暗紋東方鲀化學感覺行為學研究及相關分子生物學探索.pdf

1、暗紋東方鲀是基因組模式生物生物——紅鰭東方鲀在我國特有的近緣種之一。其對化學刺激的應答模式的研究一直沒有實質性進展。紅鰭東方鲀和斑馬魚等模式生物存在一種和化學感覺相關的味覺受體基因，但是這些味覺受體基因究竟與哪些化學感覺行為有關聯(lián)性均沒有報道。本研究對不同化學物質處理下暗紋東方鲀的感覺行為進行了統(tǒng)計分析，得到了暗紋東方鲀兩種規(guī)格魚針對各種物質的不同的誘因系數(shù)，實驗結果顯示不同規(guī)格的暗紋東方鲀在化學感覺偏好上沒有明顯差異。對幾種肉類行為反

2、應上，實驗魚明顯偏好南美白對蝦肌肉、雞肉漿和螠蟶肉。對植物的行為反應上，實驗魚比較偏好芹菜莖。對幾種氨基酸及其衍生物的行為反應上，實驗魚比較偏好甘氨酸、丙氨酸、牛磺酸和DMPT，對酵母浸膏有微弱的回避反應。行為反應與物質濃度無必然正相關關系。 通過對暗紋東方鲀味覺受體相關候選基因克隆以及組織差異性表達譜的研究，結合暗紋東方鲀的化學感覺行為和生物信息學分析，對暗紋東方鲀化學感覺行為與味覺應答的分子機理進行了研究，以期了解味覺受體基

3、因在化學感覺行為反應中可能存在的作用。 根據(jù)NCBI公布的魚類味覺受體相關基因序列設計了多組特異性引物，用PCR方法對T2R1、TIR1、TIR2b、TIR2a等味覺受體基因進行了克隆，測序和分析。從暗紋東方鲀基因組中克隆了3條包含完整ORF框的味覺受體基因(T2R1為921bp，TIR2b為3124bp，TIR1為3376bp)，2條TIR2a的基因片段(分別為1072bp和1694bp)。測序后與紅鰭東方純相應的序列比對發(fā)現(xiàn)

4、，T2R1序列同源性高達99.2％，有7個堿基差異，推測的表達蛋白有5個氨基酸差異；TIR1序列同源性達98.9％，相差27個堿基，推測的表達蛋白有11個氨基酸差異。TIR2b序列同源性達99.2％，相差19個堿基，推測的表達蛋白有8個氨基酸差異。克隆的T1R2a基因片段序列同源性達98.3％，相差47個堿基。 通過生物信息學分析可知，得到的味覺受體第1家族的TIR1和TIR2b都符合此家族基因的6外顯子、5內含子結構特征，翻譯