油菜黑脛病原Leptosphaeria biglobosa生物學特性及遺傳多樣性研究.pdf

1、油菜黑脛?。≒homastemcankerorblackleg）是一種世界性的油菜真菌病害，有弱毒（Leptosphaeriabiglobosa）和強毒（Leptosphaeriamaculans）兩種類型，每年都給世界油菜生產帶來嚴重損失。我國最早于1999年從油菜秸稈中發(fā)現弱侵染型病原菌Leptosphaeriabiglobosa。本研究對該病原菌進行了生物學特性及遺傳多樣性的研究。具體研究成果如下:
　　1.從采自我國的油菜

2、秸稈上共分離獲得84株病原菌，鑒定結果顯示，采集到的84株黑脛病病原菌全部為Leptosphaeriabiglobosa。
　　2.菌株的生物學特性為:該病原菌在5～35℃均可進行營養(yǎng)生長并產孢，最適生長和產孢溫度為25℃;在pH4～10的范圍內該菌均能生長并產孢，在pH7的條件下生長最快，產孢最多。光照處理對該菌營養(yǎng)生長無顯著影響，但對孢子產生有抑制作用;最適的碳源、氮源分別是可溶性淀粉、牛肉膏。分生孢子的致死溫度為52℃。

3、r>　　3.建立了適合LeptosphaeriabiglobosaISSR分子標記的最佳反應體系，即在25μL反應體系中包含TaqDNA聚合酶1U，Mg2+2.0mmol/L，dNTPs0.2mmol/L，引物0.6μmol/L，模板40ng以及2.5μL10×buffer。
　　4.從110條引物中篩選出24條適于（Leptosphaeriabiglobosa）ISSR-PCR擴增的引物，并確定了各引物的最佳退火溫度。經對20株

4、病原菌的穩(wěn)定性檢測，證實該優(yōu)化體系可用于該病原菌遺傳多樣性的研究。
　　5.利用篩選出的24條引物對國內外的99株病原菌進行ISSR-PCR反應，對擴增結果進行聚類分析。在遺傳相似系數為0.65時，國內菌株與國外菌株分成兩個居群，而且國內菌株基本按地理來源聚為一個類群。
　　6.利用Popgene32軟件分析國內六個省市菌株的居群結果表明:國內各省菌株遺傳多樣性差異較小，省際間相比較，江蘇省菌株存在較大遺傳多樣性，順序為江蘇