甜菜M14品系表達基因M14-100、M14-265、M14-G12 cDNA全長克隆與序列分析.pdf

1、甜菜M14品系是由栽培甜菜(Beta vùlgaris L．)與野生白花甜菜(Betacorolliflora Zoss.)種間雜交，進一步回交獲得的甜菜無融合生殖單體附加系，其染色體組除了含有18條栽培甜菜染色體外，還附加有白花甜菜第9號染色體，附加染色體的傳遞率高達96.5％，如此高的傳遞率是由于附加的第9號染色體攜帶無融合相關(guān)基因所致。因此，甜菜M14品系是無融合生殖研究極其難得的材料。同時，甜菜M14品系還具有抗寒、抗病的優(yōu)良性

2、狀，對M14品系特異表達基因的研究，也有助于我們挖掘和利用甜菜M14品系具有的優(yōu)良基因。 為了克隆甜菜M14品系中無融合生殖相關(guān)基因，實驗室前期采用抑制消減雜交方法獲得了298個甜菜M14品系特異表達的ESTS。本研究挑選其中3個有研究價值的ESTs作為侯選ESTs，采用SMART RACE技術(shù)獲得了侯選ESTs所在基因--M14-100、M14-265和M14-G12的cDNA全長，并采用RT-PCR法進行驗證，最后對三個目的

3、基因的cDNA全長進行了生物信息學分析。 M14-100 cDNA全長1707bp，GenBank數(shù)據(jù)庫接受號為EU529829，經(jīng)過生物信息學分析，該基因序列與來自擬南芥(Arabidopsis thaliana)的細胞周期蛋白相關(guān)基因序列有60～70％的相似性，但該基因的功能目前還不清楚；M14-100 cDNA最長讀碼框編碼324個氨基酸；推定編碼蛋白的分子量為34.4 kD，理論等電點5.11，有較強的親水性；為非分泌型

4、蛋白：推定蛋白二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明，含有6個α-螺旋和3個β-折疊。 M14-265 cDNA全長1006bp，GenBank數(shù)據(jù)庫接受號為EU529830，經(jīng)生物信息學分析認為該基因是一個新基因；缺乏明顯的讀碼框，最長讀碼框僅編碼81個氨基酸，可能以RNA的形式參與生命活動，也可能編碼短肽；推定編碼蛋白的分子量為9.3 kD，理論等電點4.69，為非分泌型蛋白；推定蛋白的二級結(jié)構(gòu)預測表明，該蛋白含有1個α-螺旋和2個β-折疊。

5、 M14-G12 cDNA全長873bp，GenBank數(shù)據(jù)庫接受號為EU529828，與來自擬南芥(Arabidopsis thaliana)的鈣調(diào)蛋白基因的氨基酸序列相似性達到99％，可以認定該基因即是來自甜菜M14的鈣調(diào)蛋白基因：該基因編碼149個氨基酸，分析結(jié)果顯示其編碼蛋白分子量為16.8 kD，理論等電點4.11，總平均親水性為-0.620；二級結(jié)構(gòu)預測發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)是一個富含α-螺旋的蛋白質(zhì)。三級結(jié)構(gòu)預測，該蛋白包含