福建紅曲的活性物質(zhì)及其醫(yī)療保健效應(yīng).pdf

1、世界上，中國最早發(fā)明紅曲(Chineseredyeastrice)而自古至今全國各地、日本沖繩等地的紅曲制備方法均源于福建省的古田縣和屏南縣，近年來，隨著日本東京遠(yuǎn)藤章教授從紅曲霉(Monascusruber)中分離出一種命為莫奈可林K(monacolink)的活性物質(zhì)后，眾多學(xué)者對紅曲的功能、安全性、抑菌性以及作用機(jī)理，分子結(jié)構(gòu)等進(jìn)行了廣泛而深入的研究，本文采用現(xiàn)代分析技術(shù)高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對福建紅曲所含主要特征有效

2、成分monacolink結(jié)構(gòu)確認(rèn)和含量分析并與其他紅曲對照比較，取得如下結(jié)果： 1.從福建紅曲中分離得到一化合物V，經(jīng)鑒定為洛伐他汀(lovastatin，monacolink)化合物V為無色針狀結(jié)晶，mp158℃-168℃(丙酮-水重結(jié)晶)，易溶于極性大的有機(jī)溶媒(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿)和堿水，不溶于石油醚及中性、酸性水中，Ms給出分子離子峰404(M)結(jié)合其CNMR和HNMR數(shù)據(jù)，推測該化合物的分子式為C24H36O5

3、。IR(KBr)cm-1：2970(C-H)、3540(C-OH)、1720(C=0)、1660(C=C)，1220(O-C-O)，說明有羥基、雙鍵和酯羰基基團(tuán)。CNMR中烯碳信號128.31，131.57，133.04和129.63ppm及HNMR中烯氫信號5.53(1H，brs.)，5.98(1H，d，J=9.6Hz)，5.79(1H，dd，J=9.6，5.7Hz)。結(jié)合UV在230，238.6，246nm處存在最大吸收，說明分子中

4、存在共軛雙烯。1H及13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的洛伐他汀的數(shù)據(jù)一致，故鑒定為洛伐他汀，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。 2.利用高效液相色譜儀(HPLC)配制二極管矩陣檢測器(PDA)選用德國默克高效液相色譜柱MerckLiChroCARTRP-18(250mm×4.6mmi.d.5μm)以75％甲醇為流動(dòng)相，PDA在210～350nm獲取光譜掃描和純度分析信息，WatersEmpower色譜工作站采集數(shù)據(jù)并分析，以保留時(shí)間Rt值定性，峰面積

5、Area定量。注入不同濃度monacolink色譜對照品(美國Sigma)溶液，制取標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，根據(jù)濃度-峰面積呈函數(shù)關(guān)系，計(jì)算樣品溶液monacolink的含量，研究結(jié)果揭示，來自福建屏南紅曲所含monacolink量高于我國其他地方出產(chǎn)的紅曲。 3.運(yùn)用高靈敏度液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)在分子水平上直接測定紅曲中monacolink分子量。樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液分別注入LC-MS儀(Thermo-Finnigan

6、LCQDecaXPMAX)在電噴霧(ESI)條件下，以正電離模式：positiveionizationmode毛細(xì)管溫度temperatureofthecapillary，350℃；噴電壓sprayvoltage，4.5ky；capillaryvoltage，22V；殼氣流速sheathgas(N2)flow，30A.U調(diào)儀器參數(shù)最佳，在最大單位分辨率測定標(biāo)準(zhǔn)對照物質(zhì)monacolink分子量為404，質(zhì)譜圖顯示為404+Na=427，

7、Na=23，福建紅曲中monacolink分子量同樣為404+Na=427。試驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)福建紅曲中特征活性物質(zhì)monacolink的存在，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。 4.monacolink是一種由紅曲菌屬M(fèi)onascus代謝過程中產(chǎn)生的新的抗膽固醇劑，其組成和結(jié)構(gòu)已由UV，IR，Ms和NMR所表征，從Monascus的培養(yǎng)基中可以分離出降膽固醇劑，光譜數(shù)據(jù)及其生物活性表明，這種降膽固醇劑曾被確定為lovastatin的物質(zhì)就是monac

8、olink，其降膽固醇的作用是能夠抑制膽固醇的合成，膽固醇合成過程中的限速酶是3-羥基-3-甲基戊二酰CoA(HMG-Co)還原酶，其活性酶量直接影響到膽固醇的合成量。 5.monacolink即lovastatin的作用是作為HMG-CoA還原酶活性抑制劑，通過對具有高脂血的5位男性病人用lovastatin進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn)，探討lovastatin對于降低新膽固醇的合成速度，以及極低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)

9、及低密度脂蛋白(LDL)中的脫輔基脂蛋白(apo)B的合成的影響。讓5位病人每天服用lovastatin2次，且持續(xù)6周，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，給病人口服重氫氧化劑，根據(jù)結(jié)合到膽固醇的重氫的量來估計(jì)降低新膽固醇的合成量，進(jìn)而表示其分級合成速率(C-FSR)及生成速率(C-PR)。同時(shí)，在口服lovastatin的狀態(tài)下，使用預(yù)氘化的亮氨酸來測定VLDL，IDL及LDL中的apoB的分級分解速率(FCR)及生成速率(PR)的動(dòng)力學(xué)研究表明，藥物處

10、理導(dǎo)致膽固醇總量大幅度減少(29％)，VLDL膽固醇降低40％，LDL膽固醇降低27％，apoB降低16％；HDL膽固醇各項(xiàng)升高13％，apoA-I升高11％。6.血脂測定結(jié)果：鵪鶉給高脂飼料15d后，其血清TC、TG、LDL-C水平非常顯著升高(P＜0.01)，形成高脂血癥，預(yù)防性給藥15d后，紅曲低、中、高劑量組均有顯著降低TC、TG的作用，(P＜0.05或P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)還證明：紅曲中.monacolink含量高的劑量組對高脂

11、血癥鵪鶉TC、TG、LDL-C的降低作用均大于monacolink含量低的劑量組，提示具有更強(qiáng)的藥理效應(yīng)。 7.經(jīng)文獻(xiàn)檢索和聯(lián)網(wǎng)查詢比較證實(shí)，主要?jiǎng)?chuàng)新有三點(diǎn)：①本研究所獲得的monacolink高效液相色譜指紋圖譜(HPLC)和二極管陣列光譜掃描圖(PDA)在閩產(chǎn)紅曲研究中首次發(fā)現(xiàn)。 ②應(yīng)用現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù)，首次在分子水平上剖析閩產(chǎn)紅曲中monacolink，并獲得質(zhì)譜圖(MS)和精確分子量。③在國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)：閩產(chǎn)紅曲中含