暗紋東方鲀化學(xué)感覺行為學(xué)研究及相關(guān)分子生物學(xué)探索.pdf

1、暗紋東方鲀是基因組模式生物生物——紅鰭東方鲀在我國特有的近緣種之一。其對化學(xué)刺激的應(yīng)答模式的研究一直沒有實質(zhì)性進展。紅鰭東方鲀和斑馬魚等模式生物存在一種和化學(xué)感覺相關(guān)的味覺受體基因，但是這些味覺受體基因究竟與哪些化學(xué)感覺行為有關(guān)聯(lián)性均沒有報道。本研究對不同化學(xué)物質(zhì)處理下暗紋東方鲀的感覺行為進行了統(tǒng)計分析，得到了暗紋東方鲀兩種規(guī)格魚針對各種物質(zhì)的不同的誘因系數(shù)，實驗結(jié)果顯示不同規(guī)格的暗紋東方鲀在化學(xué)感覺偏好上沒有明顯差異。對幾種肉類行為反

2、應(yīng)上，實驗魚明顯偏好南美白對蝦肌肉、雞肉漿和螠蟶肉。對植物的行為反應(yīng)上，實驗魚比較偏好芹菜莖。對幾種氨基酸及其衍生物的行為反應(yīng)上，實驗魚比較偏好甘氨酸、丙氨酸、牛磺酸和DMPT，對酵母浸膏有微弱的回避反應(yīng)。行為反應(yīng)與物質(zhì)濃度無必然正相關(guān)關(guān)系。 通過對暗紋東方鲀味覺受體相關(guān)候選基因克隆以及組織差異性表達譜的研究，結(jié)合暗紋東方鲀的化學(xué)感覺行為和生物信息學(xué)分析，對暗紋東方鲀化學(xué)感覺行為與味覺應(yīng)答的分子機理進行了研究，以期了解味覺受體基

3、因在化學(xué)感覺行為反應(yīng)中可能存在的作用。 根據(jù)NCBI公布的魚類味覺受體相關(guān)基因序列設(shè)計了多組特異性引物，用PCR方法對T2R1、TIR1、TIR2b、TIR2a等味覺受體基因進行了克隆，測序和分析。從暗紋東方鲀基因組中克隆了3條包含完整ORF框的味覺受體基因(T2R1為921bp，TIR2b為3124bp，TIR1為3376bp)，2條TIR2a的基因片段(分別為1072bp和1694bp)。測序后與紅鰭東方純相應(yīng)的序列比對發(fā)現(xiàn)

4、，T2R1序列同源性高達99.2％，有7個堿基差異，推測的表達蛋白有5個氨基酸差異；TIR1序列同源性達98.9％，相差27個堿基，推測的表達蛋白有11個氨基酸差異。TIR2b序列同源性達99.2％，相差19個堿基，推測的表達蛋白有8個氨基酸差異。克隆的T1R2a基因片段序列同源性達98.3％，相差47個堿基。 通過生物信息學(xué)分析可知，得到的味覺受體第1家族的TIR1和TIR2b都符合此家族基因的6外顯子、5內(nèi)含子結(jié)構(gòu)特征，翻譯