兔MT1，MT2和MT3基因CDS區(qū)克隆及MT2基因原核表達(dá).pdf

1、本試驗(yàn)以健康無(wú)病的10只比利時(shí)兔為材料，分別從兔肌肉、大腦和肝組織中提取總RNA。根據(jù)GenBank中已發(fā)表的人、小鼠、牛、大鼠的MT1，MT2和MT3基因的CDS區(qū)序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR和克隆技術(shù)分別克隆出兔MT1，MT2和MT3基因的CDS全序列。MT1，MT2和MT3基因CDS區(qū)序列分別全長(zhǎng)186bp、186bp和201bp，編碼61、61和66個(gè)氨基酸。MT1，MT2和MT3基因之間的核苷酸同源性為82.42％，氨基酸同

2、源性為78.28％。其中MT1和MT2基因核苷酸同源性為89.59％，氨基酸同源性為81.97％；MT2與MT3基因核苷酸同源性為76.27％，氨基酸同源性為63.64％；MT1與MT3基因核苷酸同源性為75％，氨基酸同源性為66.67％。通過(guò)核苷酸序列分析結(jié)果顯示兔MT1基因與狗、人、大鼠和小鼠的同源性較高；兔MT2基因與人、大鼠、小鼠和猩猩的同源性較高；兔MT3基因與牛、狗、人、大鼠、野豬、小鼠和綿羊的同源性較高。對(duì)包括兔在內(nèi)的不同

3、哺乳動(dòng)物MT1，MT2和MT3氨基酸序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。
　　 對(duì)兔MT1，MT2和MT3基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，預(yù)測(cè)出其編碼蛋白分子量分別約為6.8kDa、7.2kDa和14.25kDa、等電點(diǎn)分別為5.12、5.34和5.32。兔MT1存在5個(gè)疏水區(qū)、3個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)、存在10個(gè)可能二硫鍵以維持其立體結(jié)構(gòu)。兔MT2存在5個(gè)疏水區(qū)、2個(gè)潛在磷酸化位點(diǎn)、存在10個(gè)可能二硫鍵以維持其立體結(jié)構(gòu)。兔MT3存在1個(gè)潛在的N糖基化

4、位點(diǎn)199處、1個(gè)主要的疏水區(qū)、2個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)、存在可能的10個(gè)二硫鍵以維持其立體結(jié)構(gòu)；通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)兔MT1的二級(jí)結(jié)構(gòu)由59個(gè)氨基酸殘基組成的無(wú)規(guī)則卷曲形成，占96.72％；MT2的二級(jí)結(jié)構(gòu)有58個(gè)氨基酸殘基形成無(wú)規(guī)則卷曲和3個(gè)氨基酸殘基形成延伸鏈，分別占95.08％和4.92％；MT3的二級(jí)結(jié)構(gòu)是以1個(gè)a-螺旋為基礎(chǔ)的，a螺旋由6個(gè)氨基酸殘基形成，占9.09％；螺旋之間為無(wú)規(guī)則卷曲，由54個(gè)氨基酸殘基形成，占81.82