TGFβ1和TLR4在T24細胞中的表達及相互作用.pdf

1、背景：
　　膀胱癌是世界范圍內(nèi)男性中第7位常見惡性腫瘤，女性第17位常見惡性腫瘤。作為最常見的膀胱癌亞型，膀胱移行細胞癌約占所有膀胱癌的90％，浸潤和轉(zhuǎn)移是導致患者死亡的主要原因。腫瘤的轉(zhuǎn)移過程包括：侵襲相鄰組織，滲透進入淋巴/血管系統(tǒng)，脫離原發(fā)灶，蔓延至附近或遠處特定部位之后，經(jīng)過侵襲、增殖、血管重塑等過程形成新的轉(zhuǎn)移性病灶。雖然目前膀胱癌的診斷和治療研究取得了很大進步，但是其復發(fā)、浸潤、轉(zhuǎn)移的機制尚不明確。大量研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生

2、長因子β1（Transforminggrowthfactorbeta1，TGFβ1）和Toll樣受體4（Toll-likereceptor4，TLR4）信號通路與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)，且有文獻報道，在一些腫瘤細胞表面存在TLR4的表達，并且其激活可以上調(diào)TGFβ1細胞因子的表達，猜想TGFβ1和TLR4在腫瘤中可能存在關(guān)聯(lián)，而目前有關(guān)兩者間相互作用的報道甚少，本研究旨在探索與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的TGFβ1與TLR4信號通路，

3、在膀胱移行細胞癌T24細胞中的表達及兩者之間的相互作用。
　　目的：
　　研究TGFβ1和TLR4信號通路在膀胱移行細胞癌T24細胞中的表達及相互作用，從而為膀胱移行細胞癌發(fā)生發(fā)展機制的研究提供新思路。
　　方法：
　　1.采用RT-PCR方法檢測T24細胞分別在LPS（脂多糖）、rhTGFβ1（重組人源轉(zhuǎn)化生長因子β1）刺激前后TLR4在mRNA水平的表達量變化。
　　2.采用流式細胞術(shù)檢測T24細胞分別

4、在LPS、rhTGFβ1刺激前后TLR4在蛋白水平的表達量變化。
　　3.采用RT-PCR方法檢測T24細胞在LPS刺激前后TGFβ1在mRNA水平的表達量變化。
　　4.采用ELISA方法檢測T24細胞在LPS刺激前后TGFβ1在蛋白水平的表達量變化。
　　結(jié)果：
　　1.在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均檢測到TLR4和細胞因子TGFβ1在T24細胞的表達。
　　2.三種不同濃度LPS（1μg/ml、5μg/

5、ml、10μg/ml）刺激T24細胞12h后，TLR4mRNA相對表達量隨著LPS濃度的升高而升高，組間相對表達量差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.26，P=0.007）；與對照組相比，當LPS濃度為1μg/ml時即出現(xiàn)升高趨勢，在10μg/ml時作用效果達到最強（P<0.001）。選用10μg/mlLPS刺激T24細胞不同時間之后，TLR4mRNA相對表達量出現(xiàn)差異（χ2=13.78，P=0.02），并且在12h時達到最高（P<0.001

6、）。在蛋白質(zhì)水平，流式細胞術(shù)檢測到LPS刺激后T24細胞膜表面TLR4蛋白表達升高，且具有統(tǒng)計學意義（t=﹣3.93，P=0.02）。
　　3.三種不同濃度LPS（1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）刺激T24細胞12h后，TGFβ1mRNA相對表達量隨著LPS濃度的升高而升高，組間相對表達量差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.28，P=0.03）；與對照組相比，當LPS濃度為5μg/ml時，其升高開始具有統(tǒng)計學意義（P=0.04

7、），在10μg/ml時作用效果最為明顯（P=0.003）。選用10μg/mlLPS刺激T24細胞不同時間之后，TGFβ1mRNA相對表達量出現(xiàn)差異（χ2=15.12，P=0.01），并且在12h時達到最高（P<0.001）。在蛋白質(zhì)水平，ELISA方法同樣檢測到LPS刺激后細胞因子TGFβ1蛋白表達升高，且具有統(tǒng)計學意義（t=﹣2.47，P=0.03）。
　　4．三種不同濃度rhTGFβ1（1ng/ml、5ng/ml、10ng/m

8、l）作用于T24細胞12h后，TLR4在mRNA水平有升高趨勢，并且在5ng/ml時達到最高，但并不具有統(tǒng)計學意義（χ2=3.88，P=0.28）。之后選用5ng/mlrhTGFβ1刺激T24細胞不同時間之后，同樣mRNA相對表達量變化并沒有因為時間的變化而出現(xiàn)差異（χ2=9.69，P=0.08）。但在蛋白質(zhì)水平，用5ng/mlrhTGFβ1刺激T24細胞24h后，流式細胞術(shù)檢測到細胞膜表面TLR4蛋白表達明顯升高，并具有統(tǒng)計學意義（t