甜菜夜蛾NPV萊陽株及增效因子對其作用的研究.pdf

1、甜菜夜蛾核型多角體病毒（SpotopteraexiguaNuclearPolyhedrosisVirus，SeNPV）是一種能有效防治甜菜夜蛾的病原微生物，作為生物殺蟲劑已受到人們的廣泛關(guān)注。同時，如何提高病毒的殺蟲效果也成為亟待解決的問題。本試驗主要對甜菜夜蛾核型多角體病毒萊陽株的生物學(xué)特性以及增效因子的增效作用進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下:
　　 1不同劑量的SeNPV萊陽株分別感染不同齡期的甜菜夜蛾幼蟲，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同一病毒劑量

2、下，低齡幼蟲非常敏感，隨著齡期的增加，幼蟲敏感性下降。
　　 2將SeNPV萊陽株以3×107PIB/頭分別感染棉鈴蟲（Helicoverpaarmigera）、粘蟲（Mythimnaseparata）、粉紋夜蛾（Trichoplusiani）、甜菜夜蛾等多種試蟲，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SeNPV萊陽株只感染甜菜夜蛾幼蟲，說明SeNPV萊陽株具有高度的宿主?；?。
　　 3電鏡結(jié)果顯示，SeNPV萊陽株和國外株的形態(tài)相似，多角體直徑大

3、小約為1.0～2.0μm，病毒粒子呈桿狀，大小約為270～290nm×40～50nm，每個病毒束包含1～5個粒子。
　　 4通過對SeNPV萊陽株和國外株的病毒粒子蛋白SDS-PAGE分析以及病毒基因組DNA限制性酶切圖譜分析，未發(fā)現(xiàn)二者有明顯不同。
　　 5利用設(shè)計的特異性引物從帶有粉紋夜蛾顆粒體病毒(Trichoplusianigranulovirus，TnGV)增效蛋白的質(zhì)粒p3FVEF中擴(kuò)增出約2.7kb的目的片

4、段，將其克隆至原核表達(dá)載體pET21b中，在大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)出約104kDa的蛋白。生物測定結(jié)果顯示，表達(dá)產(chǎn)物與SeNPV混合處理的LTs0為146.0h，SeNPV單獨(dú)處理的LT50為146.2h，二者差異不顯著，未發(fā)現(xiàn)TnGV增效蛋白表達(dá)產(chǎn)物對SeNPV有明顯的增效作用。
　　 6以苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)基因組DNA為模板，設(shè)計特異性引物，PCR擴(kuò)增出1.6kb的目的片