魷魚(yú)肝水解工藝的優(yōu)化及水解液毒理研究【開(kāi)題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　生物工程</b></p><p><b>　　魷魚(yú)肝的水解工藝</b></p><p><b>　　選題的背景與意義

2、</b></p><p>　　我國(guó)是一個(gè)海洋大國(guó)，隨著對(duì)海洋生物研究的深入和研究開(kāi)發(fā)技術(shù)的提高，從海洋生物中尋找新的活性物質(zhì)已成為海洋藥物和食品功能因子研究的重要目標(biāo)之一。在這一方面，我國(guó)的研究起步較晚，目前仍處于初級(jí)階段，經(jīng)過(guò)研究的海洋生物只占很小一部分。更為重要的是，我國(guó)是一個(gè)水產(chǎn)品加工大國(guó)，因此水產(chǎn)品副產(chǎn)物的利用問(wèn)題非常重要，如何合理開(kāi)發(fā)利用這些寶貴資源，應(yīng)該引起各方面的高度重視。水產(chǎn)品副產(chǎn)物的

3、綜合利用好壞將直接影響水產(chǎn)業(yè)、食品工業(yè)等相關(guān)產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。</p><p>　　魷魚(yú)是軟體動(dòng)物門(mén)（Mollusca）、頭足綱（Cephalopoda）、鞘亞綱（Coleoidea）、十腕總目（Decapodiformes）、槍形目（Teuthida）、柔魚(yú)科（Ommastrephidae）和槍形目、閉眼亞目(Myopsida)、槍烏賊科（Loliginidae）動(dòng)物的俗稱，亦稱柔魚(yú)。魷魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)豐富，高蛋白、低脂

4、肪，是良好的水產(chǎn)品加工原料。近年來(lái)，我國(guó)魷魚(yú)的捕撈總量逐年提升，進(jìn)口量也逐年擴(kuò)大。浙江是魷魚(yú)加工大省，僅浙江興業(yè)集團(tuán)有限公司2007年的魷魚(yú)加工量就將近20萬(wàn)噸，而目前我國(guó)魷魚(yú)生產(chǎn)加工產(chǎn)業(yè)的產(chǎn)品層次比較低，主要從事簡(jiǎn)單的來(lái)料加工，如魷魚(yú)絲、魷魚(yú)片、魷魚(yú)段等，從而產(chǎn)生了大量的魷魚(yú)內(nèi)臟廢棄物。但它們的高值化應(yīng)用卻未得到應(yīng)有的重視，魷魚(yú)內(nèi)臟多經(jīng)初加工制成魷溶漿、魷魚(yú)內(nèi)臟粉等作為魚(yú)類和蝦飼料，部分當(dāng)作廢棄物直接丟棄或掩埋，并未得到充分利用。&l

5、t;/p><p>　　魷魚(yú)肝臟作為廢棄物占魷魚(yú)濕重的15%左右，其含有豐富的蛋白質(zhì)和多種無(wú)機(jī)元素。蛋白質(zhì)可被酶切成能被動(dòng)物直接吸收利用的肽和氨基酸。這樣既開(kāi)拓了新的蛋白質(zhì)資源，又解決了環(huán)境問(wèn)題。</p><p>　　因此本課題選取魷魚(yú)加工廢棄物中較有價(jià)值的內(nèi)臟進(jìn)行水解工藝的研究?jī)?yōu)化，為進(jìn)一步提高其附加值及相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)

6、容與擬解決的主要問(wèn)題：</p><p><b>　　（一）基本內(nèi)容：</b></p><p>　　對(duì)魷魚(yú)肝臟進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分分析，并選取合適的酶對(duì)其進(jìn)行水解實(shí)驗(yàn)。在溫度、時(shí)間、料液比等單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面技術(shù)對(duì)水解工藝進(jìn)一步優(yōu)化，以獲得最佳水解條件，然后進(jìn)行水解液中氨基酸的測(cè)定。</p><p>　?。ǘM解決的主要問(wèn)題：</p&

7、gt;<p>　　1．魷魚(yú)肝臟的基本營(yíng)養(yǎng)成分</p><p><b>　　2．水解條件的優(yōu)化</b></p><p>　　3．水解液中主要氨基酸的含量</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　?。ㄒ唬┭芯康姆椒ǎ?lt;/b></p><

8、p>　　1．基本營(yíng)養(yǎng)成分分析：</p><p>　　(1) 粗蛋白質(zhì)－凱氏定氮法</p><p>　　(2) 粗脂肪含量測(cè)定－索氏提取法</p><p>　　(3) 水分含量測(cè)定－105℃恒溫干燥法</p><p>　　(4) 灰分－灼燒法</p><p>　　2．水解條件優(yōu)化：響應(yīng)面法</p>&

9、lt;p>　　3．水解液中氨基酸的測(cè)定：高效液相色譜法</p><p><b>　?。ǘ┘夹g(shù)路線：</b></p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010年10月-11月：查閱文獻(xiàn)，收集相關(guān)資料。</p><p>　　2010年11月-12月：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的宏觀技術(shù)路線，制定大體實(shí)驗(yàn)步驟

10、。</p><p>　　2010年12月- 2011年1月：魷魚(yú)肝臟樣品處理及基本營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。</p><p>　　2011年 2 月- 3 月：水解條件的優(yōu)化及水解液氨基酸的測(cè)定。</p><p>　　2011年 3 月- 4 月：整理數(shù)據(jù)，總結(jié)實(shí)驗(yàn)，論文寫(xiě)作。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b>

11、</p><p>　　[1] 董正之. 世界大洋經(jīng)濟(jì)頭足類生物學(xué)[M]. 濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社, 1991:82-195.</p><p>　　[2] 宋慶武, 丁立孝, 黃賢剛. 利用下腳料加工魷魚(yú)腸[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2009.30(2): 72-74.</p><p>　　[3] 馬永鈞, 秦乾安, 陳小娥等. 魷魚(yú)加工副產(chǎn)物綜合利用研究進(jìn)展[J]

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19、珍,等. 魷魚(yú)肝臟中大分子核酸的組成及分離純化條件研究[J]. 中國(guó)藥物與臨床, 2002, 2 (1) : 7-9</p><p>　　[19] 趙梅, 吳成業(yè). 魚(yú)蛋白水解及脫苦方法研究進(jìn)展[J]. 福建水產(chǎn), 2006,6(2):52-55.</p><p>　　[20] 趙玉紅, 孔保華. 魚(yú)蛋白水解的研究進(jìn)展[J]. 肉類工業(yè), 2000,3:31-34.</p>

20、<p>　　[21] 許永紅. 蛋白質(zhì)酶法水解物苦味的控制[J]. 食品工業(yè)科技, 1997,3:1-4.</p><p>　　[22] 黃光榮, 將家新, 應(yīng)躍躍. 魷魚(yú)皮蛋白質(zhì)酶促水解研究[J]. 食品科技, 2003,8(3):84-94.</p><p>　　[23] 張立彥, 曾慶孝, 龍佳林. 酶法水解蟹腿肉的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2001,28(2):37

21、-40.</p><p>　　[24] 田泱源, 李瑞芳. 響應(yīng)面法在生物過(guò)程優(yōu)化中的應(yīng)用[J]. 食品工程, 2010,2:8-11.</p><p>　　[25] 王小軍, 張綿松, 袁文鵬等. 鳀魚(yú)蛋白酶解條件響應(yīng)面優(yōu)化[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2009,30(12):48-53</p><p>　　[26] 舒留泉, 鄭謙益, 盤(pán)賽昆等. 響應(yīng)面法優(yōu)化四角

22、蛤蜊水解的工藝[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2010,31(3):52-54.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　生物工程</b></p><p>　　魷魚(yú)肝水解工藝的研究與進(jìn)展</p><p>　　摘要：本文綜述了近年來(lái)國(guó)內(nèi)外魷魚(yú)加工下腳料特別是肝臟的

23、高值化研究的進(jìn)展，簡(jiǎn)明介紹了，以魷魚(yú)肝臟為原料開(kāi)發(fā)魚(yú)油，水解得到氨基酸等制品的研究狀況。并展望了魷魚(yú)肝臟的應(yīng)用前景和發(fā)展趨勢(shì)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：魷魚(yú)；下腳料；肝臟；水解</p><p><b>　　1、簡(jiǎn)介</b></p><p>　　魷魚(yú)(Ommastrephes bartrami)是軟體動(dòng)物門(mén)（Mollusca）、頭足綱（Cep

24、halopoda）、鞘亞綱（Coleoidea)、十腕總目(Decapodiformes)、槍形目(Teuthida)、柔魚(yú)科（Ommastrephidae）和槍形目、閉眼亞目(Myopsida)、槍烏賊科（Loliginidae）動(dòng)物的俗稱[1]，亦稱柔魚(yú)。魷魚(yú)體扁長(zhǎng)，頭腕似佛手狀，肉鰭緊附在尾部?jī)蓚?cè)，形似雙髻，全身均為淺粉色，表面有白霜。主要產(chǎn)于我國(guó)廣東、福建、浙江，產(chǎn)期為7～8月，日本、越南、朝鮮也產(chǎn)。</p>&l

25、t;p>　　魷魚(yú)是名貴的海產(chǎn)品，富含蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵等，并含有十分豐富的諸如硒、碘、錳、銅等微量元素的食物，對(duì)骨骼發(fā)育和造血十分有益，可預(yù)防貧血。魷魚(yú)除了富含蛋白質(zhì)及人體所需的氨基酸外，還是含有大量牛磺酸的一種低熱量食品[2]。因此魷魚(yú)是一種優(yōu)質(zhì)的水產(chǎn)品加工原材料。</p><p><b>　　2、研究現(xiàn)狀與進(jìn)展</b></p><p>　　近10年來(lái)，隨著我

26、國(guó)北太平洋的魷釣業(yè)規(guī)模不斷形成擴(kuò)大，魷魚(yú)的捕撈總量逐年提升，進(jìn)口量也逐年擴(kuò)大。浙江是魷魚(yú)加工大省，僅浙江興業(yè)集團(tuán)有限公司2007年的魷魚(yú)加工量就將近20萬(wàn)噸[3]。然而，我國(guó)魷魚(yú)目前的生產(chǎn)工業(yè)產(chǎn)品層次比較低，主要從事簡(jiǎn)單的來(lái)料加工，如魷魚(yú)絲、魷魚(yú)片、魷魚(yú)段等。原料并未得到充分利用，附加值低，尤其是加工下腳料，多為內(nèi)臟、皮、魷魚(yú)嘴等，其占魷魚(yú)總量的15％-20％，大都加工成魚(yú)粉，部分甚至直接丟棄或掩埋，造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。因此，有必要

27、對(duì)魷魚(yú)下腳料進(jìn)行新一輪的研究，以提高其附加值，國(guó)內(nèi)外有不少科研院校和企業(yè)單位正在研究和開(kāi)發(fā)魷魚(yú)加工下腳料中的功能活性物質(zhì)，一些新穎的水產(chǎn)加工廢棄物的資源再利用技術(shù)正在得到有效開(kāi)發(fā)。</p><p>　　對(duì)于魷魚(yú)下腳料的研究，報(bào)道較多的，主要是基本營(yíng)養(yǎng)成分的分析及相關(guān)的綜述性報(bào)道，將魷魚(yú)下腳料根據(jù)其部位或成分進(jìn)行具體分類，深入研究的報(bào)道主要為以下幾大類，如從魷魚(yú)皮中提取、制備膠原蛋白，從魷魚(yú)眼中提取透明質(zhì)酸，跟烏賊

28、進(jìn)行比較，研究魷魚(yú)墨的相關(guān)功效等，而對(duì)于魷魚(yú)肝的研究利用則較少。</p><p>　　3、魷魚(yú)肝的利用與研究</p><p>　　魷魚(yú)內(nèi)臟占魷魚(yú)濕重的15％左右，其中大部分為肝臟，因其含有可以促進(jìn)魚(yú)蝦攝餌的氨基酸，所以一般加工成魚(yú)蝦飼料[4-5]，而并沒(méi)有充分利用。</p><p>　　吳莉敏[6]對(duì)市場(chǎng)上的凍品魷魚(yú)內(nèi)臟進(jìn)行了營(yíng)養(yǎng)成分的分析，得出魷魚(yú)內(nèi)臟蛋白質(zhì)含量為

29、21.24%，脂肪21.15%，水分55.91%，灰分1.45%。魷魚(yú)內(nèi)臟中的礦物質(zhì)含量豐富，包括鈣、磷、鐵、鋅、鎂、銅和硒等，其中鈣、鐵、磷的含量最高。</p><p>　　魷魚(yú)內(nèi)臟的產(chǎn)品現(xiàn)在開(kāi)發(fā)處于理論階段，如宋慶武等[2]，利用魷魚(yú)下腳料加工魷魚(yú)腸，初步確定了魷魚(yú)腸的加工工藝，并對(duì)相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行了彈度、韌度、滋味、色澤等方面的測(cè)試及相應(yīng)的感官指標(biāo)和微生物的檢測(cè)。劉鑫[7]等也初步探討了魷魚(yú)低溫火腿腸的加工工藝

30、，為魷魚(yú)下腳料的高值化研究奠定了初步的基礎(chǔ)。</p><p>　　3.1 魷魚(yú)肝中脂肪的提取與利用</p><p>　　魷魚(yú)肝臟含有20％-30％的粗脂肪，郭無(wú)瑕等[8] 系統(tǒng)的地研究了從魷魚(yú)肝臟中提取油脂與精煉魚(yú)油的方法，并證實(shí)精煉后的魷魚(yú)油澄清透明，略顯淡黃色，并有淡淡的魚(yú)腥味，其各項(xiàng)指標(biāo)均符合SC/T3502- 2000魚(yú)油一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上，其用氣相色譜/質(zhì)譜法分析了魷魚(yú)油中脂肪

31、酸的成分。結(jié)果表明，精煉魷魚(yú)油中多不飽和脂肪酸(PUFA)的含量較高(36.5％)，其中C20:5(EPA)和C22:6(DHA)的含量分別為13.1％ 和20.3％。這與王慶梅等[9]利用氣相色譜法分析魷魚(yú)中脂肪酸的成分得到的結(jié)論基本一致?？梢?jiàn)，魷魚(yú)肝臟是提取EPA和DHA的良好原料。且魷魚(yú)肝臟油由于其不飽和脂肪酸含量高，而在10℃左右的室溫下不凝結(jié)，在醫(yī)藥和飼料工業(yè)中有較廣泛的利用前景 [10]。</p><p&

32、gt;　　3.2 魷魚(yú)肝中蛋白質(zhì)的水解及利用</p><p>　　將魷魚(yú)肝臟中的大部分脂肪提取后的剩余部分，大約占濕重的55%-65%，如果將其丟棄，則會(huì)產(chǎn)生大量的二次廢物。這些殘?jiān)某煞忠缘鞍踪|(zhì)為主，如可選取合適的酶將其水解，并對(duì)水解的條件優(yōu)化，對(duì)水解液進(jìn)一步分析利用，則會(huì)是一種方便、快捷且較實(shí)用的再利用方式。</p><p>　　章建設(shè)等[11]探索了NaCl溶液提取魷魚(yú)內(nèi)臟糖蛋白的工

33、藝流程及工藝條件；并初步探討了魷魚(yú)內(nèi)臟糖蛋白對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果表明，魷魚(yú)內(nèi)臟中含有較高的蛋白質(zhì)；提取的最佳工藝條件是：料液比1：6、浸提時(shí)間為60min、NaCl濃度為3%、浸提溫度為80℃；該工藝所提取得到的蛋白質(zhì)具有一定的免疫活性。</p><p>　　利用魷魚(yú)內(nèi)臟廢棄物制得天然調(diào)味品——海味素，蛋白質(zhì)含量高，氨基酸成分齊全，海鮮味濃，口感鮮美，是有利于人體健康長(zhǎng)壽的營(yíng)養(yǎng)食品[12]。目前西班牙和日本

34、都有魷魚(yú)醬油的產(chǎn)生和銷售[13]。這主要是因?yàn)槠涞鞍踪|(zhì)含量在20％左右，可采用酶解發(fā)酵法進(jìn)行加工。</p><p>　　魷魚(yú)內(nèi)臟中含有豐富的內(nèi)源蛋白酶[14-15],可以自溶液化。司偉蘭等[16]對(duì)魷魚(yú)內(nèi)臟進(jìn)行了成分分析及自溶條件的研究。以水解度和水解液中氨基酸態(tài)氮的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以提高魷魚(yú)內(nèi)臟的水解度為目的，測(cè)定了魷魚(yú)內(nèi)臟基本成分，進(jìn)行單因素試驗(yàn)確定了魷魚(yú)內(nèi)臟的自溶最佳料液比1：1，PH值4.5，恒溫45℃，

35、自溶12h。同時(shí)添加半胱氨酸和巰基乙醇，紫外線和超聲處理對(duì)自溶都有促進(jìn)作用。但是該實(shí)驗(yàn)沒(méi)有對(duì)各個(gè)單因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。徐偉等[17] 采用正交實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面分析法系統(tǒng)研究并優(yōu)化了魷魚(yú)加工副產(chǎn)物中蛋白質(zhì)成分被內(nèi)源蛋白酶水解的工藝條件。結(jié)果顯示，條件優(yōu)化后，水解液中的氨基態(tài)氮含量比優(yōu)化前的最大值提高40％。</p><p>　　此外魷魚(yú)肝臟還含有豐富的核酸[18]及多種酶類。提取、純化這些活性物質(zhì)，將是對(duì)魷魚(yú)廢棄物更高層

36、次的利用。</p><p><b>　　4、蛋白質(zhì)水解方式</b></p><p>　　目前蛋白質(zhì)的水解方式主要有化學(xué)降解法和酶解法[19]。</p><p><b>　　4.1 化學(xué)降解法</b></p><p>　　化學(xué)降解法是最早的一種水解方法，方法簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，但生產(chǎn)過(guò)程中氨基酸受損嚴(yán)重，

37、且還會(huì)使L-氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)镈-氨基酸，形成Lys-Ala這樣的有毒物質(zhì)[20]，目前較少使用。</p><p><b>　　4.2 酶水解法</b></p><p>　　酶水解法條件溫和，能在一定條件下進(jìn)行定位水解分裂產(chǎn)生特定的肽，且易于控制水解進(jìn)程，氨基酸不會(huì)被破壞，構(gòu)型也不發(fā)生變化，因而目前多采用這種方法來(lái)制備水解蛋白。目前使用較多的有以下幾種蛋白酶：</p&

38、gt;<p><b>　　(1) 胃蛋白酶</b></p><p>　　胃蛋白酶是一種疏水專一性內(nèi)切蛋白酶[21]。胃蛋白酶水解效果易受到pH值的影響，水解度不高，在40℃、pH2.0、水解時(shí)間8h、酶添加量2.5％條件下水解魷魚(yú)皮水解度為9.1％[22]。</p><p><b>　　(2) 胰蛋白酶</b></p>

39、<p>　　胰蛋白酶也是一種疏水專一性內(nèi)切蛋白酶[21]。胰蛋白酶的水解效果易受到酶添加量的影響，水解度比胃蛋白酶略高，在45℃、pH6.5、水解時(shí)間4h、酶添加量1.5％ 條件下水解魷魚(yú)皮水解度為19.6％[22]。</p><p><b>　　(3) 木瓜蛋白酶</b></p><p>　　木瓜蛋白酶是一種內(nèi)切酶，水解速度快，價(jià)格低廉，但是水解液風(fēng)味較

40、差。張立彥等[23]比較符合蛋白酶、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶及中性蛋白酶水解蟹肉的效果，試驗(yàn)表明，木瓜蛋白酶水解率最高，pH5.0、溫度60℃、E/S為4000U/g、固液比1：2.5條件下水解1小時(shí)，水解率可達(dá)47％。</p><p>　　5、響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)條件</p><p>　　響應(yīng)面法是1951年的Box-Wilson開(kāi)發(fā)的用于化學(xué)過(guò)程因子優(yōu)化的一種綜合性方

41、法。響應(yīng)面法采用多元二次回歸方程來(lái)擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，通過(guò)對(duì)函數(shù)響應(yīng)面和等高線分析，精確研究各因子與響應(yīng)值之間的關(guān)系，尋求最優(yōu)工藝參數(shù)，解決多變量?jī)?yōu)化問(wèn)題[24]。他可以用于描述單個(gè)試驗(yàn)變量對(duì)響應(yīng)值的影響、確定試驗(yàn)變量之間的響應(yīng)關(guān)系、描述所有試驗(yàn)變量對(duì)響應(yīng)值得綜合影響。</p><p>　　響應(yīng)面法具有實(shí)驗(yàn)次數(shù)少、周期短、精度高等特點(diǎn)，可快速有效地確定多因子系統(tǒng)的最佳條件，因此，是一種有效地優(yōu)化基礎(chǔ)實(shí)

42、驗(yàn)條件的技術(shù)。已經(jīng)在食品、醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。</p><p>　　響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)流程：</p><p>　　Plackett-Burman 設(shè)計(jì) </p><p><b>　　影響因子篩選</b></p><p><b>　　部分因子設(shè)計(jì)法</b></p><p>

43、<b>　　最陡爬坡實(shí)驗(yàn)</b></p><p><b>　　中心組合設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　　響應(yīng)面分析</b></p><p>　　Box-Behnken 設(shè)計(jì)法</p><p>　　響應(yīng)面法在水解工藝的優(yōu)化中得到了廣泛的作用。王小軍等[25]采用復(fù)合蛋白酶

44、、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶等對(duì)鳀魚(yú)蛋白進(jìn)行酶解，應(yīng)用響應(yīng)面法對(duì)加酶量、溫度、PH、時(shí)間、料液比等進(jìn)行分析，最終獲得最佳實(shí)驗(yàn)條件。舒留泉等[26]應(yīng)用響應(yīng)面分析法研究了以四角蛤蜊為原料，以胃蛋白酶對(duì)其水解制備活性肽。</p><p><b>　　6、總結(jié)</b></p><p>　　隨著魷魚(yú)捕撈量的逐年增加，魷魚(yú)加工下腳料也會(huì)逐漸增加，其中魷魚(yú)肝臟占魷魚(yú)濕重的15%左右，

45、魷魚(yú)肝臟含有大量的脂肪及蛋白質(zhì)，卻被當(dāng)作廢棄物直接丟棄，并沒(méi)有得到充分的開(kāi)發(fā)利用。因此，如何高效利用魷魚(yú)肝臟，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值已經(jīng)成為非常重要的問(wèn)題。隨著近幾年對(duì)海洋資源的開(kāi)發(fā)和研究，魷魚(yú)下腳料的加工和利用研究的深入，魷魚(yú)肝臟的附加值定會(huì)隨著科技的發(fā)展而逐年增加。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 董正之. 世界大洋經(jīng)濟(jì)頭足類生物

46、學(xué)[M]. 濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社, 1991:82-195.</p><p>　　[2] 宋慶武, 丁立孝, 黃賢剛. 利用下腳料加工魷魚(yú)腸[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2009.30(2): 72-74.</p><p>　　[3] 馬永鈞, 秦乾安, 陳小娥等. 魷魚(yú)加工副產(chǎn)物綜合利用研究進(jìn)展[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化, 2008,35:4</p><p>　　[4

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48、4-96.</p><p>　　[7] 劉鑫, 薛長(zhǎng)湖, 李兆杰等. 魷魚(yú)低溫火腿腸的加工工藝[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2007,33(1):65-68.</p><p>　　[8] 郭無(wú)瑕, 胡建恩, 王秀武等. 魷魚(yú)肝臟魚(yú)油的制備及其脂肪酸組成分析[J]. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2007,22(1): 77-80.</p><p>　　[9] 王慶梅, 張方.

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50、<p>　　[11] 章建設(shè), 雷曉凌. 魷魚(yú)內(nèi)臟糖蛋白提取工藝及其免疫活性初步研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2008,24(2):167-169.</p><p>　　[12] 袁亞輝, 姚美君. 利用魷魚(yú)內(nèi)臟生產(chǎn)海味素的研究[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化,2002 (1) : 27-28.</p><p>　　[13] 邵偉, 王棟, 陳菽等. 淡水魚(yú)下腳料速釀魚(yú)露及脫腥技術(shù)初探[J

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53、0,8:11-14.</p><p>　　[17] 徐偉,呂英濤,薛長(zhǎng)湖等.魷魚(yú)加工副產(chǎn)物內(nèi)源蛋白酶自水解工藝優(yōu)化[J].食品工業(yè)科技, 2008,8:176-179</p><p>　　[18] 解軍,牛勃,王惠珍,等. 魷魚(yú)肝臟中大分子核酸的組成及分離純化條件研究[J]. 中國(guó)藥物與臨床, 2002, 2 (1) : 7-9</p><p>　　[19] 趙梅,

54、 吳成業(yè). 魚(yú)蛋白水解及脫苦方法研究進(jìn)展[J]. 福建水產(chǎn), 2006,6(2):52-55.</p><p>　　[20] 趙玉紅, 孔保華. 魚(yú)蛋白水解的研究進(jìn)展[J]. 肉類工業(yè), 2000,3:31-34.</p><p>　　[21] 許永紅. 蛋白質(zhì)酶法水解物苦味的控制[J]. 食品工業(yè)科技, 1997,3:1-4.</p><p>　　[22] 黃光榮

55、, 將家新, 應(yīng)躍躍. 魷魚(yú)皮蛋白質(zhì)酶促水解研究[J]. 食品科技, 2003,8(3):84-94.</p><p>　　[23] 張立彥, 曾慶孝, 龍佳林. 酶法水解蟹腿肉的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2001,28(2):37-40.</p><p>　　[24] 田泱源, 李瑞芳. 響應(yīng)面法在生物過(guò)程優(yōu)化中的應(yīng)用[J]. 食品工程, 2010,2:8-11.</p>

56、;<p>　　[25] 王小軍, 張綿松, 袁文鵬等. 鳀魚(yú)蛋白酶解條件響應(yīng)面優(yōu)化[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2009,30(12):48-53</p><p>　　[26] 舒留泉, 鄭謙益, 盤(pán)賽昆等. 響應(yīng)面法優(yōu)化四角蛤蜊水解的工藝[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2010,31(3):52-54.</p><p><b>　　本科畢業(yè)論文</b><

57、;/p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　魷魚(yú)肝水解工藝的優(yōu)化及水解液毒理研究</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　引言………………………………………………………………………………………………………………… 1</p><p&

58、gt;　　1 材料與方法……………………………………………………………………………………………………….1</p><p>　　1.1 材料………………………………………………………………………………………………………..1</p><p>　　1.2 方法………………………………………………………………………………………………………..2</p><p>　　1.

59、2.1 樣品處理…………………………………………………………………………………………...2</p><p>　　1.2.2 營(yíng)養(yǎng)成分分析……………………………………………………………………………………...2</p><p>　　1.2.3 無(wú)機(jī)元素含量測(cè)定………………………………………………………………………………...2</p><p>　　1.2.4 水解條

60、件優(yōu)化……………………………………………………………………………………...2</p><p>　　1.2.4.1 酶的選取……………………………………………………………………………………2</p><p>　　1.2.4.2 酶的單因素試驗(yàn)……………………………………………………………………………3</p><p>　　1.2.4.3響應(yīng)面設(shè)計(jì)…………………………

61、……………………………………….………………3</p><p>　　1.2.4.4 水解液中氨基酸的測(cè)定……………………………………………………………………3</p><p>　　1.2.5 急性毒理實(shí)驗(yàn)……………………………………………………………………………………...3</p><p>　　1.2.5.1 劑量確定……………………………………………………………

62、………………………3</p><p>　　1.2.5.2 毒理實(shí)驗(yàn)……………………………………………………………………………………3</p><p>　　1.2.5.3 指標(biāo)測(cè)定……………………………………………………………………………………3</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果………………………………………………………………………………………………………….3<

63、;/p><p>　　2.1 基本營(yíng)養(yǎng)成分……………………………………………………………………………………………..3</p><p>　　2.2 無(wú)機(jī)元素含量……………………………………………………………………………………………..4</p><p>　　2.3 不同酶的水解度…………………………………………………………………………………………..4</p>

64、<p>　　2.4 酶濃度……………………………………………………………………………………………………..4</p><p>　　2.5 料液比……………………………………………………………………………………………………..5</p><p>　　2.6 時(shí)間………………………………………………………………………………………………………..5</p><p

65、>　　2.7 溫度………………………………………………………………………………………………………..6</p><p>　　2.8 pH…………………………………………………………………………………………………………..6</p><p>　　2.9 響應(yīng)面設(shè)計(jì)………………………………………………………………………………………………..7</p><p>　　

66、2.10水解液中氨基酸含量…………………………………………….……………………………………..10</p><p>　　2.11急性毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果…………….………………………………………………………………………..10</p><p>　　3 討論……………………………………………………………………………………………………………...11</p><p>　　4 結(jié)

67、論……………………………………………………………………………………………………………...11</p><p>　　致謝………………………………………………………………………………………………………………...13</p><p>　　參考文獻(xiàn)…………………………………………………………………………………………………………...14</p><p>　　摘 要：對(duì)

68、魷魚(yú)肝臟進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的分析，并選取合適的酶對(duì)其進(jìn)行水解實(shí)驗(yàn)。以水解度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在溫度、時(shí)間、料液比等單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面技術(shù)對(duì)水解工藝進(jìn)一步優(yōu)化，確定了復(fù)合蛋白酶最佳水解條件：在pH=7.5，加酶量為5%，料液比為1:5.17，溫度67.2℃條件下，水解104.8min。因?yàn)楦闻K在動(dòng)物體內(nèi)起到排毒、解毒的作用，因此對(duì)其水解液內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的組成及食用安全性進(jìn)行了探討，為進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行高值化利用提供了理論依據(jù)。</p>

69、;<p>　　關(guān)鍵詞：魷魚(yú)；內(nèi)臟；水解；氨基酸；毒理研究</p><p>　　Abstract: Analysing the nutrition composition of squid liver, and selecting an appropriate enzyme for the hydrolysis experiment. The index for the evaluation is t

70、he degree of hydrolysis, on the basis of the temperature, time, ratio of material to water and some other single factor experiments, using response surface to further optimize the hydrolysis technology, Determine the opt

71、imal hydrolysis conditions for protease: pH = 7.5, enzyme concentration is 5%, ratio of material to water is 1:5.17, a</p><p>　　Keywords: Squid; Liver; Hydrolysis; Amino acids; Toxicological studies</p>

72、;<p><b>　　引言</b></p><p>　　魷魚(yú)是軟體動(dòng)物門(mén)（Mollusca）、頭足綱（Cephalopoda）、鞘亞綱（Coleoidea)、十腕總目(Decapodiformes)、槍形目(Teuthida)、柔魚(yú)科（Ommastrephidae）和槍形目、閉眼亞目(Myopsida)、槍烏賊科（Loliginidae）動(dòng)物的俗稱[1]，亦稱柔魚(yú)。魷魚(yú)體扁長(zhǎng)，

73、頭腕似佛手狀，肉鰭緊附在尾部?jī)蓚?cè)，形似雙髻，全身均為淺粉色，表面有白霜。主要產(chǎn)于我國(guó)廣東、福建、浙江，產(chǎn)期為7-8月，日本、越南、朝鮮也產(chǎn)。魷魚(yú)是名貴的海產(chǎn)品，富含蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵等，并含有十分豐富的諸如硒、碘、錳、銅等微量元素的食物，對(duì)骨骼發(fā)育和造血十分有益，可預(yù)防貧血。魷魚(yú)除了富含蛋白質(zhì)及人體所需的氨基酸外，還是含有大量?；撬岬囊环N低熱量食品[2]。因此魷魚(yú)是一種優(yōu)質(zhì)的水產(chǎn)品加工原材料。</p><p>　

74、　近10年來(lái)，隨著我國(guó)北太平洋的魷釣業(yè)規(guī)模不斷形成擴(kuò)大，魷魚(yú)的捕撈總量逐年提升，進(jìn)口量也逐年擴(kuò)大。浙江是魷魚(yú)加工大省，僅浙江興業(yè)集團(tuán)有限公司2007年的魷魚(yú)加工量就將近20萬(wàn)噸[3]。然而，我國(guó)魷魚(yú)目前的生產(chǎn)工業(yè)產(chǎn)品層次比較低，主要從事簡(jiǎn)單的來(lái)料加工，如魷魚(yú)絲、魷魚(yú)片、魷魚(yú)段等。原料并未得到充分利用，附加值低，尤其是加工下腳料，多為內(nèi)臟、皮、魷魚(yú)嘴等，其占魷魚(yú)總量的15%-20%，大都加工成魚(yú)粉，部分甚至直接丟棄或掩埋，造成資源浪費(fèi)和環(huán)

75、境污染。因此，有必要對(duì)魷魚(yú)下腳料進(jìn)行新一輪的研究，以提高其附加值，國(guó)內(nèi)外有不少科研院校和企業(yè)單位正在研究和開(kāi)發(fā)魷魚(yú)加工下腳料中的功能活性物質(zhì)，一些新穎的水產(chǎn)加工廢棄物的資源再利用技術(shù)正在得到有效開(kāi)發(fā)。</p><p>　　魷魚(yú)內(nèi)臟占魷魚(yú)濕重的15%左右，其中大部分為肝臟，因其含有可以促進(jìn)魚(yú)蝦攝餌的氨基酸，所以一般加工成魚(yú)蝦飼料[4-5]，而并沒(méi)有充分利用。</p><p>　　魷魚(yú)肝臟含有

76、20%-30%的粗脂肪，郭無(wú)瑕等[6] 系統(tǒng)的地研究了從魷魚(yú)肝臟中提取油脂與精煉魚(yú)油的方法，并證實(shí)精煉后的魷魚(yú)油澄清透明，略顯淡黃色，并有淡淡的魚(yú)腥味，其各項(xiàng)指標(biāo)均符合SC/T3502- 2000魚(yú)油一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上，其用氣相色譜/質(zhì)譜法分析了魷魚(yú)油中脂肪酸的成分。結(jié)果表明，精煉魷魚(yú)油中多不飽和脂肪酸(PUFA)的含量較高(36.5%)，其中C20:5(EPA)和C22:6(DHA)的含量分別為13.1%和20.3%。這與王慶梅等[

77、7]利用氣相色譜法分析魷魚(yú)中脂肪酸的成分得到的結(jié)論基本一致?？梢?jiàn)，魷魚(yú)肝臟是提取EPA和DHA的良好原料。且魷魚(yú)肝臟油由于其不飽和脂肪酸含量高，而在10℃左右的室溫下不凝結(jié)，在醫(yī)藥和飼料工業(yè)中有較廣泛的利用前景 [8]。</p><p>　　將魷魚(yú)肝臟中的大部分粗脂肪提取后的剩余部分，大約占魷魚(yú)肝臟濕重的55%-65%，如果將其丟棄，則會(huì)產(chǎn)生大量的二次廢棄物，而沒(méi)有實(shí)現(xiàn)對(duì)魷魚(yú)內(nèi)臟的充分利用。剩余的魷魚(yú)肝臟其基本營(yíng)

78、養(yǎng)成分是以蛋白質(zhì)為主，如可選取合適的酶將其水解，并對(duì)水解的條件優(yōu)化，對(duì)水解液進(jìn)一步分析利用，則會(huì)是一種方便、快捷且較實(shí)用的再利用方式。</p><p>　　本文對(duì)魷魚(yú)肝臟進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的分析，并選取合適的酶對(duì)其進(jìn)行水解實(shí)驗(yàn)。在溫度、時(shí)間、料液比等單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面技術(shù)對(duì)水解工藝進(jìn)一步優(yōu)化。因?yàn)楦闻K在動(dòng)物體內(nèi)起到排毒、解毒的作用，因此對(duì)其水解液內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的組成及食用安全性進(jìn)行了探討，為進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行高值

79、化利用提供了理論依據(jù)。</p><p><b>　　材料與方法 </b></p><p><b>　　材料</b></p><p>　　ICR小鼠，體重（20±2）g，購(gòu)于浙江省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶購(gòu)于廣西南寧龐博酶制劑有限公司，其它試劑均為分析純，購(gòu)于寧波奧博儀

80、器科技有限公司。</p><p>　　低速大容量離心機(jī)（LXJ-IIB，上海安亭科學(xué)儀器廠），可見(jiàn)分光光度計(jì)（T6新悅，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），電子天平（EL204 Mettler ToLeDo，梅特勒-托利多儀器上海有限公司），電熱恒溫水浴鍋（DKS-26，寧波江南儀器廠），高效液相色譜儀（Agilent 1200，美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品），MARS微波消解儀（Mars5，美國(guó)CEM公司產(chǎn)品），全譜

81、直讀等離子體發(fā)射光譜儀（ICP-AES） （IRIS Intrepid ⅡXSP，美國(guó)Thermo Elemental公司）。</p><p><b>　　方法</b></p><p><b>　　樣品處理</b></p><p>　　將提取出大量魷魚(yú)油的魷魚(yú)肝臟用組織搗碎機(jī)粉碎均勻，待用。</p><

82、p><b>　　營(yíng)養(yǎng)成分分析</b></p><p>　　粗蛋白質(zhì)－凱氏定氮法；粗脂肪含量測(cè)定－索氏提取法；水分含量測(cè)定-105℃恒溫干燥法；灰分－灼燒法[9]。</p><p><b>　　無(wú)機(jī)元素含量測(cè)定</b></p><p>　　消解：精確稱取1g樣品于四氟乙烯消解罐中，加入10mL濃HNO3進(jìn)行消解。消解程

83、序?yàn)椋涸?50℃，600W功率下，消解10min，爬升時(shí)間為15min。</p><p>　　標(biāo)注溶液配置：取8種單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用硝酸（1+3）稀釋成多元素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液后，再用硝酸（1＋19）配制成三個(gè)濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。為避免元素間的化學(xué)干擾和光譜干擾，將8種無(wú)機(jī)元素分為兩組，各種濃度值見(jiàn)表1。</p><p><b>　　表1 混合標(biāo)準(zhǔn)系列</b>&

84、lt;/p><p>　　Tab.1 Mix reference material</p><p><b>　　水解條件優(yōu)化</b></p><p><b>　　酶的選取</b></p><p>　　稱取一定量的樣品，在料液比為1:5，加酶量均在3%，及各種酶的最適溫度及最適pH的條件下水解360min。

85、水解結(jié)束后85℃滅酶15min，4000r/min離心5min后取上清，取1 mL上清液定容到25 mL的容量瓶中，搖勻后測(cè)定其水解度。</p><p><b>　　水解度計(jì)算：</b></p><p>　　DH（%）=已水解的氨基酸態(tài)氮數(shù)/原料中總氮數(shù)×100%=B/A×100%</p><p>　　式中：A 為原料中總氮

86、量（mg/100g），B 為水解后氨基氮量（mg/100g）。</p><p>　　水解后氨基氮量采用甲醛值法，原料中總氮量采用凱氏定氮法測(cè)定[9]。</p><p><b>　　酶的單因素試驗(yàn)</b></p><p>　　選定合適的酶后，選取溫度、時(shí)間、pH、加酶量和料液比做單因素實(shí)驗(yàn)。</p><p><b&g

87、t;　　響應(yīng)面設(shè)計(jì)</b></p><p>　　在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取溫度、時(shí)間和料液比為三個(gè)主要因素的，根據(jù)Box-Benhnken 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，水解度為響應(yīng)值，進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面分析，依據(jù)回歸分析確定各工藝條件的主要影響因素，以水解度為響應(yīng)值做響應(yīng)面和等值線圖[10-11]。</p><p>　　水解液中氨基酸的測(cè)定</p><p>

88、　　樣品用OPA-FMOC法進(jìn)行衍生化，檢測(cè)條件：Hypersil AA-ODS 2.1×200mm×5μm氨基酸柱，進(jìn)樣量2μL，流速為0.45 mL/min，柱溫40℃，后運(yùn)行時(shí)間為2min；流動(dòng)相A為20mmol/L醋酸鈉溶液，pH=7.20±0.05，流動(dòng)相B為醋酸鈉，乙腈，甲醇混合液，體積比為100mmol/L醋酸鈉溶液：乙腈：甲醇=20：40：40，pH=7.20±0.05；FLD檢測(cè)

89、器激發(fā)波長(zhǎng)340nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm，VWD檢測(cè)器波長(zhǎng)為338nm，運(yùn)行在線衍生自動(dòng)進(jìn)樣程序和梯度洗脫。</p><p><b>　　急性毒理實(shí)驗(yàn)</b></p><p><b>　　劑量確定</b></p><p>　　為探討水解液的急性毒性，首先進(jìn)行了小鼠最大耐受量預(yù)實(shí)驗(yàn)，取ICR小鼠20只，體重20g±

90、2g，雌雄各半，隨機(jī)分為2組即空白組及LD50組，空白組每天灌胃蒸餾水一次，每次按體重0.1mL/10g；LD50組小鼠每天灌胃一次水解液原液，每次按體重0.1mL/10g。兩組小數(shù)在灌胃前均禁食不禁水12h，灌胃后兩小時(shí)內(nèi)，觀察各組小鼠狀態(tài)變化，并做記錄。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行7d。</p><p><b>　　毒理實(shí)驗(yàn)</b></p><p>　　預(yù)實(shí)驗(yàn)如未測(cè)出LD50的情況下

91、，進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。取ICR小鼠20只。體重20g±2g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組，即空白組、毒理組。因預(yù)實(shí)驗(yàn)未能測(cè)定出LD50，因此加大毒理組每天的灌胃劑量及灌胃次數(shù)。空白組每天兩次灌胃蒸餾水，每次按體重0.4mL/10g；毒理組小鼠每天灌胃兩次次水解液原液，每次按體重0.4mL/10g。兩組小鼠在灌胃前均禁食不禁水12h，兩次灌胃時(shí)間間隔5h，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行14d[12-14]。</p><p><b>

92、;　　指標(biāo)測(cè)定</b></p><p>　　各組小鼠實(shí)驗(yàn)期間同室分籠飼養(yǎng)，保持衛(wèi)生清潔，光照充足，自由采食飲水，室溫控制在25℃，濕度60%，晝夜交替。兩次實(shí)驗(yàn)均在灌胃后2h內(nèi)觀察狀態(tài)，并隨時(shí)記錄，每天稱量體重。如小鼠在實(shí)驗(yàn)期間死亡，需立即對(duì)尸體進(jìn)行解剖，確定其死因。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，禁食不禁水12h，將小鼠脫臼處死，摘取主要臟器，觀察臟器變化。</p><p><b>　

93、　實(shí)驗(yàn)結(jié)果</b></p><p><b>　　基本營(yíng)養(yǎng)成分</b></p><p>　　魷魚(yú)肝臟的基本營(yíng)養(yǎng)成分中粗蛋白、粗脂肪、灰分和水分含量分別為20.62%、16.99%、1.37%和47.64%。其中粗脂肪含量最高。詳情見(jiàn)表2。</p><p>　　表2魷魚(yú)肝臟基本營(yíng)養(yǎng)成分</p><p>　　Tab

94、. 2 Nutrient content of squid liver</p><p><b>　　無(wú)機(jī)元素含量</b></p><p>　　魷魚(yú)肝臟中，無(wú)機(jī)元素的含量如表3所示。</p><p>　　表3 魷魚(yú)肝臟無(wú)機(jī)元素含量</p><p>　　Tab. 3 Content of inorganic elements

95、 of squid liver</p><p><b>　　不同酶的水解度</b></p><p>　　由圖1可知，在所選取的6種酶（中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶）各自最合適的水解條件下[15-16]，復(fù)合蛋白酶的水解度最高，達(dá)到60.75%，因此選取復(fù)合蛋白酶繼續(xù)進(jìn)行稍后的水解單因素實(shí)驗(yàn)。</p><p&g

96、t;　　圖1 不同種酶的水解度</p><p>　　Fig.1 Degree of hydrolysis of different enzymes</p><p><b>　　酶濃度</b></p><p>　　在料液比為1:5，溫度50℃，pH=7.0，時(shí)間為180min的條件下，通過(guò)改變酶的不同濃度，測(cè)定其對(duì)水解度的影響，結(jié)果如圖2所示，隨

97、著加酶量的不斷添加，水解度不斷增加，當(dāng)達(dá)到5%時(shí)達(dá)到最大的水解度54.66%，稍后隨著加酶量的增加，水解度并沒(méi)有變大的趨勢(shì)，這主要因?yàn)榈孜锏牧坎辉黾?，而僅僅隨著加酶量的增加，導(dǎo)致酶不能與底物結(jié)合，從而導(dǎo)致水解度不增加，不能起到繼續(xù)催化的作用，因此選取加酶量為5%為最適加酶量。</p><p>　　圖2 酶量對(duì)水解度的影響</p><p>　　Fig.2 Effect of enzyme c

98、oncentrations on degree of hydrolysis</p><p><b>　　料液比</b></p><p>　　在溫度50℃，pH=7.0，加酶量為5%，時(shí)間為180min的條件下，通過(guò)改變料液比來(lái)觀察此種因素對(duì)水解度的影響，結(jié)果如圖3所示，在最初隨著料液比的不斷加大的過(guò)程中，水解度也是在不斷加大，但是趨勢(shì)不是很明顯，在1:5時(shí)，達(dá)到最大的

99、水解度55.62%。加大料液比是為了是酶可以更好的接觸底物，從而是酶促反應(yīng)更加安全，但是隨著料液比超過(guò)最佳值，酶與底物濃度的接觸也超過(guò)最優(yōu)化，從而使水解度不能不斷增大，因此選擇1:5的料液比為最佳條件。</p><p>　　圖3 料液比對(duì)水解度的影響</p><p>　　Fig.3 Effect of ratio of material to water on degree of hydr

100、olysis</p><p><b>　　時(shí)間</b></p><p>　　由圖4可知，在料液比1:5，酶濃度5%，pH＝7.0，溫度50℃的條件下，分別水解40min、60 min、80 min、100 min、120 min、140 min，測(cè)定水解度。其結(jié)果如圖9所示，在60min時(shí)水解度達(dá)到57.54%，隨著水解時(shí)間的增長(zhǎng)，水解度并沒(méi)有顯著的增加。可能是時(shí)間的

101、增加使酶失去活性或水解已達(dá)到最大值，從而導(dǎo)致水解度一直保持在相同的水平上。所以本實(shí)驗(yàn)選擇60min為最佳水解時(shí)間。</p><p>　　圖4 時(shí)間對(duì)水解度的影響</p><p>　　Fig.9 Effect of time on degree of hydrolysis</p><p><b>　　溫度</b></p><p

102、>　　在料液比1:5，酶濃度5%，pH＝7.0，水解時(shí)間為60min的條件下，分別在45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃下水解，測(cè)定不同溫度點(diǎn)的水解度，其結(jié)果如圖5所示，隨著溫度的升高，酶在前期仍可以保持較好的活性，酶促反應(yīng)隨著溫度的升高而加快，當(dāng)溫度達(dá)到65℃時(shí)，得出的最高水解度最高為62.48%，隨后隨著溫度的升高，水解度反而下降，可能是隨著溫度的升高，已經(jīng)使酶失去了活性，酶促反應(yīng)開(kāi)始減弱的結(jié)果，因此水解度下

103、降。</p><p>　　圖5 溫度對(duì)水解度的影響</p><p>　　Fig.5 Effect of temperature on degree of hydrolysis</p><p><b>　　pH</b></p><p>　　在料液比1:5，酶濃度5%，溫度65℃，水解時(shí)間60min的條件下，變化不同的pH值

104、，觀察其對(duì)水解度的影響，結(jié)果如圖6所示，隨著pH值的不斷加大，水解度也不斷加大，當(dāng)pH達(dá)到7.5時(shí)，達(dá)到最大的的水解度68.95%，當(dāng)pH繼續(xù)增大時(shí)，水解度呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。因?yàn)槊缸陨碛衅渥钸m的水解pH值，但當(dāng)?shù)孜镒兓瘯r(shí)，不同的底物會(huì)對(duì)環(huán)境pH有所影響，從而導(dǎo)致酶對(duì)最適酶促反應(yīng)的pH有所變化。因此本實(shí)驗(yàn)選取的最適pH值為7.5。</p><p>　　圖6 pH對(duì)水解度的影響</p><p>

105、　　Fig.6 Effect of pH on degree of hydrolysis</p><p><b>　　響應(yīng)面設(shè)計(jì)</b></p><p>　　由單因素實(shí)驗(yàn)我們可以看出，影響魷魚(yú)肝臟水解度的因素有很多，其中溫度、時(shí)間和料液比是三個(gè)主要因素。溫度對(duì)水解度的影響在10%以上，時(shí)間對(duì)水解度的影響在7%左右，料液比對(duì)水解度的影響在9%左右，而其它因素對(duì)水解度的影

106、響相對(duì)這三個(gè)因素較小。因此據(jù)Box-Benhnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，綜合單因素試驗(yàn)所得結(jié)果，選取溫度、時(shí)間、液料比三個(gè)因素，采用三因素三水平的響應(yīng)面分析方法[17]，因素水平設(shè)計(jì)表見(jiàn)表4。</p><p>　　表4 響應(yīng)面分析因素與水平</p><p>　　Tab.4 Factors and levels of test</p><p>　　對(duì)魷魚(yú)肝臟水解條件

107、進(jìn)行響應(yīng)面分析，其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案見(jiàn)表5。</p><p>　　表5 響應(yīng)面分析及結(jié)果</p><p>　　Tab.5 Design scheme and results of test</p><p>　　各因素經(jīng)回歸擬合后，解得回歸方程為：Y=56.74+0.6A+0.5B+0.33C+0.44AB+0.73AC+0.72BC-0.95A2-0.26B2-1.21C

108、2，式中Y為水解度。</p><p>　　從表6中我們可以得出，Prob > F值為0.0187，小于0.05，表明該模型顯著，說(shuō)明此實(shí)驗(yàn)方法可靠，使用該方程模擬真實(shí)的以溫度、時(shí)間和料液比三因素三水平實(shí)驗(yàn)分析可行。從模型ABC的P值我們可以得出，對(duì)水解度影響最大的是料液比，其次是時(shí)間，最后是溫度。從表6中我們也可以得出，這三個(gè)因素對(duì)水解度的影響不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系，而是存在交互作用。</p>&

109、lt;p>　　表6 水解參數(shù)數(shù)學(xué)回歸分析結(jié)果</p><p>　　Tab.6 Results of regression analysis of test</p><p>　　從圖7我們可知，當(dāng)時(shí)間不變時(shí)，隨著料液比的增加水解度升高，但隨著料液比的不斷增大，水解度稍有下降；當(dāng)料液比不變時(shí)，隨著時(shí)間的增加，水解度變大，但隨著時(shí)間的再次增加，水解度稍有下降，結(jié)果與單因素實(shí)驗(yàn)基本相似，當(dāng)時(shí)

110、間為100min左右，料液比為1:5時(shí)達(dá)到最大水解度，且兩因素有交互關(guān)系。原因可能是隨著料液比及時(shí)間的不斷增加，酶與底物接觸先達(dá)到最大值，但隨著料液比的不斷增加，酶與底物濃度不能充分接觸，從而導(dǎo)致酶促反應(yīng)降低，以至水解度的下降。</p><p>　　圖7 時(shí)間和料液比對(duì)水解度的影響</p><p>　　Fig.7 Response surface plot of time and rati

111、o of material to watertime on DH</p><p>　　由圖8可知，當(dāng)溫度不變的情況下，隨著料液比的增加，水解度也隨著加大，但隨著料液比的不斷加大，水解度反而有所下降；當(dāng)料液比不變時(shí)，隨著溫度的增高，水解度隨著變大，但隨著溫度的不斷增高，水解度反而下降。這與所做的單因素實(shí)驗(yàn)相似，當(dāng)溫度65℃，料液比為1:5達(dá)到最大水解度，且兩個(gè)因素有交互關(guān)系。原因可能是隨著溫度的不斷增加，料液比的不