14-3-3ζ和LKB1蛋白的結合對口腔鱗癌細胞凋亡的作用研究.pdf

1、目的：
　　口腔鱗癌(OSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一，然而口腔鱗癌的5年生存率僅30%-45%。本文將研究凋亡相關蛋白14-3-3δ和LKB1在口腔鱗癌細胞中的表達，以及14-3-3δ和LKB1在口腔鱗癌細胞凋亡或增殖調控中的相互關系，同時運用晶體學原理解析14-3-3δ和LKB1結合的分子基礎，并通過結構設計突變、打破兩者的結合，進一步驗證14-3-3δ和LKB1的結合對口腔鱗癌細胞增殖或凋亡調控的影響。通過本研究，

2、擬為生物學靶向治療口腔鱗癌的靶點設計研究打下一定的結構基礎，以期為口腔鱗癌提供一種新的治療策略。
　　方法：
　　1.應用Real-time PCR技術與蛋白免疫印跡法分別在mRNA與蛋白水平檢測14-3-3δ在口腔原代上皮細胞和口腔鱗癌細胞系CAL27的表達差異。通過流式細胞技術觀察14-3-3δ基因表達沉默或過表達對口腔鱗癌細胞增殖或凋亡的影響。
　　2.免疫共沉淀實驗驗證14-3-3δ和LKB1在口腔鱗癌細胞內的

3、結合。同時應用蛋白質純化技術得到14-3-3δ和LKB1的蛋白質復合物，然后通過晶體學方法解析得到14-3-3δ和LKB1的蛋白質復合物的結構。
　　3.通過復合物的結構，設計LKB1突變質粒，并將突變質粒轉染至口腔鱗癌細胞系CAL27，通過免疫共沉淀實驗驗證兩者在細胞內的分離，并應用流式細胞技術進一步觀察LKB1突變后對腫瘤細胞增殖或凋亡的影響。
　　結果：
　　1.口腔鱗癌細胞CAL27在mRNA與蛋白水平14-3

4、-3δ的表達量都要高于口腔原代上皮細胞。14-3-3δ過表達質粒轉入口腔鱗癌細胞系CAL27后，口腔鱗癌細胞發(fā)生了明顯的增殖。14-3-3δ基因表達沉默后，口腔鱗癌細胞發(fā)生了明顯的凋亡。
　　2.免疫共沉淀實驗顯示在口腔鱗癌CAL27細胞系內14-3-3δ和LKB1發(fā)生了明顯的結合，而在原代口腔上皮細胞內14-3-3δ和LKB1的結合不明顯。計算機晶體結構軟件分析14-3-3δ和LKB1晶體衍射結果顯示：14-3-3δ和LKB1可