東北虎源等孢球蟲蟲種鑒定及其生物學特性與藥物防治研究.pdf

1、珍稀觀賞動物的球蟲疾病報道近年來逐漸增多。筆者對黑龍江省某動物園的92只貓科動物進行了球蟲感染調查并進行了六種糞檢法檢測效力的測定，結果teleman法+飽和鹽-糖溶液漂浮法為最佳的檢測方法，其球蟲卵囊檢出率為17.39％（16/92），其中幼齡動物感染明顯多于成年動物。
　　 對球蟲卵囊培養(yǎng)后進行形態(tài)學觀察：未孢子化卵囊多數(shù)呈卵圓形，平均長為45.875μm，平均寬為34.775μm，形狀指數(shù)為1.19。卵壁光滑沒有顏色。卵膜

2、共分兩層，外層薄而無色，內層厚呈黑色。無卵膜孔，無極粒，無殘體。卵囊孢子化后，胚囊分裂成為兩個孢子囊，每個孢子囊中含有四個子孢子，殘體清晰可見。孢子囊呈橢圓形，平均長為26.875μm，平均寬為22.375μm，形狀指數(shù)為1.25。提取蟲體基因組DNA，并根據(jù)GenBank上發(fā)表的貓等孢球蟲核糖體內轉錄間隔區(qū)Ⅰ（Cystoisospora felis internal transcribed spacer 1, ITS1）序列設計引物，

3、對目的片段進行PCR擴增和序列測定。應用DNAStar軟件，將長為389bp的目的片段與Genbank中發(fā)表的19種球蟲相應的ITS1序列進行同源性比較，序列分析顯示東北虎源球蟲與其它19種球蟲相應序列同源性為38.11％～98.71％之間，其中與等孢球蟲的同源性為55.64％～98.71％之間。綜合對東北虎源球蟲形態(tài)學觀察、PCR擴增其ITS1序列并進行序列分析，構建分子進化樹及系統(tǒng)發(fā)生關系的分析以及動物感染實驗，確定東北虎源球蟲為等

4、孢屬球蟲，并且與貓等孢球蟲親緣最近。
　　 應用單卵囊分離技術，獲得東北虎源等孢球蟲純種卵囊。分別給貓感染30、103、104個孢子化卵囊，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及每克糞便中卵囊數(shù)（OPG值）。通過對比，驗證了潛隱期、顯露期、OPG值與感染劑量存在相關關系，即感染劑量越小，潛隱期越長，顯露期越長，OPG值越小；反之亦然。感染30個卵囊的貓無明顯臨床病征；感染103個卵囊的貓腹瀉出現(xiàn)少量血便；感染10

5、4個卵囊的貓水樣腹瀉后出現(xiàn)大量血便。
　　 感染103與104個孢子化卵囊的貓完成卵囊排放，于10d后再次感染103個孢子化卵囊，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結果表明感染強度與免疫力存在正相關關系，即首次感染強度較大組產生的免疫記憶較強，再次感染相同劑量卵囊后，其卵囊排出數(shù)量少，表現(xiàn)出的病癥也相對較輕。
　　 妥曲株利和莫能菌素分別按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂貓

6、并于當日接種104個孢子化卵囊，首次用藥后24h再給藥一次。于感染后三天（PID3）開始，用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查糞便，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結果表明兩預防組均無卵囊檢出，妥曲株利與莫能菌素給藥后均可有效地預防等孢球蟲感染。
　　 給貓感染104個孢子化卵囊，于卵囊始現(xiàn)日將妥曲株利和莫能菌素分別按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂貓，首次用藥后24h再給藥一次。結果給

7、藥后，兩治療組的卵囊排出強度快速下降。與莫能菌素相比，百球清表現(xiàn)出更強、更快的殺蟲和抑蟲作用，其治療效果更為優(yōu)秀。
　　 利用妥曲株利和莫能菌素進行藥物預防和治療實驗的貓，于糞中卵囊最早消失的時間延后10d，再次感染104個孢子化卵囊，于PID3開始，用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查糞便，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結果表明：兩藥物預防組的貓再次感染卵囊后，其卵囊排出強度與正常一次感染組相似，遠大