免疫學(xué)及分子生物學(xué)在慢性肺曲霉病的診斷價(jià)值.pdf

1、第一部分免疫學(xué)檢測(cè)曲霉抗原及抗體在慢性肺曲霉病的診斷價(jià)值
　　目的：
　　評(píng)價(jià)免疫學(xué)檢測(cè)曲霉抗原及抗體在診斷慢性肺曲霉病人群中的診斷價(jià)值。
　　方法：
　　收集2016年1月至2017年1月在廣州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和廣州市胸科醫(yī)院呼吸科住院符合慢性肺曲霉?。–PA）診斷標(biāo)準(zhǔn)患者的臨床資料，同時(shí)收集患者血清、肺泡灌洗液（BALF），排除嚴(yán)重的免疫抑制的患者（例如艾滋病，中性粒細(xì)胞減少或器官移植術(shù)后），分別測(cè)定血清

2、（1,3）-β-D葡聚糖（BDG），半乳甘露聚糖（GM），煙曲霉特異性IgG抗體，煙曲霉特異性IgM抗體，BALF-GM的水平，比較各種免疫學(xué)方法與診斷的一致性。比較各種免疫學(xué)診斷方法在CPA患者的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。根據(jù) ROC曲線確定各免疫學(xué)診斷方法的最佳臨界值。評(píng)價(jià)免疫學(xué)檢測(cè)是否對(duì)患者治療效果的評(píng)估是否有價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　1、共納入CPA組79例，對(duì)照組74例。CPA組分類：簡(jiǎn)單型曲霉球（SA

3、）10例（12.66％），曲霉結(jié)節(jié)（NA）2例（2.53%），亞急性侵襲性曲霉病/慢性壞死性肺曲霉病35例（SAIA/CNPA）（44.30%），慢性空洞型肺曲霉（CCPA）28例（35.44%），慢性纖維化肺曲霉（CFPA）4例（5.06%）。CPA組63例確診、16例臨床診斷。CPA病例組平均年齡51.34±14.80歲，其中男性57例（72.15%），女性22例（27.85%）。對(duì)照組平均年齡55.23±14.57歲，男性48例（

4、64.68%），女性26例（35.14%），CPA組最常見(jiàn)的基礎(chǔ)疾病是支氣管擴(kuò)張（67.09%）和肺結(jié)核（65.82%）?？┭畛Ｒ?jiàn)的癥狀（44例，55.70%），影像學(xué)表現(xiàn)以空洞（69.62%）、曲霉球（39.24%）為主（P＜0.05）。
　　2、CPA組和對(duì)照組之間血清BDG，血清GM，煙曲霉特異性IgM，煙曲霉特異性IgG和BALF-GM均有顯著差異（P＜0.05）。血清G試驗(yàn)、血清GM、血清煙曲霉IgM抗體、血清煙曲霉I

5、gG抗體、BALF-GM的靈敏度、特異度分別為49.36%、44.30%、17.72%、32.91%、45.57%和91.89%、98.64%、94.59%、90.54%、89.74%。單項(xiàng)診斷時(shí)，BALF-GM對(duì)CPA診斷價(jià)值較好，Youden指數(shù)為0.59（截點(diǎn)≥0.85μg/L），AUC=0.94（95%CI0.89-0.99），最佳臨界值為0.44μg/L(Sen0.98， Spe0.82)。
　　3、血清BDG、GM在C

6、PA組的各分型的靈敏度與總病例組相似。煙曲霉特異性IgM抗體在CPA各分型的靈敏度均低。BALF-GM（截點(diǎn)≥0.65μg/L）在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA中的靈敏度為90.00%、71.43%、42.86%、75.00%。煙曲霉特異性IgG抗體（截點(diǎn)≥80AU/ml）在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA的靈敏度分別為60.00%、57.14%、42.86%、50.00%。
　　4、聯(lián)合檢測(cè)：血清 BD

7、G、GM、煙曲霉特異性 IgG抗體并聯(lián)的靈敏度、特異度為76.19%、85.14%，血清BDG、GM、煙曲霉特異性IgG抗體、煙曲霉特異性 IgM抗體并聯(lián)的靈敏度和特異度分別為84.13%、78.38%。血清GM并聯(lián)BALF-GM在CPA中的靈敏度、特異度為76.19%、93.24%。
　　5、在抗曲霉治療過(guò)程中，治療有效的患者煙曲霉 IgG抗體水平下降，而該抗體上升可能提示預(yù)后不良。
　　結(jié)論：
　　1、免疫學(xué)檢測(cè)在

8、CPA患者有一定診斷價(jià)值。BALF-GM有較好的診斷價(jià)值，血清BDG、GM在CPA患者的靈敏度偏低，可能需要在該人群中下調(diào)診斷截點(diǎn)。
　　2、免疫學(xué)檢測(cè)在不同CPA分類可能有不同診斷價(jià)值?？乖?、抗體聯(lián)合檢測(cè)可減少CPA漏診，血清學(xué)最佳組合為血清BDG/GM/煙曲霉特異性IgG抗體聯(lián)合檢測(cè)。BALF-GM聯(lián)合血清GM可提高診斷靈敏度。
　　3、煙曲霉特異性IgM抗體在CPA診斷價(jià)值不高，煙曲霉特異性IgG抗體在不同分類CPA中

9、診斷價(jià)值不相同，下調(diào)截點(diǎn)可調(diào)高靈敏度。煙曲霉特異性IgG抗體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有助于CPA患者的預(yù)后評(píng)估。
　　第二部分熒光定量PCR檢測(cè)肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的診斷價(jià)值
　　目的:
　　評(píng)價(jià)熒光定量PCR檢測(cè)肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的診斷價(jià)值。
　　方法:
　　患者入選標(biāo)準(zhǔn)同第一部分，收集患者的肺泡灌洗液（BALF），離心后取沉渣用于DNA提取。使用玻璃珠震蕩+試劑盒提取BALF的DNA，

10、使用熒光定量PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)肺泡灌洗液沉渣提取的DNA進(jìn)行檢測(cè)（BALF-QPCR）。
　　結(jié)果:
　　本實(shí)驗(yàn)收集140份肺泡灌洗液，按單次樣本計(jì)算共128例，CPA組79例，對(duì)照組49例。其中CPA組63例確診，16例臨床診斷。BALF-QPCR在CPA組的靈敏度85.15%，特異度89.80%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值96.63%，陰性預(yù)測(cè)值70.59%， Youden指數(shù)0.79，AUC=0.87（95%CI0.80-