基因重組表達(dá)心肌肌鈣蛋白T、I.pdf

1、急性心肌梗死(Acute myocardial infarction AMI)早期的心電圖變化既不特異也不敏感,臨床上已漸漸依靠心肌組織損傷的生化標(biāo)志物作為早期診斷的指標(biāo).建立免疫測(cè)定方法,獲得高純度抗原是首要的和必須的問題.以往國(guó)內(nèi)外獲取cTnT與cTnI蛋白多采用從心肌提取的方法,這些方法較為繁瑣,且得到的大多為肌鈣蛋白復(fù)合物形式.分子生物學(xué)的進(jìn)展,使人們通過基因重組的方法大量獲取目的蛋白成為可能.近年來,國(guó)內(nèi)外有人嘗試用基因重組的

2、方法表達(dá)cTnT與cTnI,但存在一些問題諸如cTnT表達(dá)量偏低,cTnI的穩(wěn)定性不夠高.該文擬通過同義替換cTnT基因上的稀有密碼子,選取cTnI蛋白的穩(wěn)定區(qū)段對(duì)應(yīng)的基因,在E.Coli中表達(dá)相應(yīng)的融合蛋白,觀察其表達(dá)量、免疫活性及其穩(wěn)定性.第一部分,成人心肌肌鈣蛋白TnT的基因有288個(gè)密碼子,對(duì)E.coli來說有14個(gè)編碼精氨酸的稀有密碼子,其中有12個(gè)AGG和2個(gè)AGA密碼子,所占比例為4.9％.第二部分,不同的cTnI分子片段

3、有不同的穩(wěn)定性,對(duì)蛋白水解酶耐受力最強(qiáng)的片段是cTnI的第28-110位氨基酸序列.這給我們提供了一條線索,通過基因重組表達(dá)cTnI的第28-110位氨基酸,但是有文獻(xiàn)報(bào)道僅僅重組表達(dá)該片段,穩(wěn)定性提高并不明顯.總之,cTnT基因上的兩對(duì)稀有密碼子的同義替換,可提高其在E.Coli中的表達(dá)量;選取cTnI耐受蛋白酶降解的基因區(qū)段,作GST融合蛋白表達(dá),可改善其穩(wěn)定性.該文對(duì)cTnT與cTnI所作的GST融合表達(dá)的研究,目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)