C3與遲發(fā)型超敏反應(yīng)及C3和MBL對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響.pdf

1、補(bǔ)體系統(tǒng)是天然免疫的重要組成部分，由30余種可溶性蛋白和膜結(jié)合蛋白組成，具有調(diào)理和溶解微生物、趨化和過敏毒素、清除免疫復(fù)合物等生物學(xué)功能。補(bǔ)體成分3(C3)是補(bǔ)體系統(tǒng)的中樞，補(bǔ)體激活的3條途徑即經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑都要通過激活C3才得以實(shí)現(xiàn)。C3可能是補(bǔ)體系統(tǒng)中功能最多的分子，它能與20余種蛋白質(zhì)相互作用，產(chǎn)生多種功能。近年來在C3基因敲除(C3-/-)小鼠的研究提示，C3可以觸發(fā)和調(diào)節(jié)獲得性免疫，形成了天然免疫和獲得性免疫之

2、間的橋梁。然而，C3在細(xì)胞免疫或DTH反應(yīng)中的作用究竟如何，作用有多大，還不很清楚。 甘露聚糖結(jié)合凝集素(MBL)系C型凝集素超級(jí)家族中膠凝素家族成員，是天然免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵分子。它可選擇性識(shí)別多種病原體表面的糖結(jié)構(gòu)，以不依賴抗體和C1q的方式激活補(bǔ)體系統(tǒng)，發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能，還能與吞噬細(xì)胞表面膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用。但是，在調(diào)理吞噬中，補(bǔ)體系統(tǒng)的作用、MBL的直接調(diào)理作用究竟有多大?目前尚無(wú)明確的結(jié)論。 因

3、此，本研究用卵白蛋白(OVA)在C3基因敲除小鼠及野生型小鼠誘導(dǎo)足墊的DTH反應(yīng)，探索C3在DTH中的可能作用；分別用C3-/-小鼠和C3+/+小鼠的血清處理各種病原體，并用抗MBL多克隆抗體處理血清，探索C3和MBL對(duì)巨噬細(xì)胞體外吞噬功能的影響。 目的: 1.在C3-/-和C3+/+小鼠(C57BL/6)誘導(dǎo)DTH，探索C3在DTH中的作用。 2.研究MBL體外結(jié)合微生物的能力，探索C3和MBL對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功

4、能的影響。 方法: 1.用OVA誘導(dǎo)小鼠足墊部位的DTH，測(cè)量小鼠足墊厚度的變化，并對(duì)反應(yīng)部位的組織進(jìn)行H&E和免疫組化染色檢查；分離小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞，用巨噬細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞，在體外分別用絲裂原和特異性抗原刺激后，用3H-胸腺嘧啶核苷摻入法評(píng)價(jià)T淋巴細(xì)胞的增殖活性。 2.用ELISA分析幾種病原體結(jié)合MBL的能力，誘導(dǎo)并分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，用C3-/-小鼠和C3+/+小鼠血清及抗MBL多克隆抗體處理微生物

5、，然后與巨噬細(xì)胞相互作用，觀察小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)的變化。 結(jié)論: 1.C3缺陷顯著地影響了DTH反應(yīng)、單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和體外T淋巴細(xì)胞對(duì)特異性抗原再次應(yīng)答增殖反應(yīng)的程度，這提示C3在DTH反應(yīng)中起了重要作用。 2.C3缺陷和用抗體阻斷MBL的作用使巨噬細(xì)胞的吞噬能力降低，C3缺陷的效應(yīng)最明顯；MBL對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬不同病原體的影響大小不一。資料表明，C3和MBL均參與了對(duì)病原體的調(diào)理吞噬，但前者的作用較大