微生物活性；但也有研究認為防御素的抗微生物活性主要與其所帶正電荷的多少有關，而與二硫鍵的存在與否關系不大。近來有文獻報道，二硫鍵的缺失不會顯著影響人Β防御素3的抗菌活性，而去除了二硫鍵和半胱氨酸的防御素或其衍生多肽則比較容易通過化學合成法進行生產(chǎn)和制備。HD5分子中的二硫鍵和半胱氨酸是否會影響其抗病毒活性，化學合成的HD5線性多肽是否還具有抗病毒作用，這些都還缺乏深入研究。揭示二硫鍵及半胱氨酸在HD5抗病毒活性中的作用，將會為其今后的研制與開發(fā)提供重要參考。本文利用HPV假病毒研究新技術首先制備了含綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEIN，GFP報告基因的HPV16假病毒，并建立HPV16假病毒感染宮頸癌細胞模型，然后采用熒光觀察和流式細胞分析技術測定了幾種不同構型HD5多肽的抗HPV16感染作用，同時還觀察了HD5多肽的趨化作用。具體研究方法包括通過將表達HPV16病毒衣殼蛋白的質粒與GFP報告基因質粒同時轉染293FT細胞，制備包含GFP報告基因的HPV16假病毒并用多種方式進行鑒定，然后通過流式細胞分析測定GFP表達率來計算病毒滴度；用制備的HPV16假病毒感染3種不同宮頸癌細胞株，選定最合適的細胞感染模型；合成HD5N天然構型、HD5NFAM帶熒光標記、HD5ACM半胱氨酸被ACM修飾，線性、HD5ABU半胱氨酸被ABU替換，線性等HD5多肽，首先采用激光共聚焦觀察HD5NFAM與細胞的作用情況，然后采用鏡下熒光觀察和流式細胞術檢測在不同HD5多肽作用48小時后，被HPV16假病毒感染的細胞中GFP蛋白的表達水平，并計算出多肽對病毒的抑制率；最后，分別用不同構型HD5多肽刺激CASKI細胞，ELISA法檢測細胞上清中趨化因子IL8的分泌情況，以觀察HD5多肽的間接趨化作用，同時，通過TRANSWELL趨化遷移實驗研究不同構型HD5多肽對中性粒細胞的直接趨化作用。本文取得了以下主要研究結果1表達HPV16病毒衣殼蛋白的質粒與GFP報告質粒均成功轉染293FT細胞，經(jīng)鑒定最終制備出含GFP報告基因的HPV16假病毒，滴度達到23108TUML。2HPV16假病毒能夠感染體外培養(yǎng)的宮頸癌細胞，其中以C33A細胞感染率最高。3HD5N能夠劑量依賴性地抑制HPV16假病毒感染C33A細胞，在濃度為50ΜGML時，HD5N對HPV16假病毒感染的抑制率已接近100。4HD5NFAM與細胞作用2～3小時后，共聚焦顯微鏡觀察到HD5可以大量進入細胞質，并且可能主要集中于內吞體、溶酶體中。5濃度為20ΜGML的HD5N、HD5ACM、HD5ABU對HPV16感染C33A細胞的抑制率分別為9648±567、6902±788和271±15300。與HD5N相比，HD5ACM的抗HPV作用顯著降低，而HD5ABU則基本失去抗HPV活性。6不同構型HD5刺激CASKI細胞分泌趨化因子IL8的能力由高到低依次為HD5NHD5ACMHD5ABU；同樣，HD5N直接趨化外周血中性粒細胞遷移的能力也顯著高于HD5ACM和HD5ABU。本文主要結論1成功構建了含GFP報告基因的HPV16假病毒感染宮頸癌細胞模型，建立了基于流式細胞分析的抗HPV病毒感染定量檢測方法，為準確評價HD5的抗HPV病毒感染作用奠定了基礎。2HD5N具有顯著抑制HPV16病毒感染的作用，并證實HD5可以進入細胞質中，提示HD5可能通過限制病毒顆粒在細胞內的轉運、脫衣殼等過程來發(fā)揮抗病毒作用。3與HD5N相比，HD5ACM的抗HPV16作用明顯減弱，提示二硫鍵對HD5的抗病毒作用有著顯著影響；與HD5ACM相比，HD5ABU的抗HPV16作用進一步減弱，提示HD5多肽抗病毒作用的發(fā)揮依賴于分子中半胱氨酸殘基的存在。4HD5ACM、HD5ABU的間接和直接趨化作用均較天然結構的HD5明顯減弱，提示HD5的趨化作用可能受二級結構影響，HD5介導的免疫趨化作用可能參與了其抗病毒效應的發(fā)揮。

簡介：輪狀病毒ROTAVIRUS，RV屬于呼腸孤病毒屬，是一種無包膜的二十面體形狀病毒。RV衣殼由三層同心包裹的結構蛋白構成，核心含有一個由11個雙鏈RNA片段構成的基因組，后者編碼12個病毒蛋白，包括6個結構蛋白VP14，6，7和6個非結構蛋白NSP16。輪狀病毒具有嚴格的細胞嗜性，只能有效感染胃腸道上皮及腎上皮細胞。人和動物的嬰幼個體對輪狀病毒普遍易感。然而，隨著年齡的增大，他們對RV的易感性也顯著降低。產(chǎn)生這種變化的原因可能是在個體的生長過程中，針對RV的某些宿主限制性細胞因子出現(xiàn)了表達。目前許多研究表明一些宿主蛋白例如APOBEC3G、LV1、REF1及EWI2WINT具有明顯的抑制病毒感染的作用，而這些宿主限制性因子的表達可增加宿主對病毒的抵抗能力，降低宿主的易感性。然而，在RV感染中，類似的具有抑制RV感染的宿主蛋白卻少有發(fā)現(xiàn)。如同在其它很多的病毒感染，在RV感染中，宿主蛋白的合成受到了廣泛的抑制。但是有研究發(fā)現(xiàn)，一些宿主蛋白如整合素Α2Β1、Β2及伴侶蛋白GRP78、GRP94在RV感染過程中表達上調，并在RV的復制過程中發(fā)揮重要作用。這些結果表明RV能夠選擇性促進某些宿主蛋白的表達以保證病毒感染的順利進行。相反，宿主細胞是否同樣可以通過上調一些抗RV的宿主蛋白的表達以抑制RV的感染呢RV感染是導致全球范圍內5歲以下嬰幼兒急性脫水腹瀉的主要原因。RV腹瀉發(fā)生的確切的分子機制到目前為止仍然沒有定論。最初RV腹瀉被認為是由于小腸絨毛頂部腸上皮細胞被RV感染后生理功能受到破壞引起的。一些體外實驗研究表明RV感染可以引起腸上皮細胞的凋亡和壞死。在對RV腹瀉動物模型的研究中進一步發(fā)現(xiàn)RV感染可以導致小腸粘膜發(fā)生病理改變及功能異常，其程度的輕重取決于。RV病毒株的毒力。然而，這種機制難以解釋為什么在RV腹瀉中常常發(fā)現(xiàn)腸道粘膜只有輕微的組織病理學改變且沒有腸上皮細胞的破壞的現(xiàn)象。其它一些研究發(fā)現(xiàn)，RV感染后腸上皮細胞刷狀緣相關的一些酶如蔗糖酶異麥芽糖酶SI、乳糖酶根皮苷水解酶，二肽基肽酶ⅣDPPⅣ、NAD葡萄糖轉運體1SGLT1以及NAL丙氨酸轉運體的表達及活性的出現(xiàn)損害，由此推測RV感染導致腸上皮細胞對葡萄糖和氨基酸的消化吸收能力減弱可能是RV感染引起腹瀉發(fā)生的一種可能的機制。但是這些研究都未能給出一個被廣泛接受的RV感染引起腹瀉發(fā)生的具體的分子機制。近年來，蛋白質組技術被廣泛應用于病毒感染的研究之中，這對揭示病毒感染的病理生理機制，深化我們對病毒宿主相互作用的認識發(fā)揮了巨大作用。在本研究中，我們通過蛋白質組技術來發(fā)現(xiàn)新的RV宿主限制性因子以及探究RV腹瀉的新機制。本研究分為兩部分，第一部分采用二維凝膠電泳2DE等技術發(fā)現(xiàn)新的RV宿主限制因子，觀察宿主細胞的天然免疫機制是如何應對RV感染的；第二部分則運用一種先進的定量蛋白質組技術SILAC來研究RV感染腸上皮細胞引發(fā)腹瀉的分子機制，觀察RV是如何破壞宿主的天然免疫屏障從而致病的。本研究將會加深對RV感染及RV與宿主細胞相互作用分子機制的認識，為RV腹瀉的預防和治療提供實驗依據(jù)。第一部分新的RV宿主限制性因子發(fā)現(xiàn)首先，我們確定了RV感染的合適時間和MOI以獲得最好的感染效果和細胞活力，這對隨后的二維凝膠電泳分析十分重要。為進行二維凝膠電泳樣本的制備，我們將MA104培養(yǎng)在直徑10CM的組織培養(yǎng)皿中，當細胞完全匯合時，用用純化的人輪狀病毒W(wǎng)A株感染MOI3，同時用等量的DMEM作為對照感染。細胞感染12后用冷09％NACL沖洗感染的細胞，蛋白裂解液提取細胞總蛋白。采用13CMREADYSTRIPIPG膠條非線性，PI310在IPGPH電泳系統(tǒng)上進行蛋白質的等電聚焦。等電聚焦結束后，將膠條置于預先制好的125％聚丙烯酰胺凝膠上垂直電泳以進行多肽分離。電泳結束后，用膠體藍對凝膠進行染色，并采用GS800掃描儀對染色后的凝膠進行掃描，用PDQUEST61軟件進行圖像分析。我們選擇RV感染后表達顯著上調50％以上的蛋白點，通過MALDITOFMS進行蛋白序列鑒定。結果顯示在人RVWA株感染的MA104細胞中共發(fā)現(xiàn)24個蛋白點的表達顯著上調50％以上，質譜成功鑒定了其中16個蛋白點。在成功鑒定的蛋白點中，11個為宿主蛋白10種，5個點為病毒蛋白4種。我們隨機選取了一些宿主蛋白如ACP1、ALDOA、CYPA和KRT20對它們的表達采用WESTERNBLOT和QRTPCR等方法進一步驗證。其次，為了明確CYPA在RV感染中的作用，我們先進行了免疫熒光實驗。結果發(fā)現(xiàn)在RV感染MA104細胞后，CYPA與RV非結構蛋白NSP5出現(xiàn)顯著共定位，提示CYPA被招募到RV病毒粒質。繼而我們通過免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)，RV結構蛋白VP2與CYPA能夠相互共沉淀，表明這兩種蛋白質可能存在直接或間接的相互作用。在此基礎上為了進一步明確CYPA是否對RV感染有抑制或促進作用，我們在宿主細胞內過表達野生型CYPA及其脯氨酰順反異構酶功能缺失突變體CYPAR55A，或干擾宿主細胞內源性CYPA的表達，觀察這些處理對RV感染的影響。結果顯示，過表達野生型CYPA顯著降低RV復制，而過表達CYPAR55A會顯著促進RV復制。降低內源性CYPA表達同樣顯著促進RV的復制。這些結果顯示CYPA可以通過其脯氨酰順反異構酶活性抑制RV復制。同時，過表達CYPA及其酶功能缺失突變體CYPAR55A均能降低宿主對RV的易感性。進一步研究發(fā)現(xiàn)CYPA還可以通過促進宿主細胞IFNI反應來抑制RV感染，這種功能不依賴于其脯氨酰順反異構酶活性但是可能依賴于宿主細胞JNK信號路徑的激活。最后，由于新生BALBC小鼠對RV非常易感，RV感染容易產(chǎn)生腹瀉癥狀。隨著日齡的增大2周BALBC小鼠對RV易感性顯著降低。為了明確小腸上皮細胞CYPA的表達是否與BALBC小鼠對RV易感性的變化相關，我們比較了不同日齡段BALBC小鼠小腸上皮細胞中CYPA的表達，發(fā)現(xiàn)在新生小鼠5日齡CYPA僅在小腸絨毛底部，主要是在腸隱窩處上皮細胞中有少量表達，而在RV容易感染到的小腸絨毛上部的上皮細胞中幾乎不見CYPA的表達。相反，在稍大的BALBC小鼠15日齡的小腸絨毛，不管是絨毛頂端還是基底部，其上皮細胞中CYPA均有豐富的表達。這些結果表明，新生BALBC小鼠小腸絨毛上段上皮細胞中CYPA表達缺失可能是導致其對RV易感的重要原因。第二部分RV感染腸上皮細胞引發(fā)腹瀉新機制的發(fā)現(xiàn)首先，我們用人輪狀病毒W(wǎng)A株感染人腸上皮細胞CACO2，同時在培養(yǎng)基中加入100ΜGML胰蛋白酶，以此模擬腸道消化性的環(huán)境，觀察腸腔內消化性環(huán)境對RV感染腸上皮細胞后果的可能影響。實驗發(fā)現(xiàn)，在消化性環(huán)境中RV的感染會導致腸上皮細胞快速脫落。臺盼藍染色表明脫落的細胞活性良好，流式細胞術結果顯示這些脫落的細胞在脫落時沒有出現(xiàn)明顯的凋亡或壞死。在非消化性環(huán)境下腸上皮細胞只會在RV感染的末期才出現(xiàn)明顯的脫落，此時脫落細胞幾乎全部凋亡及壞死。結果提示，體內RV感染中，被感染的腸上皮細胞可能還沒有來的及凋亡或壞死或其它明顯功能損害就已經(jīng)從基底膜脫落，徹底失去功能。我們進一步檢測了小腸內不同段腸腔內的胰蛋白酶的活性，結果顯示在BABLC小鼠幼仔的空腸中、下段和回腸的上段胰蛋白酶活性最高。此外，通過結晶紫對BABLC腸上皮細胞進行活體染色發(fā)現(xiàn)，RV感染引起的腸上皮細胞脫落在上述腸段中最為明顯。我們的結果提示RV感染導致腸上皮細胞在腸道消化性環(huán)境中快速脫落可能才是RV腹瀉產(chǎn)生的根本原因。其次，為了尋找消化性環(huán)境中RV感染引腸上皮細胞快速脫落的直接原因，我們采用了一種定量蛋白質組學方法細胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素氨基酸標記SILAC來分析RV感染后CACO2細胞蛋白表達譜的變化。結果顯示，RV感染顯著削弱了與細胞間的粘附相關蛋白以及細胞與細胞外基質的粘附相關的蛋白質的表達，如ECAHERIN，PLAKOGLOBIN，DESMOPLAKIN，層粘連蛋白B2，纖維連接蛋白1，PLECTIN1，CINGULIN以及ZO1等。WESTERNBLOT及QRTPCR進一步證實了這些蛋白質在RV感染后顯著下降。免疫熒光實驗進一步驗證了RV感染引起細胞間連接包括緊密連接，粘附連接以及橋粒連接的嚴重損壞。進一步通過結晶紫染色發(fā)現(xiàn)，RV感染顯著破壞腸上皮細胞屏障功能，增大細胞間隙，導致胰蛋白酶向細胞底部嚴重滲漏，從而破壞細胞細胞外基質粘附，最終引起上皮細胞脫落。最后，為了明確RV感染導致細胞粘附功能破壞從而引起腸上皮細胞脫落的的相關信號機制，我們對RV感染中可能涉及到的激酶和磷酸酶與細胞脫落之間的關系進行了研究。我們發(fā)現(xiàn)抑制酪氨酸蛋白激酶可以顯著抑制消化性環(huán)境中RV感染引起的腸上皮細胞的脫落，抑制蛋白酪氨酸磷酸酶則顯著促進RV感染及感染的腸上皮細胞的脫落。抑制蛋白酶磷酸2APP2A同樣顯著促進RV感染引起腸上皮細胞的脫落。此外，免疫印跡法顯示RV感染引起PP2A兩個主要結構亞單位PPP2R1A和PPP2R1B表達減少。RV感染可以引起細胞胞漿內CA2濃度升高，我們結果顯示，通過離子霉素和毒胡蘿卜素增大胞漿CA2濃度加速RV感染引起的細胞脫落。然而，使用BAMPTAM和U73122抑制胞漿內CA2增加卻不能阻止消化性環(huán)境中RV感染引起的腸上皮細胞的快速脫落。這表明RV感染引起胞漿CA2的增加只是導致宿主細胞的脫落促進因素而非決定因素。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)CYPA是一種新的抗RV感染的宿主限制性因子。CYPA通過本身的脯氨酰順反異構酶活性抑制RV的復制，其在腸上皮細胞中的表達可能與宿主對RV的易感性密切相關。CYPA同時還可以通過介導宿主細胞IFNI反應來抑制RV感染。CYPA的這種功能不依賴于其脯氨酰順反異構酶活性，而可能依賴于宿主細胞中JNK信號通路的激活。另一方面，我們發(fā)現(xiàn)在消化性環(huán)境中RV感染會導致腸上皮細胞快速脫落，這種現(xiàn)象可能才是RV腹瀉產(chǎn)生的真正原因。而造成細胞脫落的原因與RV感染引起腸上皮細胞粘附功能及屏障功能的破壞，胰蛋白酶滲透到細胞基底部破壞細胞與細胞外基質的粘附密切相關。在這個過程中，RV感染引起的酪氨酸蛋白激酶的激活以及PP2A的抑制起到了關鍵作用，而RV感染引起的CA2的內流是加重而非決定因素。

簡介：輪狀病毒ROTAVIRUSRV是引起兒童重癥腹瀉的最常見病原之一。據(jù)估計，僅2004年輪狀病毒感染引起約527000死亡病例，主要發(fā)生在發(fā)展中國家。嚴重地威脅到兒童的健康，由于目前尚無治療輪狀病毒的特效藥，因此預防尤為重要。當前全球范圍內批準上市的疫苗有三種單價人減毒活疫苗ROTARIX、五價牛人重配株疫苗ROTATEQ和單價羊株減毒活疫苗LLR。然而，因大多數(shù)輪狀病毒疫苗是不同重配疫苗株混合而成的多價疫苗，因此，其研制、生產(chǎn)和臨床評價中各型毒株的特異性體內外定量和定性檢測是疫苗質量控制的關鍵。本文運用SPF兔和無菌兔來研究輪狀病毒疫苗免疫和感染情況，為新型輪狀病毒疫苗的臨床評價奠定基礎。第一部分輪狀病毒LLR減毒活疫苗對SPF兔和無菌兔的致病性和免疫原性研究第一部分實驗選用SPF級兔和無菌兔為動物模型，通過免疫接種單價羊株輪狀病毒減毒活疫苗，研究檢測免疫前后有關指標的變化用ELISA檢測血清中IGA和IGG的變化來評價接種疫苗后動物的體液免疫；用流式細胞儀檢測外周血CD4CD8比值的變異來研究接種疫苗后動物細胞免疫的變化；通過檢測動物的便樣，觀察是否出現(xiàn)腹瀉癥狀和排出病毒和通過免疫組化觀察小腸中是否有輪狀病毒來闡明LLR是否在小腸繁殖感染小腸。結果表明LLR疫苗可以誘導SPF和無菌兔產(chǎn)生包括體液免疫和細胞免疫在內的RV特異性免疫應答；可在小腸復制但不致病。第二部分輪狀病毒VP6基因的表達第二部分實驗研究了羊株輪狀病毒VP6基因在大腸桿菌中的表達。通過用TRIZOL法從羊株輪狀病毒減毒活疫苗中提取RNA病毒，RTPCR擴增輪狀病毒第6節(jié)段基因全長，與PMD18T載體連接、轉化、篩選陽性克隆。將重組質粒進行PCR擴增VP6基因，再與載體PET32A連接構建PET32AVP6表達載體，測序結果正確，VP6基因在大腸桿菌BL21DE3中誘導表達，WESTERNBLOT鑒定證明了表達產(chǎn)物為RVVP6蛋白。獲得的VP6蛋白抗原用于制備檢測血清中輪狀病毒IGA的ELISA試劑盒，為將來有效地評價輪狀病毒疫苗的臨床效果打下基礎。

簡介：點擊查看更多乙型肝炎病毒X基因多態(tài)性及X蛋白結合蛋白的初步研究.pdf精彩內容。

簡介：ALTERATIONOFCOGNITIVEFUNCTIONBRAINSTRUCTUREANDBRAINFUNCTIONBYGENETICVARIATIONINANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEINAMNESTIC．TYPEMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOUTHEASTUNIVERSITYFORTHEACADEMICDEGREEOFDOCTOROFMEDICINEBYZHANGZHENGSHENGSUPERVISEDBYBUOERVLSEO19YPROFESSORZHANGZHIJUNCLINICALMEDICALCOLLEGESOUTHEASTUNIVERSITYAUGUST2011中文摘要血管緊張素轉換酶的基因多態(tài)性對遺忘型輕度認知損害患者認知功能、腦結構和功能的影響東南大學臨床醫(yī)學院博士研究生張正生導師張志琚教授中文摘要背景阿爾茨海默病ALZHEIMER’SDISEASE，AD是一種最常見的癡呆癥，影響數(shù)以百萬計的老年人，給社會家庭帶來巨大的負擔。輕度認知損害MILDCOGNITIVEIMPAIRMENT，MCI是指介于正常老化和AD之間的～種過渡階段的認知障礙，MCI可分為遺忘型AMNESTICMCI，AMCI和非遺忘型，AMCI以記憶損害為主，其他認知功能保持相對完整，為最常見的類型，發(fā)展為AD的比例高，每年達10％一15％。近年來，諸多研究發(fā)現(xiàn)，血管因素參與AD發(fā)病機制，導致認知功能減退，是AD非常重要的危險因素。調節(jié)機體的血壓且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布的血管緊張素轉換酶ANGIOTENSINCONVERTINGENZYME，ACE在AD和MCI病因中占重要位置。ACE的主要酶解產(chǎn)物一血管緊張素IIANGIOTENSINII，ANGII是一種強烈的促血管收縮物質，具有中樞升壓效應，且能加速對有血管保護作用的緩激肽的滅活，使腦血管阻力增高，腦血流減少，使大腦處于長期慢性缺血、缺氧的低灌注狀態(tài)，參與AD的血管源性病因，故認為體內ACE的高水平可能是MCI的危險因素。除ACE本身的血管特性外，腦內的腎素血管緊張素系統(tǒng)對記憶功能具有直接影響。ANGII及其代謝產(chǎn)物血管緊張素Ⅳ，ANGLV能興奮海馬和杏仁核內的神經(jīng)元細胞從而增強記憶力。因此，ACE基因已成為AD和MCI的候選基因。ACE基因存在插入片段INSERTION，I和缺失片段DELETION，D多態(tài)性，因此構成2種等位基因I和D，以及3種基因型缺失純合子型DD、雜合子型DI、插入純合子型II。不同的基因型對ACE活力水平的影響程度不同，D等位基因攜帶者其ACE的水平明顯增高DD基因型與II基因型相比，ACE水平升高近50％。盡管ACE在AD生物學作用己被眾多研究證實，但其I／D基因多態(tài)性在AD中的作用仍有較大爭議。一些研究認為I等位基因為AD的致病基因，但也有研究結果顯示，

簡介：研究背景我國是乙型肝炎的高流行區(qū)，慢性乙型肝炎病毒簡稱HBV感染者約12億，大部分人群是通過母嬰傳播感染的，發(fā)展成乙型肝炎病毒攜帶者、慢性肝炎、肝硬化、肝癌成為新的傳染源。母嬰傳播在乙型肝炎流行中有十分重要的地位。預防新生兒HBV感染能明顯減少嚴重肝病的發(fā)生率，從而大大減輕社會和家庭的負擔。乙肝疫苗迄今為止預防乙肝最有效和最經(jīng)濟的方法，但對于乙肝病毒表面抗原簡稱HBSAG攜帶者母親的高危新生兒，圍產(chǎn)期接種單用乙肝疫苗嬰兒免疫失敗率20％。在許多國家及地區(qū)，針對HBSAG攜帶者母親所生新生兒的圍產(chǎn)期HBV傳播預防，乙肝免疫球蛋白被廣泛用于和乙肝疫苗一起進行聯(lián)合免疫以阻斷乙肝病毒攜帶者母親的新生兒圍產(chǎn)期傳播。目的、意義目前國內對乙肝免疫球蛋白應用仍缺乏指導性方案，各地報道應用乙肝免疫球蛋白效果尚存爭議。本文通過系統(tǒng)評價，比較國內不同免疫策略乙型肝炎母嬰傳播預防作用的效果，為制定更加合理、有效免疫策略提供一些線索。研究方法本研究利用META分析的方法。主要步驟1確定研究對象；2文獻檢索；3文獻篩選；4文獻信息的提取；5統(tǒng)計分析，效應值合并與計算，異質性Q檢驗，偏倚評估，敏感性分析等。本研究采用REV42軟件進行統(tǒng)計分析。研究結果共有29篇獨立研究符合本次納入標準和剔除標準。主要結果有①產(chǎn)前應用乙肝免疫球蛋白組與不應用組的胎兒在宮內感染乙肝病毒的相對危險比，合并RR和相應的95％CI為310233～414，P值小于000001，有統(tǒng)計學意義。亞組分析后得到合并RR值及其95％CI分別為母親HBSAG和HBEAG雙陽性者是336238～474，單HBSAG陽性者是311165～586，P值均小于000001，兩組結果均有統(tǒng)計學意義。②產(chǎn)后新生兒出生后單純接種乙肝疫苗組與乙肝疫苗聯(lián)合乙肝免疫球蛋白組的新生兒產(chǎn)時感染乙肝病毒相對危險比，合并RR值和相應的95％CI為198152～258，P值小于000001，有統(tǒng)計學意義。亞組分析后得到合并RR值及其95％CI分別為乙肝疫苗5ΜG劑量是241168～346，乙肝疫苗10ΜG劑量是178116～273，兩組P值均小于000001，結果均有統(tǒng)計學意義；母親HBSAG和HBEAG雙陽性者是266174～405，單HBSAG陽性者是229153～343，兩組P值均小于00001，結果均有統(tǒng)計學意義。③產(chǎn)后新生兒出生后單純接種乙肝疫苗5ΜG劑量組與10ΜG劑量組新生兒產(chǎn)時感染乙肝病毒相對危險比，合并RR值和相應的95％CI為，固定效應模型是437274～774，P值小于0001，結果有統(tǒng)計學意義；隨機效應模型是254O80～809，P值011，結果兩者差異無統(tǒng)計學意義。研究結論通過本次研究，獲得了主要結論有①孕婦乙肝病毒攜帶者孕28周，32周、36周注射劑量為200IU的乙肝免疫球蛋白可以降低胎兒在宮內的感染風險。②孕后期不應用乙肝免疫球蛋白導致宮內感染，母親乙肝病毒HBSAG和HBEAG雙陽性者比母親單乙肝病毒肪SAG陽性者危險更大。③乙肝病毒攜帶者孕婦的新生兒，采用乙肝疫苗聯(lián)用乙肝免疫球蛋白聯(lián)合免疫，能較好預防乙肝病毒的圍產(chǎn)期感染。④無經(jīng)濟條件者，采用全程接種10ΜG劑量的乙肝疫苗，也能較好預防新生兒圍產(chǎn)期的感染。

簡介：流感是人類重要的傳染病，全球每年約有20％的兒童和5％的成年人感染，給個人和社會帶來非常大的負擔。目前在人群中流行的主要有H1N1、H3N2亞型和乙型流感病毒，而H3N2亞型流感病毒自1968年引起世界流感大流行以來一直是人群中流行的一個主要亞型。接種流感疫苗是當前預防流感的主要措施，而目前的流感疫苗主要以流感病毒的膜蛋白血凝素HA，神經(jīng)氨酸酶NA作為研究對象，而HA和NA均易發(fā)生變異，從而使流感疫苗的應用效果受到一定限制。細胞毒性T淋巴細胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTE，CTL介導的特異性細胞免疫在機體抗病毒免疫中起著非常重要的作用，其中CTL表位通過結合感染細胞表面的主要組織相容性復合體MAJHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEX，MHC類分子，激發(fā)機體的細胞免疫水平，有助于病毒的清除與疾病的恢復，是構成防止病毒感染的第二道防線，是目前抗病毒免疫治療的重要研究目標。而流感的NP蛋白和M蛋白由于序列高度保守，因此其抗原肽能夠誘導產(chǎn)生針對同型A型或B型和異型病毒株的交叉免疫反應，是CTL反應的主要靶抗原，探索基于流感病毒NP和M蛋白的CTL表位對于開發(fā)新型疫苗有重要的意義。傳統(tǒng)的多肽表位篩選和鑒定方法淋巴細胞功能試驗費時費力，通過生物信息學技術預測編碼流感病毒的保守區(qū)段的00T細胞和B細胞表位，以及主要MHC分子結合肽，用質粒DNA作為載體或者直接合成表位抗原肽，在細胞因子或其他免疫佐劑的輔助下進行免疫，產(chǎn)生強的廣譜的細胞免疫和體液免疫，由此產(chǎn)生能對同型病毒的同型保護和對異型病毒的交叉保護作用，有望解決流感病毒的頻繁變異對于疫苗研制所造成的困難。【目的】1綜合運用多種生物信息學軟件，發(fā)現(xiàn)流感病毒H3N2內部保守蛋白NP蛋白和M蛋白的CTL表位，并提高CTL表位預測的準確率，建立一種新的表位篩選模式。2通過實驗驗證前期預測的候選表位，發(fā)現(xiàn)新的H3N2內部保守蛋白NP蛋白和M蛋白的CTL表位，為開發(fā)流感表位疫苗奠定基礎?！痉椒ā?通過T細胞表位預測、蛋白酶切位點預測、TAP預測、分子動力模擬對候選表位肽進行篩選，確定所要合成的流感病毒NP、M蛋白表位肽；2用芴甲氧羰基固相法合成前期預測的多肽，并進行親和力、穩(wěn)定性鑒定；3采用IFNΓELISPOT方法檢測表位肽的CTL增殖活性，用51CR釋放實驗分析細胞毒性分析各實驗肽的CTL殺傷效應?！窘Y果】1生物信息學的預測結果表明，NP258266、NP4856、NP189197、M5866、M311等5個表位與HLAA0201的結合情況比較理想，選擇進入下游實驗；2T2結合實驗顯示候選肽NP258266、NP4856、M5866的親和力較高，F(xiàn)1值分別是206、173、199，而NP189197、M311親和力較低，F(xiàn)1值分別是072、023。穩(wěn)定性結合實驗顯示表位肽NP258266、NP4856、M5866的半衰期分別為196H、214H、211H，均大于1H，表明穩(wěn)定性較好，選擇進入下游實驗3IFNΓELISPOT檢測結果表明，NP258266、NP4856、M5866每1105個誘導的PBMC產(chǎn)生IFNΓ點數(shù)分別為7463、6121、6653，說明我們所合成的幾個表位肽具有較好的免疫原性，51CR釋放實驗結果顯示NP258266、NP4856、M5866的特異性殺傷率分別為657％、604％、503％【結論】1采用T細胞表位預測、蛋白酶切位點預測、TAP預測、分子動力模擬構成的表位篩選模式對流感病毒H3N2亞型NP蛋白、M蛋白的HLAA0201限制性CTL表位進行預測從預測結果中選取NP258266、NP4856、NP189197、M5866、M311等四個表位進行合成。2T2結合實驗顯示候選肽NP258266、NP4856、M5866的F1值均大于15，親和力較高；穩(wěn)定性結合實驗顯示表位肽NP258266、NP4856、M5866的半衰期分別均大于1H，表明穩(wěn)定性較好。3酶聯(lián)免疫斑點法ELISPOT法檢測和51CR殺傷實驗檢測候選肽體外刺激HLAA0201陽性的健康人PBMC所產(chǎn)生的效應細胞分泌的細胞因子和殺傷活性的結果顯示NP258266、NP4856、M5866刺激PBMC可以產(chǎn)生較高的T細胞能特異性的殺傷靶細胞，并分泌較高水平的IFNΓ。4經(jīng)JENPEP表位數(shù)據(jù)庫查詢，本實驗所所發(fā)現(xiàn)的表位NP258266、NP4856、M5866為新的流感病毒表位。

簡介：目的EB病毒（EBV）是一種人類皰疹病毒，其感染非常普遍，是兒童較常見的傳染性單核細胞增多癥的病因，也與很多其它疾病相關，迄今尚無安全、有效的疫苗和治療藥物。人工合成富含非甲基化胞嘧啶（C）鳥嘌呤（G）二核苷酸基序的CPG寡脫氧核苷酸（CPGODN）作為TH1型免疫調節(jié)劑已用于抗多種病毒和細菌感染的研究，但尚未見抗EB病毒感染的報道，本研究初步探討了CPGODN在體外對該病毒的抑制作用及其可能機制。方法1、總結重癥傳染性單核細胞增多癥（IM）患兒臨床資料；分析重癥IM患兒EBVDNA拷貝數(shù)與血液系統(tǒng)、肝功能和心肌受損程度及其預后的關系。2、觀察CPGODN抑制EBV復制的量效關系分離健康人外周血單個核細胞（PBMC），設立空白對照組，EBV對照組，CPGODN預處理組，用25MGL，5MGL，10MGL，20MGL，的CPGODN預處理48H，感染EBV，24H后用熒光定量PCR（FQPCR）檢測EBV拷貝數(shù)；3、觀察CPGODN抑制EBV復制的時效關系設組同上，用10MGL的CPGODN分別預處理PBMC6H，12H，24H，48H，感染EBV，24H后用FQPCR檢測EBV拷貝數(shù)；4、觀察CPG誘導Γ干擾素（IFNΓ）產(chǎn)生的量效時效關系酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測上述實驗的培養(yǎng)上清液中Γ干擾素（IFNΓ）的水平；5、中和CPG誘導IFNΓ設組同2，用25MGL，5MGL，10MGL，20MGL的CPGODN預處理48H后，加入抗IFNΓ單抗（5MGL），再感染EBV，24H后用FQPCR檢測EBV拷貝數(shù)；6、TLR9和CD21MRNA表達水平的檢測設立空白對照組，EBV對照組，CPGODN對照組，CPGODN預處理組，采用逆轉錄多聚酶鏈反應（RTPCR）法檢測各組PBMC中TLR9和CD21MRNA的表達水平。結果1、本組重癥傳染性單核細胞增多癥患兒共22例，男12例，女10例；男女比例為121，本組患兒均有多臟器受累，隨著EBVDNA拷貝數(shù)的升高，重癥傳染性單核細胞增多癥患兒的紅細胞、血紅蛋白、血小板均呈現(xiàn)下降的趨勢（P〈005）；患兒肝功能ALT、AST、LDH呈現(xiàn)上升的趨勢（P〈005）；患兒心肌酶譜HBDH、AST、LDH呈現(xiàn)上升的趨勢（P〈005）；2、不同濃度CPGODN預處理組的EBV拷貝數(shù)均低于未處理組（P005）7、CPGODN預處理組TLR9MRNA水平明顯高于未處理組（P005）。結論1、IM主要是由EBV感染引起的急性或亞急性免疫異常性疾病，是兒童常見的病毒性傳染病。重癥IM病情的輕重、多器官受損程度和預后與EBV拷貝數(shù)有關。重癥IM除了一般IM所具有的癥狀、體征、實驗室檢查特點外，還可累及多臟器，產(chǎn)生各種并發(fā)癥，因此恢復緩慢，可達數(shù)月之久，病程遷延甚至死亡；2、CPGODN在體外對EBV的復制具有抑制作用，且這種抑制作用是有劑量依賴性的，在CPGODN的濃度為10MGL時抑制效果最好，提示CPGODN只有在適當劑量才能發(fā)揮抑制病原體的作用；3、CPGODN預處理48H抗EBV效果最好，隨著CPGODN預處理時間的延長，EBV拷貝數(shù)呈逐漸降低的趨勢，表明CPGODN抗EBV的作用有時間依賴性；4、CPGODN可上調PBMC中TLR9的表達，但對PBMC上EBV的受體CD21的表達無明顯作用，提示CPGODN對EBV的抑制是通過活化TLR9繼而誘導細胞因子的產(chǎn)生而間接起作用的，而不是通過直接阻斷EBV在PBMC上的受體CD21起作用的。5、CPGODN誘導細胞因子IFNΓ同樣具有劑量依賴性和時間依賴性，其中10MGLCPGODN組和CPGODN預處理48H組LFNΓ量最高，并且使用抗IFNΓ單抗中和CPGODN預處理誘導的IFNΓ后，對EBV的抑制作用明顯下降，提示CPGODN對EBV的抑制很大程度上是通過誘導IFNΓ間接起作用的。

簡介：上海交通大學碩士學位論文輕度認知障礙海馬容積和神經(jīng)生化改變研究姓名許志祥申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師趙永波20090301上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文3上海交通大學上海交通大學學位論文版權使用授權書學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權上海交通大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密保密□，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于不保密不保密□。（請在以上方框內打“√”）學位論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日

簡介：固有免疫是機體抗病毒的第一道防線在機體被病毒感染后通過模式識別相關受體PATTERNRECOGNITIONRECEPTSPRRS識別病毒的不同成分從而啟動固有免疫系統(tǒng)在感染發(fā)生的幾分鐘內受體識別這些病原體后激活固有免疫系統(tǒng)產(chǎn)生前炎癥因子抗菌肽和Ⅰ型干擾素。Ⅰ型干擾素會以自分泌和旁分泌的形式與受體結合并激活信號轉導通路。信號通路激活后干擾素誘導基因ISG的表達上調。干擾素誘導基因ISG是固有免疫抗病毒和抗腫瘤作用的主要效應分子。干擾素是固有抗病毒的免疫的核心效應分子。重組Α干擾素已經(jīng)被應用到臨床的抗病毒治療。乙型肝炎病毒HBV是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒它的復制需經(jīng)過一個逆轉錄的過程并可整合到宿主細胞基因組中引起非細胞病變性感染。在全球范圍內有4億感染者對人類健康造成極大的危害Α干擾素INTERFERONALPHAIFNΑ是目前少數(shù)臨床治療乙型肝炎有效的藥物之一但對其抗病毒機制尚未完全明了。為闡明這一作用機制復旦大學熊偉等應用人CDNA微點陣芯片檢測了人肝腫瘤細胞HEPG2細胞和來源于HEPG2細胞并整合有HBV基因組的HEPG2215細胞經(jīng)IFNΑ處理6小時前后基因表達譜的差異。結果發(fā)現(xiàn)與HEPG2細胞相比在HBV持續(xù)復制的HEPG2215細胞中IFNΑ誘導的髓樣細胞分化蛋白MYD88的基因表達顯著降低提示HBV復制可能抑制MYD88基因的表達。進一步應用核苷類似藥物拉米夫定LAMIVUDINE和阿德福韋酯ADEFOVIR抑制HEPG2215細胞中HBV復制再用IFNΑ處理細胞發(fā)現(xiàn)HEPG2215細胞中MYD88基因的表達顯著增加由此確認HBV可抑制IFNΑ誘導的MYD88基因的表達這也提示MYD88蛋白可能在IFNΑ誘導的抗HBV效應中發(fā)揮重要的作用。目前已知MYD88蛋白是TOLL樣受體除了TLR3之外其他TLRS均由MYD88蛋白介導信號傳遞、白介素1受體、白介素18受體介導的信號通路中的關鍵分子由它參與構成的信號級聯(lián)最終引起核因子KAPPABNUCLEARFACTKAPPABNFKB依賴性信號通路的活化。目的熊偉等的研究也表明在HEPG2和HUH7中過表達MYD88蛋白可降低HBV的復制水平。并表明過表達MYDS8蛋白可以激活NFKB并且MYD88蛋白對HBV的抑制作用依賴于NFKB的激活。但是MYD88如何激活NFKB以及NFKB激活之后通過什么方式來抑制HBV的復制和蛋白表達至今還不明了。本課題從MYD88蛋白下游的細胞因子的產(chǎn)生方面來探討MYD88蛋白抑制HBV復制的分子機制。方法因為這一現(xiàn)象首先在HEPG2215細胞內發(fā)現(xiàn)所以在我首先在HEPG2215細胞中確定MYD88的作用為了解決HEPG2215細胞轉染效率低的問題我們以連接了MYD88全場序列腺病毒為載體感染HEPG2215細胞以無關的綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTIENGFP作為對照并用免疫熒光的方法保證了感染的效率48小時后收細胞用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA分別檢測上清中的HBSAG和HBEAG的含量再抽提RNA逆轉錄以實時熒光定量PCRREALTIMEPCR檢測HBVRNA水平并用NTHERNBLOTTING確認結果抽提乙肝病毒核心顆粒的DNAHBVCEPARTICLEDNA用REALTIMEPCR檢測DNA水平并用SOUTHERNBLOTTING確認。結果發(fā)現(xiàn)與GFP相比感染了帶有MYD88序列腺病毒的HEPG2215細胞的上清中的HBSAG和HBEAG的含量以及細胞內RNA的含量以及CEPARTICLEDNA的含量全面下降。結果MYD88的過表達可以激活NFKB依賴的信號通路而NFKB的活化又可以啟動一序列細胞因子包括白介素和干擾素的轉錄由此我們觀察了常見的受NFKB活性調控的細胞因子是否受到MYD88的調節(jié)。由此我們轉染了MYD88之后觀察一些細胞因子的MRNA水平以及上清中分泌的細胞因子的量結果發(fā)現(xiàn)和其他細胞因子相比IL8的表達水平很高由此我們推測MYD88抑制HBV的復制可能與其誘導IL8的分泌相關。為確認這一結論我們進一步測試這些分泌到上清中的細胞因子是否在發(fā)揮抗病毒作用我們做了上清轉換試驗即將轉染了空載和MYD88的細胞培養(yǎng)2448H后上清轉移到轉染了HBV的細胞上再培養(yǎng)一段時間然后再檢測HBV的復制指標結果表明和轉染了MYD88的細胞上清孵育并不能抑制細胞內HBV的復制。結論MYD88上調的細胞因子并不能抑制HBV的復制但這些細胞因子的具體作用還有待研究。