河藍蛤?qū)儇愵惿飳W(xué)性狀及基于線粒體DNA的分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、河藍蛤?qū)?Potamocorbula)貝類在我國沿海分布廣泛,目前關(guān)于河藍蛤?qū)儇愵惖姆诸?、群體遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)研究較少,主要集中在營養(yǎng)成分和育種方面。本研究以我國幾種主要的河藍蛤?qū)儇愵悶檠芯繉ο?探討了兩種殼色光滑河藍蛤(Potamocorbula laevis)表型與體重的關(guān)系;分析了光滑河藍蛤的染色體核型,并進行染色體核型分析;基于線粒體DNA上的COI和16S rRNA基因序列對四種河藍蛤的遺傳多樣性和分類地位進行了比較,分析了

2、黑龍江河藍蛤(Potamocorbula amurensis)3個不同地理群體的遺傳多樣性;利用線粒體COI基因序列對光滑河藍蛤3個不同地理群體遺傳多樣性進行了比較分析。取得的結(jié)果如下:
　　1.兩種殼色光滑河藍蛤表型與重量性狀的關(guān)系:選取野生兩種殼色的光滑河藍蛤各100只,測量其殼長、殼寬、殼高、活體重,用EXCEL和SPSS11.5軟件對200個個體進行統(tǒng)計分析,結(jié)果表明,黃色光滑河藍蛤的表型值均大于褐色光滑河藍蛤,差異極顯著

3、(P<0.01)。相關(guān)分析表明,黃色光滑河藍蛤的表型與活體重的相關(guān)系數(shù)全部達到極顯著水平(P<0.01),褐色光滑河藍蛤的表型與活體重的相關(guān)系數(shù)都達到顯著水平(P<0.05)。黃色蛤的殼長對活體重的直接影響最大,殼高對體重的直接影響作用最小,褐色蛤的殼寬對活體重的直接影響作用最大,殼高對活體重的直接影響作用最小。分別建立兩種殼色光滑河藍蛤的表型和活體重的回歸方程,經(jīng)ANOVA分析表明,黃色光滑河藍蛤建立的方程存在極顯著回歸關(guān)系(P<0.

4、01),褐色蛤建立的方程存在顯著的回歸關(guān)系(P<0.05)。
　　2.光滑河藍蛤染色體制備及核型分析:常規(guī)法制備光滑河藍蛤染色體標本,并分析了其核型,核型公式為2n=34=14m+12sm+8t,總臂數(shù)NF=60。沒有亞端部著絲點染色體,未發(fā)現(xiàn)異型染色體。
　　3.基于COI和16S rRNA的四種河藍蛤的遺傳多樣性和分類地位分析:利用通用引物對光滑河藍蛤,黑龍江河藍蛤,焦河藍蛤(Potamocorbula ustulata

5、),紅肉河藍蛤(Potamocorbula romuscula)4個種共40個個體的線粒體COI和16S rRNA基因片段進行了擴增和測序,經(jīng)過篩選和剪切,分別得到長度為650 bp和450 bp的片段。序列分析顯示,序列的堿基組成中G+C含量較低,16S rRNA基因種間和種內(nèi)的變異較低,COI基因片段種內(nèi)和種間的變異較高。以沙海螂(Mya arenaria)為外群,用MEGA4.0軟件中的NJ法構(gòu)建了系統(tǒng)進化樹,通過遺傳距離和系統(tǒng)進

6、化樹可以看出四種河藍蛤未能達到不同種之間顯著的遺傳分化,這一結(jié)果和傳統(tǒng)分類學(xué)結(jié)果有所差別。
　　4.基于線粒體COI和16S rRNA基因分析黑龍江河藍蛤3個不同地理群體的遺傳多樣性:采用通用引物對遼寧盤錦、遼寧大連、山東日照的3個地理群體黑龍江河藍蛤COI和16S rRNA序列進行擴增、測序分析,得到30條658bp的COI基因部分序列和27條450bp的16S rRNA基因部分序列。其中COI和16S rRNA基因部分序列T、

7、C、A、G和A+T的平均含量分別為45.4％和32.0%、13.5%和13.3%、20.7%和29.3%、20.4%和25.3%、66.1%和61.3%,AT含量高于GC含量。在COI和16S rRNA基因序列中分別檢測到了24個單倍型、43個核苷酸多態(tài)位點和9個單倍型、19個核苷酸多態(tài)性位點。AMOVA分析表明,三個群體間COI和16S rRNA部分基因總遺傳分化系數(shù)分別為Fst=0.0090(P<0.001)和Fst=0.0674(

8、P<0.001),群體內(nèi)遺傳分化遠大于群體間、群體內(nèi)存在較高的遺傳分化。用NJ法構(gòu)建分子進化樹,3個地理群體的黑龍江河藍蛤聚為一個族群,有少數(shù)個體和其他群體的個體聚在一起。
　　5.光滑河藍蛤3個地理群體COI基因遺傳多樣性研究:采用通用引物對山東東營、濰坊、日照的3個地理群體的光滑河藍蛤COI序列進行擴增、測序分析,得到30條665bp的COI基因部分序列。其中COI基因部分序列T、C、A、G和A+T的平均含量分別為46.2%、