水通道蛋白1與母胎液體平衡相關(guān)性研究.pdf

1、母胎液體交換及羊水循環(huán)對(duì)于正常妊娠胎兒的活動(dòng)、生長(zhǎng)和發(fā)育至關(guān)重要；母胎液體平衡紊亂及羊水循環(huán)紊亂與不良的圍生結(jié)局密切相關(guān)，然而其發(fā)病的分子機(jī)制尚不清楚，目前也沒有有效的預(yù)防及治療措施。因此，探索母胎液體交換及羊水平衡紊亂的機(jī)理、尋找治療母胎液體平衡紊亂的作用靶點(diǎn)及藥物治療靶點(diǎn)將有助于降低圍產(chǎn)兒發(fā)病率及死亡率，減少新生兒的出生缺陷，提高圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)質(zhì)量。 水通道蛋白一族廣泛存在于上皮和內(nèi)皮細(xì)胞膜上的小分子（28-30KD）糖蛋白，因其

2、介導(dǎo)自由水快速被動(dòng)的跨生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)故名“水通道”。目前在哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上已發(fā)現(xiàn)了13種水通道蛋白（AQP0-12）。近20年的研究結(jié)果顯示：AQP1廣泛分布泌尿、呼吸、消化、神經(jīng)、生殖等系統(tǒng)，參與機(jī)體的與水代謝相關(guān)的多個(gè)臟器的生理和病理過程。本課題組的前期工作系統(tǒng)描述了AQP1在人胎盤與胎膜組織中的表達(dá)與分布，首次研究臨床羊水量異常病例胎盤與胎膜組織中AQPs表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)羊水過少臨床病例胎盤組織和胎膜組織AQP1 mRNA表達(dá)顯著低于

3、正常晚期妊娠胎盤組織和胎膜，這些結(jié)果提示AQP1在母-胎液體交換過程中可能發(fā)揮重要作用?；蚯贸夹g(shù)的發(fā)展為研究基因的功能和表達(dá)調(diào)控及人類多種疾病的分子機(jī)制開辟了新途徑。AQP1基因敲除鼠的建立為AQP1在多個(gè)臟器及組織（腎臟、肺、腦、眼等）的水轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮作用提供了直接證據(jù)，但是AQP1基因敲除鼠妊娠相關(guān)表型的變化罕見報(bào)道。 本研究擬應(yīng)用AQP1基因敲除小鼠模型對(duì)其妊娠期羊水量、胎兒情況及胎盤情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)物理及分子檢測(cè)，探尋AQ

4、P1缺失后母胎液體平衡的變化，以提供AQPs在母-胎液體交換發(fā)揮作用的直接證據(jù)，尋找可能應(yīng)用于臨床的藥物靶點(diǎn)和治療靶點(diǎn)。 第1章 AQP1在小鼠胎盤、胎膜組織的表達(dá) [研究目的]研究水通道蛋白1（AQP1）在小鼠胎盤、胎膜組織的分布及表達(dá)，初步探討AQP1在母胎液體平衡及羊水循環(huán)中的作用。 [材料與方法]取四只孕13天成年健康CD-1純系野生型小鼠胎盤、胎膜組織（每只孕鼠分別選取一例），應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（

5、RT-PCR）技術(shù)及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)AQP1胎盤及胎膜組織中的表達(dá)，確定AQP1表達(dá)部位及范圍。 [結(jié)果] 1.RT-PCR技術(shù)證實(shí)AQP1在CD-1野生型孕鼠胎盤、胎膜組織表達(dá)； 2.免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)AQP1表達(dá)于小鼠羊膜上皮細(xì)胞、胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞； [結(jié)論] CD-1純系野生型孕鼠胎盤、胎膜組織均有AQP1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，提示AQP1可能在母胎液體平衡中發(fā)揮作用

6、。 第二章小鼠AQP1缺失后妊娠相關(guān)表型的變化 [研究目的]研究AQP1基因缺失后胎兒及附屬物的變化，從而尋找AQP1在母胎液體平衡中發(fā)揮作用的直接證據(jù)。 [材料與方法]將純合子AQP1基因敲除小鼠（AQP1-KO mice）按雌雄2：1的比例合籠交配，第二日檢出陰道栓者記為妊娠第1天（1dpc）。根據(jù)孕齡將AQP1基因敲除孕鼠分組；相同條件下對(duì)CD-1純系野生小鼠合籠交配及分組。 1.將兩組按孕齡（孕7

7、天、13天、16天、18天和足月分娩）分為五個(gè)小組，動(dòng)態(tài)記錄孕鼠胚胎數(shù)、肉眼可見的萎縮胚胎數(shù)及新生鼠仔數(shù)； 2.按孕齡（孕13天、16天、18天）記錄胎鼠重量，胎盤濕重，胎盤面積及羊水量；另取孕16天的羊水樣本測(cè)量離子成分及滲透壓； 3.取兩組孕13天的胎盤組織，采用HE染色觀察AQP1缺失后小鼠胎盤組織的變化； 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：?jiǎn)我蛩胤讲罘治黾翱ǚ綑z驗(yàn)用來做統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)。 [結(jié)果] 1.與同孕齡野

8、生鼠相比，AQP1基因敲除鼠的孕囊數(shù)目隨著妊娠天數(shù)的延長(zhǎng)而進(jìn)行性下降；肉眼可見的萎縮胚胎數(shù)在妊娠18天時(shí)顯著高于野生鼠； 2.AQP1基因敲除鼠胎鼠在妊娠16天、18天及新生鼠的體重明顯低于同齡野生鼠； 3.AQP1基因敲除鼠的羊水量在妊娠的13、16、18天明顯高于野生鼠；且妊娠16天羊水中尿素、肌酐水平下降，表現(xiàn)為低滲狀態(tài)； 4.孕13天AQP1基因敲除鼠胎盤組織質(zhì)量明顯大于同孕齡野生鼠，而孕18天卻明顯低于

9、同孕齡野生鼠； 5.胎盤HE染色：CD-1純系野生鼠胎盤HE染色可見正常小鼠胎盤三層結(jié)構(gòu)：大滋養(yǎng)細(xì)胞層，可見多倍體巨細(xì)胞；海綿樣滋養(yǎng)層，其組織疏松、均勻，內(nèi)見多倍體滋養(yǎng)細(xì)胞及二倍體滋養(yǎng)細(xì)胞；迷路樣滋養(yǎng)層，血管網(wǎng)與滋養(yǎng)細(xì)胞交互纏繞形成迷路樣結(jié)構(gòu)，其內(nèi)血運(yùn)豐富；而AQP1基因敲除鼠胎盤大滋養(yǎng)細(xì)胞層顯示不清；海綿樣滋養(yǎng)層少見大滋養(yǎng)細(xì)胞，層內(nèi)網(wǎng)眼間隙變窄或消失，血管腔變形管壁僵硬；迷路樣結(jié)構(gòu)顯示不清，其內(nèi)血運(yùn)欠豐。 [結(jié)論]