慢性粒細胞白血病患者Th22-Th17-Th1變化的臨床研究.pdf

1、慢性粒細胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是獲得性造血干細胞惡性克隆性疾病。占成人白血病的15％。發(fā)病機制是Ph染色體t(9∶22)(q34∶q11)的存在，由于Ph染色體易位形成BCR/ABL融合基因，該基因編碼的P210蛋白具有酪氨酸激酶活性，造成粒細胞的轉(zhuǎn)化和過度增殖[1]。BCR-ABL基因被認為是CML的發(fā)病機制的分子基礎(chǔ)以及診斷和預(yù)后的有效指標[2]。慢性粒細胞白血病患者應(yīng)用ABL酪氨酸激酶

2、抑制劑(TKI)疾病很容易得到控制，但是接受這種治療的患者中大約三分之一的患者會出現(xiàn)疾病進展，這可能與BCR-ABL基因突變及相關(guān)耐藥性有關(guān)[3-4]?；蚝兔庖咭蛩乇徽J為在CML的發(fā)展中起到重要作用。T細胞免疫缺陷在腫瘤的進展中亦起重要作用，近年來免疫因素在CML中的作用受到越來越多的關(guān)注。免疫狀態(tài)在CML是非常復(fù)雜和不明確的，因此了解慢性粒細胞白血病患者的免疫狀態(tài)，對進一步制定以免疫治療為基礎(chǔ)的、有效的治療方案具有重要意義。已有研究

3、表明T細胞數(shù)量異常，CD4+T細胞與CD8+T細胞兩個T細胞亞群水平的上調(diào)或下調(diào)，與機體的免疫功能紊亂和某些血液系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。然而異常的Th亞群和相關(guān)的細胞因子在CML的發(fā)生發(fā)展中的作用，目前研究報道尚少見。
　　多年來人們對CD4+T輔助(Th)細胞的異質(zhì)性的研究局限于Th1和Th2細胞。研究顯示這兩種細胞介導(dǎo)分泌不同的細胞因子，具有不同的免疫功能[6-8]。Th1細胞介導(dǎo)激活CD8+CTL細胞，產(chǎn)生致炎性細

4、胞因子，保護細胞抵抗胞內(nèi)微生物，通過分泌IL-2和IFN-γ促進繁殖，從而發(fā)揮抗細菌、抗病毒和抗腫瘤的作用。此外，IL-2和IFN-γ可以增加NK細胞的抗腫瘤作用。
　　Th17細胞和Th22細胞為近年新近發(fā)現(xiàn)的兩個Th細胞亞群，在外周免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。Th17是一種獨特的CD4+Th細胞，其分化與發(fā)育依賴于細胞因子的作用，Th17細胞特異性表達趨化因子受體CCR6及其配體CCL20，分泌IL-17A，IL-17F，IL

5、-21和IL-22[9]。它們對于細胞外的病原體，包括細菌和真菌有重要作用，參與炎癥和自身免疫疾病的發(fā)生。Th17在不同的免疫介導(dǎo)的疾病以及腫瘤的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用[10-11]。Th17細胞參與腫瘤免疫，但在不同腫瘤的研究中報道并不一樣，是促進還是抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展目前尚無定論，Th17在腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用仍在研究中[12]。IL-17在自身免疫、腫瘤和機體抗感染免疫中作為Th17細胞的主要效應(yīng)因子，在多種組織的基質(zhì)細胞發(fā)揮

6、重要作用[13]。在骨髓基質(zhì)中，IL-17通過調(diào)節(jié)結(jié)合性和可溶性細胞因子的表達，干預(yù)造血干細胞和間充質(zhì)干細胞的增殖、分化和動員[14]。
　　Th22細胞是最近發(fā)現(xiàn)的一種新型的CD4+輔助T細胞亞群，其分泌IL-22和TNF-α，而不分泌IL-17和IFN-γ。Th22細胞表達趨化因子受體CCR6及皮膚歸巢受體CCR4、CCR10，高度表達芳香烴受體的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(AHR)[15-16]。初始性CD4+T細胞在IL-6和腫瘤壞死因

7、子α(TNF-α)的作用下，可以向Th22的表型方向分化，最終形成Th22細胞群[17]。Th22細胞代表一個獨立的終末分化的T細胞亞型[18-19]。
　　IL-22屬于IL-10細胞因子家族，Th22是主要產(chǎn)生IL-22的T細胞亞群，Th22細胞的功能主要通過IL-22來實現(xiàn)[16-17,20]。IL-22在差異誘導(dǎo)幼稚和記憶/效應(yīng)細胞中發(fā)揮保護或致病作用[21-22]。IL-22通過調(diào)節(jié)上皮細胞的生物學(xué)活性，在誘導(dǎo)急性炎性介

8、質(zhì)反應(yīng)、抗感染、增強宿主防御復(fù)等方面起重要作用。當前研究表明，IL-22參與細胞生長，增殖和細胞周期的調(diào)控[23-25]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。
　　Th22和Th17細胞的發(fā)現(xiàn)為疾病的病因和治療開辟了一個新的研究途徑。最近的研究報道了Th17/Th22細胞及其效應(yīng)細胞因子IL-17/IL22在一些自身免疫性疾病的發(fā)病機理和在肝細胞癌[26]、胃癌[27]和肺癌[28]等腫瘤中的作用。國內(nèi)外對Th22及其相關(guān)細胞因子在

9、腫瘤學(xué)領(lǐng)域的研究剛剛起步，關(guān)于Th22細胞和IL-22在腫瘤免疫中的作用和在腫瘤微環(huán)境中的分化、分布，目前的研究數(shù)據(jù)尚有限。Th22和Th17細胞在血液系統(tǒng)惡性腫瘤和非腫瘤性血液病中的作用有了一些研究報道。到目前為止，尚未有Th22和Th17、Th1細胞亞群與CML相關(guān)的研究報道。
　　目的:
　　在本研究中，我們檢測了CML患者外周血和骨髓中Th22、Th17和Th1細胞的比例、Th17和Th22細胞的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和

10、RORC的表達水平及Th22、Th17和Th1相關(guān)細胞因子IL-22、IL-17、IFN-γ的濃度，研究上述T細胞亞群在CML中的相關(guān)性及其與CML臨床特征的關(guān)系，為進一步研究Th22、Th17和Th1細胞在血液系統(tǒng)腫瘤免疫機制中的作用提供資料。
　　方法:
　　1.共63例CML患者納入研究，其中初診(ND)31例，TKI(伊馬替尼)治療后緩解的CML慢性期(CML-CP)患者32例;33例正常對照（22外周血和11例骨髓

11、）。
　　2.應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測Th22/Th17/Th1細胞在CML患者骨髓和外周血中的比例。
　　3.應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測CML患者Th22和Th17相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和RORC mRNA的表達水平。
　　4.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測CML患者骨髓和外周血中的細胞因子IL-22、IL-17和IFN-γ的濃度。
　　5.統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行實驗結(jié)果分析。

12、　　結(jié)果:
　　1.CML初診患者外周血和骨髓的Th22、Th17和Th1比例明顯低于伊馬替尼治療后疾病緩解的CML-CP和正常對照組(P＜0.05)。
　　2.Th22和Th17相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AHR和RORCmRNA的表達水平:初診的CML患者外周血和骨髓的單個核細胞的AHR基因轉(zhuǎn)錄水平與伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對照組比較明顯降低(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者的外周血AHR的水平比

13、正常對照組顯著升高(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者骨髓中的AHR的表達水平比正常對照組高(P＞0.05)，但無統(tǒng)計學(xué)差異。初診的CML患者外周血和骨髓的單個核細胞的RORC基因轉(zhuǎn)錄水平與伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對照組比較均明顯降低(P＜0.05)。伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者組和正常對照組的外周血和骨髓的單個核細胞的RORC基因轉(zhuǎn)錄水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.初

14、診CML和伊馬替尼治療后緩解的CML-CP患者外周血的IL-17濃度高于正常對照組(P＜0.05)。CML-CP組外周血的IL-22濃度比正常對照組升高(P＜0.05)。骨髓中IL-22和IL-17的濃度在初診CML、CML-CP和正常對照組無差異。初診CML骨髓的IFN-γ濃度比正常對照高(P＜0.05)，而CML外周血中IFN-γ的濃度在初診CML、CML-CP和正常對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.CML

15、患者外周血和骨髓的Th22和Th17細胞水平之間均呈正相關(guān)，而Th1和Th22、Th17細胞之間無相關(guān)性。
　　5.Th22、Th17和Th1細胞的比例與CML患者外周血白細胞計數(shù)及BCR-ABL％(IS)均呈負相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　初診CML患者體內(nèi)存在Th22、Th17和Th1細胞數(shù)量減少，CML患者的免疫功能低下可能和Th22，Th17或Th1細胞數(shù)量的減少有關(guān)。經(jīng)伊馬替尼治療的CML患者，疾病緩解后Th22、