第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

1、第11章 發(fā)酵產(chǎn)物的提取與精制,發(fā)酵產(chǎn)物的提取與精制屬于發(fā)酵工程的下游加工技術(shù)。下游加工亦稱發(fā)酵后處理，是指從發(fā)酵液或酶反應(yīng)中分離純化目的產(chǎn)物并加工成成品的過程。在多數(shù)情況下是從稀的發(fā)酵液中回收目的產(chǎn)物，整個(gè)過程有多項(xiàng)單元操作組成，其中有許多是經(jīng)典的化工單元操作。,9.1 下游加工過程概述,一、下游加工過程的重要性,1. 獲得商業(yè)產(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。,2. 促進(jìn)發(fā)酵工程上游加工技術(shù)或工藝的改進(jìn)。,3. 擁有市場競爭力的重要保證。,二、下

2、游加工工程的一般流程,1. 粗分離階段（1）發(fā)酵液的預(yù)處理和固-液分離。（2）產(chǎn)物的初分離。2.純化精制階段（3）產(chǎn)物的高度純化。（4）成品加工。,,,,預(yù)處理,破碎細(xì)胞,碎片分離,細(xì)胞分離,,精制,成品加工,F發(fā)酵液,,提取,加熱 沉降 均化 離心分離 沉淀 層析 無菌過濾

3、 調(diào)pH 離心分離 研磨 萃取 吸附 離子交換 濃縮 絮凝 過濾 溶胞 超濾 萃取 親和 超濾

4、 膜分離 雙水相萃取 超濾 憎水 冷凍干燥 吸附 噴霧干燥

5、 電泳 結(jié)晶,,發(fā)酵液,,,,,,,,,,,胞外產(chǎn)物,操作步驟減至最少，并盡可能提高各步驟的收率,一、發(fā)酵液的一般特征 1. 含水量高，一般可達(dá)90％～99%，處理體積大。 2. 產(chǎn)品濃度低。 3. 懸浮物顆粒小，密度與液體相差不大。 4.

6、固體粒子可壓縮性大，一壓縮就變形。 5. 液體黏度大，大多為非牛頓型流體。易吸附在濾布上。 6. 產(chǎn)物性質(zhì)不穩(wěn)定，不耐熱、等會酸堿敏感、易被氧化、易被微生物污染及酶分解。,9.2 發(fā)酵液的預(yù)處理與固-液分離,二、發(fā)酵液預(yù)處理的目的和要求1.預(yù)處理的目的 （1）改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)，促進(jìn)懸浮液中分離固形物的速度，提高固液分離器的效率 （2）盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的某一相中（多數(shù)是液體） （3）去除發(fā)

7、酵液中部分雜質(zhì)，以利于后續(xù)各步操作。,2.發(fā)酵液預(yù)處理的要求: （1）菌體的分離 （2）固體懸浮物的去除 （3）蛋白質(zhì)的去除 （4）重金屬離子的去除 （5）色素、熱原質(zhì)、毒性物質(zhì)等有機(jī)雜質(zhì)的去除 （6）改變發(fā)酵液的性質(zhì) （7）調(diào)節(jié)適宜pH值和溫度,三、發(fā)酵液預(yù)處理的方法,1. 降低液體的黏度2. 絮凝法3. 重力法4. 等電點(diǎn)法5. 加入助濾劑6. 繳入反應(yīng)劑,1 降低液

8、體黏度,（1） 加水稀釋法 采用加水稀釋法雖然能降低液體黏度，但是會增加發(fā)酵液的體積，因此加大后續(xù)過程的處理量。 而且稀釋后過濾速率提高的百分比必須大于加水比才算真正有效，即若加水一倍，則稀釋后液體的黏度必須下降50%以上，才能有效提高過濾效率。,（2）加熱法,升高溫度可以降低懸浮液的黏度，除去某些雜蛋白，降低懸浮物的最終體積，破壞凝膠狀結(jié)構(gòu)、增加濾餅的空隙度，提高過濾效率。 不適用熱敏性

9、的物質(zhì)，而且要防止加熱導(dǎo)致細(xì)胞溶解，胞內(nèi)物質(zhì)外溢。,（3）添加酶制劑,比如：加酶將多糖轉(zhuǎn)化為單糖,凝聚是在高價(jià)無機(jī)鹽作用下，由于雙電層排斥電位的降低，而使膠體體系不穩(wěn)定的現(xiàn)象。 絮凝是指在某些高分子絮凝劑存在下，基于架橋作用，使膠粒形成粗大的絮凝團(tuán)的過程，是一種以物理的集合為主的過程。,凝聚和絮凝的概念,擴(kuò)散雙電層的結(jié)構(gòu)模型圖膠粒能保持分散狀態(tài)的原因,2. 凝聚和絮凝法,,凝聚技術(shù),擴(kuò)散雙電層的結(jié)構(gòu)模型圖,凝聚原理：

10、電解質(zhì)將膠體粒子表面上的電荷中和，減少存在于膠體粒子間的靜電斥力，使范德華力占優(yōu)勢，這樣膠體就會凝聚成較大、較密實(shí)的粒子。,膠粒能保持分散狀態(tài)的原因主要是帶有相同電荷和擴(kuò)散雙電層的結(jié)構(gòu)，一旦由于布朗運(yùn)動使粒子間距離縮小到它們的擴(kuò)散層部分重疊時(shí)，即產(chǎn)生使兩個(gè)粒子分開：從而阻止了粒子的聚集。ζ電位越大，電排斥作用就越強(qiáng)，膠粒的分散程度也越大， 此外，由于膠粒表面的水化作用，形成了包圍于粒子周圍的水化層，也能阻礙膠粒間的直接聚集。

11、 但是，水化膜主要是伴隨膠粒帶電而引起的，一旦ζ電位降低或消除，水化層也會隨之減弱或消失。,常用的凝聚劑Al2(SO4)3.18H2O，AlCl3.6H2O，F(xiàn)eCl3，ZnSO4，MgCl2陽離子對負(fù)電荷的膠粒凝聚能力次序?yàn)椋篈l3+>Fe3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+>Na+>Li+,,常用的凝聚方法：在稀溶液中加入電解質(zhì)以促進(jìn)凝聚。試劑包括酸、堿、簡單電解質(zhì)和合成的高

12、分子電解質(zhì)。,絮凝原理：在某些高分子絮凝劑存在下，基于架橋作用，使膠粒形成粗大的絮凝團(tuán)使之更容易過濾。,絮凝劑通過靜電引力、范德華引力或氫鍵的作用，強(qiáng)烈地吸附在膠粒的表面。當(dāng)一個(gè)高分子聚合物的許多鏈節(jié)分別吸附在不同的膠粒表面上，產(chǎn)生橋架連接時(shí)，就形成了較大的絮團(tuán)，這就是絮凝作用。,絮凝劑是一種能溶于水的高分子聚合物，其相對分子質(zhì)量可高達(dá)數(shù)萬至一千萬以上，長鏈狀結(jié)構(gòu)，其鏈節(jié)上含有許多活性官能團(tuán)，包括帶電荷的陰離子（如---COOH）或陽

13、離子（如---NH2）基團(tuán)以及不帶電荷的非離子型基團(tuán)。,常用的絮凝劑：明膠、甲基纖維素、多聚丙烯酸、聚胺衍生物、氯化鈣、磷酸氫二鈉,++,- -,3. 重力法,在工業(yè)上用的較多的主要是離心和過濾. 過濾常用板框真空吸濾或電動篩等，離心和過濾能否順利進(jìn)行取決于很多因素。,一般溫度高，壓力大，發(fā)酵液粘度小，濾布選用適當(dāng)，助溶劑適宜，攪拌都可以提高過濾速度。,4、等電點(diǎn)法,蛋白質(zhì)一般以膠體狀態(tài)存在于發(fā)酵液中。膠體粒子的穩(wěn)定性

14、和其所帶電荷有關(guān)。蛋白質(zhì)在某一pH下，凈電荷為零，溶解度最小，稱為等電點(diǎn)。因此可利用此特性分離或去除良性物質(zhì)。因?yàn)轸然碾婋x度比氨基大，故蛋白質(zhì)的酸性性質(zhì)通常強(qiáng)于堿性，因而很多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)都在酸性范圍內(nèi)（pH 4.0－5.5）。,5、添加助濾劑： 一般為惰性助濾劑：是一種顆粒均勻、質(zhì)地堅(jiān)硬、不可壓縮的粒狀物質(zhì) 作用：助濾劑表面具有吸附膠體的能力，并且由此助濾劑顆粒形成的濾餅具有格子型結(jié)構(gòu)，不可壓縮，濾孔不會被全部

15、堵塞，可以保持良好的滲透性 使用方法（1）：在濾布上預(yù)涂，作為過濾介質(zhì)使用 （2）：按一定比例混入待濾的懸浮液中 常用的助濾劑：硅藻土、膨脹珍珠巖、石棉、纖維素、未活化的碳、爐渣、重質(zhì)碳酸鈣,6、添加反應(yīng)劑： 添加可溶解的鹽類，生成不溶解的沉淀； 生成的沉淀能防止菌絲體粘結(jié)，使菌絲具有塊狀結(jié)構(gòu)； 沉淀本身可作為助濾劑，還能使膠狀物和懸浮物凝固。,,四、

16、發(fā)酵液的相對純化,1.高價(jià)無機(jī)離子的去除（Ca2+、Mg2+、Fe2+等）2.可溶性雜蛋白的去除,高價(jià)無機(jī)離子的存在，會影響樹脂對生化物質(zhì)的交換容量。雜蛋白質(zhì)的存在，不僅在采用離子交換法和大網(wǎng)格樹脂吸附法提煉時(shí)會降低其吸附能力，而且在采用有機(jī)溶劑或兩水相萃取時(shí)，容易產(chǎn)生乳化，使兩相分離不清，在預(yù)處理時(shí)，應(yīng)盡量除去這些物質(zhì)。,1 高價(jià)無機(jī)離子的去除,發(fā)酵液中雜質(zhì)很多，其中對提煉影響最大的是高價(jià)無機(jī)離子（Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋）等

17、。,去除鈣離子：通常使用草酸。但由于草酸溶解度較小，不適合用量較大的場合，可用其可溶性鹽，草酸價(jià)格昂貴，注意回收。去除鎂離子：加入三聚磷酸鈉，與鎂離子形成絡(luò)合物。用磷酸鹽處理，也能大大降低鈣離子和鎂離子的濃度。例如：環(huán)絲氨酸的提取。去除鐵離子：可加入黃血鹽，使其形成普魯士藍(lán)沉淀而除去。,2. 雜蛋白質(zhì)的除去（1）沉淀法 ① 加熱變性 蛋白質(zhì)從有規(guī)則排列變?yōu)椴灰?guī)則結(jié)構(gòu)的過程稱為變性。使蛋白質(zhì)變性的方法有：加熱，調(diào)

18、節(jié)pH，加酒精等有機(jī)溶劑或表面活性劑等 。 在鏈霉素生產(chǎn)中，在pH3.0時(shí)，加熱至70～75℃，維持30min，黏度降為1/6，過濾速度提高3倍。,變性法的局限性：加熱法只適合于對熱較穩(wěn)定的目的產(chǎn)物；極端pH也會導(dǎo)致某些目的產(chǎn)物失活，并且要消耗大量酸堿；而有機(jī)溶劑法通常只適用于所處理的液體數(shù)量較少的場合。,② 加有機(jī)溶劑、表面活性劑、酸堿等 在酸性溶液中，蛋白質(zhì)能與一些陰離子，如三氯乙酸鹽、水楊酸鹽、鎢酸鹽、苦味酸鹽、

19、鞣酸鹽、過氯酸鹽等形成沉淀； 在堿性溶液中，蛋白質(zhì)能與一些陽離子如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。,（2）吸附法 加入某些吸附劑或沉淀劑吸附雜蛋白質(zhì)而除去。 例如：在枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中，加入氯化鈣和磷酸氫二鈉，兩者生成龐大的凝膠，把蛋白質(zhì)、菌體及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，從而可加快過濾速率。,9.3 固-液分離過程及設(shè)備簡介,意義：固-液分離過程下游加工的重要環(huán)節(jié)，用于

20、發(fā)酵液的預(yù)處理和生物產(chǎn)品的純化、精制等環(huán)節(jié)。,方法：常用的方法有過濾、離心。此外還有膜分離、雙水相萃取和擴(kuò)張床吸附等方法。,影響發(fā)酵液固-液分離的主要因素：菌體的大小、形狀及發(fā)酵液的黏度，還有發(fā)酵液的溫度、pH值、加熱時(shí)間等。,目的：收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體，分離除去液相，或者是收集含生化物質(zhì)的液相，分離除去固體懸浮物，如細(xì)胞、菌體、細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)的沉淀物和它們的絮凝體等。,1. 過濾,定義：用過濾介質(zhì)將懸液中的固形顆粒與液體分離的過

21、程。,常用的過濾方式：加壓過濾和真空過濾,典型設(shè)備主要有：板框壓濾機(jī)和鼓式真空過濾機(jī),（1）板框過濾機(jī),板框壓濾機(jī)由壓濾機(jī)濾板、液壓系統(tǒng)、壓濾機(jī)框、濾板傳輸系統(tǒng)和電氣系統(tǒng)等五大部分組成。,真空轉(zhuǎn)鼓過濾機(jī),優(yōu)點(diǎn)： 真空轉(zhuǎn)鼓過濾機(jī)具有自動化程度高、操作連續(xù)、處理量大。特別適合固體含量大（>10％）的懸浮液的分離，在發(fā)酵工業(yè)中廣泛用于霉菌、放線菌和酵母發(fā)酵液或細(xì)胞懸浮液的過濾分離。缺點(diǎn)： 由于受真空度的限制，不適于菌體

22、較小和粘度較大的細(xì)菌發(fā)酵液的過濾，且過濾所得固相的干度不如加壓過濾。,2、離心,定義： 基于固體顆粒和周圍液體密度存在差異，在離心場中使不同密度的固體顆粒加速沉降的分離過程。,離心分離方法,(1)差速離心—工業(yè)上最常用的離心分離方法,定義：在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器。對象：混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大的組分。,速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀,原理：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成

23、一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。分類：1）移動區(qū)帶離心 2）等密度離心常用密度梯度物質(zhì)：蔗糖、甘油、CsCl、NaBr,(2)密度梯度離心—多用于生化研究,1）移動區(qū)帶離心,含幾個(gè)組分的樣品在足夠高的離心場中離心時(shí)，每種顆粒都達(dá)到其最大沉降速度，這時(shí)樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應(yīng)于樣品各組分的一系列濃度界

24、面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。 用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。此法所采用的介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。,2）等密度離心,細(xì)胞或細(xì)胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力和夠長時(shí)間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在該層達(dá)到平衡，從而將不同密度的細(xì)胞或細(xì)胞器分離。,離心機(jī)分類,,制備性離心機(jī),分析性離心機(jī)：超速離心機(jī),,普通離心機(jī),,高速冷凍離心機(jī),超速離心機(jī),實(shí)驗(yàn)型離心機(jī),

25、工業(yè)型離心機(jī),,碟片式離心機(jī)是傳統(tǒng)離心機(jī)，為目前工業(yè)上應(yīng)用最廣泛的離心機(jī)。分離因數(shù)可達(dá)1000-20000，最大處理量達(dá)到300m3/h，常用于大規(guī)模的分離過程。適用范圍 細(xì)菌、酵母菌、放線菌、細(xì)胞碎片。,管式離心機(jī)管式離心機(jī)是一種分離效率很高的離心分離設(shè)備，其轉(zhuǎn)鼓細(xì)長，可在15000-50000的高轉(zhuǎn)速下工作，分離因數(shù)可達(dá)104-6×105。它設(shè)備簡單、操作穩(wěn)定。適用范圍細(xì)胞、細(xì)胞碎片、細(xì)胞器、病毒、蛋白質(zhì)、

26、核酸等。,3. 其他固-液分離方法,（1）膜分離：利用不同組分通過膜的傳遞速度不同而得以 分離的方法,（2）雙水相萃取：利用不同組分在雙水相分配系數(shù)不同進(jìn) 行分離方法。,（3）擴(kuò)張床吸附：將固-液分離合目的產(chǎn)物吸附合并成一步進(jìn)行的一種分離方法。,11.4 微生物細(xì)胞的破碎,微生物的代謝產(chǎn)物如果是胞內(nèi)物質(zhì)（如有些

27、酶制劑、干擾素、胰島素等），那么首先要收集菌體，進(jìn)行細(xì)胞破碎。,1. 微生物細(xì)胞壁的組成與結(jié)構(gòu)：（1）細(xì)菌細(xì)胞壁：（2）酵母菌細(xì)胞壁比G+菌稍厚，主要成分是葡聚糖、甘露聚糖和蛋白質(zhì)等。（3）其他真菌細(xì)胞壁主要由多糖組成，如幾丁質(zhì)或纖維素強(qiáng)度比細(xì)菌和酵母菌高。,2. 常用的細(xì)胞破碎方法,細(xì)胞破碎的方法很多，根據(jù)外加作用力的方式可分為機(jī)械法和非機(jī)械法兩大類。亦可按所用方法的屬性分為物理法、化學(xué)法和生物法三類。物理破碎法：高壓勻漿法、

28、擠壓法、高速珠磨法、超聲波法；化學(xué)破碎法：滲透沖擊法、增溶法。生物破碎法：酶溶法,細(xì)胞破碎機(jī)理圖,,11. 5 濃縮技術(shù),濃縮過程是發(fā)酵工業(yè)提取與精制過程常用的單元操作。濃縮的目的是將低溶質(zhì)濃度的溶液通過除去溶質(zhì)變?yōu)楦呷苜|(zhì)濃度的溶液。它廣泛用于有機(jī)酸、氨基酸、核苷酸、酶制劑及抗生素等發(fā)酵工業(yè)產(chǎn)品的提取分離過程。常用的濃縮技術(shù)有蒸發(fā)濃縮法、冷凍干燥法、吸收濃縮法。,（1）蒸發(fā)濃縮法,蒸發(fā)濃縮法概念及原理,,蒸發(fā)是工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)過程中常

29、用的發(fā)酵產(chǎn)品濃縮方法之一。蒸發(fā)的目的是使溶液中的溶劑在一定的溫度和壓力下加熱后汽化除去，從而提高溶液中溶質(zhì)的濃度。這里所指的溶液是由不揮發(fā)的溶質(zhì)與液體溶劑所組成，蒸發(fā)過程只有溶劑汽化而溶質(zhì)不汽化。,蒸發(fā)濃縮裝置的設(shè)計(jì),,蒸發(fā)是溶液表面的溶劑分子獲得的動能超過了溶液內(nèi)溶劑分子間的吸引力脫離液面進(jìn)入空間的過程。蒸發(fā)快慢與溫度、蒸發(fā)面積及液面蒸汽分子密度等因素有關(guān)。因此，蒸發(fā)濃縮裝置常按照加熱、擴(kuò)大液體表面積、減壓、和加速空氣流動等因素而設(shè)計(jì)

30、,蒸發(fā)濃縮裝置的分類,,常用的蒸發(fā)濃縮過程可分為常壓蒸發(fā)濃縮和真空減壓蒸發(fā)濃縮過程。按照結(jié)構(gòu)型式不同，常壓蒸發(fā)設(shè)備有中央循環(huán)管式蒸發(fā)器、橫管式蒸發(fā)器、夾套式蒸發(fā)器、夾套帶攪拌外循環(huán)蒸發(fā)器、強(qiáng)制循環(huán)蒸發(fā)器等.真空減壓蒸發(fā)設(shè)備根據(jù)二次蒸氣的利用的情況，可分為單效蒸發(fā)和多效蒸發(fā)。,,分子蒸餾,,分子蒸餾克服了傳統(tǒng)蒸餾操作溫度高，受熱時(shí)間長等缺點(diǎn)，可解決大量傳統(tǒng)蒸餾無法解決的工業(yè)化難題，尤其適用于目標(biāo)產(chǎn)物與雜質(zhì)之間沸點(diǎn)相差較大的物質(zhì)的分離。

31、 分子蒸餾的原理是根據(jù)分子運(yùn)動理論，液體混合物的分子受熱后運(yùn)動會加劇，當(dāng)接受到足夠能量后，就會從液體溢出而成為氣相分子。,2、冷凍濃縮法,,冷凍濃縮法：是工業(yè)發(fā)酵中生物大分子和具有生理活性的發(fā)酵產(chǎn)品濃縮常用的一種有效方法。,,冷凍濃縮法原理：在冷凍時(shí)水分結(jié)成冰，鹽類及發(fā)酵產(chǎn)品不進(jìn)入冰內(nèi)而留在冰外，濃縮時(shí)先將待濃縮的溶液冷凍使之變成固態(tài)，然后緩慢的融解，利用溶劑與溶質(zhì)熔點(diǎn)的差別而達(dá)到除去大部分溶劑的目的。如酶制劑和蛋白質(zhì)。,3 吸收濃縮

32、法,,吸收濃縮法：是一種通過吸收劑直接吸收出去溶液中溶劑分子使溶液濃縮的方法。,,應(yīng)用吸收濃縮法時(shí)要求吸收劑不與溶液起化學(xué)反應(yīng)，而且對大分子類的發(fā)酵產(chǎn)品不起吸收作用，易于溶液分開，吸收劑除去溶劑后能重復(fù)使用。,11.6 沉淀技術(shù),定義：通過改變條件或加入某種試劑，使發(fā)酵產(chǎn)物離開溶液，生成不溶性顆粒而沉降析出的過程。,作用：濃縮作用大于純化作用，是初步分離的一種手段。,優(yōu)點(diǎn)：沉淀法具有設(shè)備簡單、成本低、原料易得、收率高、濃縮倍數(shù)高和操

33、作簡單等優(yōu)點(diǎn)。,缺點(diǎn)：于過濾困難、產(chǎn)品質(zhì)量較低、需要重新精制。,1. 鹽析,原理：高濃度中性鹽存在下，使生物分子在水溶液中溶解的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀的方法，多用于蛋白質(zhì)（酶）的分離。,常用的鹽類是硫酸銨。,優(yōu)點(diǎn)： ①成本低，不需要特別昂貴的設(shè)備。 ②操作簡單、安全。 ③對許多生物活性物質(zhì)具有穩(wěn)定作用。,（1）鹽析機(jī)制,①鹽溶：[鹽]低時(shí)，S（蛋白質(zhì)的溶解度）隨[鹽]增加而增加；②鹽析：[鹽]高時(shí)，S

34、（蛋白質(zhì)的溶解度）隨[鹽]增加而降低；,（2）溶解度與鹽濃度的關(guān)系可用下式表示： log S=β－KS·I S：蛋白質(zhì)的溶解度； I：離子強(qiáng)度； β：常數(shù)，與蛋白質(zhì)種類有關(guān)，與鹽的種類無關(guān)； KS ：鹽析常數(shù)，與鹽種類有關(guān)，與溫度和pH無關(guān)；,①鹽的種類：影響KS，

35、KS越大，效果越好② 溶質(zhì)的起始濃度③ 鹽析劑用量④溫度和pH：影響β值而影響S。尤其是影響相對溶解度⑤雜質(zhì),（3）影響鹽析的因素,2. 等電點(diǎn)沉淀,原理：利用兩性電解質(zhì)在在低離子強(qiáng)度下，調(diào)節(jié)至等電點(diǎn)，可使各種兩性電解質(zhì)所帶凈電荷為零，能大大降低其溶解度，形成沉淀。,不同的兩性電解質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，從而將其分離開。,優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，試劑消耗少，引入雜質(zhì)少。,缺點(diǎn): 不能完全沉淀析出，常與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀劑一起配

36、合使用，以提高沉淀能力和分離效果。,應(yīng)用：主要用于在分離純化流程中去除雜蛋白，而不用于沉淀目的物。,等電點(diǎn)操作時(shí)要注意： ①溶液中離子的種類和濃度對生物分子等電點(diǎn)的影響。 ②等電點(diǎn)附近的鹽溶作用 ③目的產(chǎn)物的不穩(wěn)定性。,等電點(diǎn)鋅鹽法,3. 有機(jī)溶劑沉淀,定義：于水互溶的有機(jī)溶劑（乙醇、丙酮等）能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低。多用于生物小分子、多糖、核酸和蛋白質(zhì)等產(chǎn)品的提取。,機(jī)理：降低溶液的介電常數(shù)，因?yàn)榉肿娱g的靜電

37、引力和溶劑的介電常數(shù)成反比，加入有機(jī)溶劑，蛋白質(zhì)分子間的引力增加，溶解度降低。,常用有機(jī)溶劑：乙醇、甲醇、丙酮等。,缺點(diǎn)：容易引起蛋白質(zhì)變性失活，并且有機(jī)溶劑易燃、易爆，對安全要求較高。,優(yōu)點(diǎn)：①分辨能力比鹽析法高，一種溶質(zhì)只在一個(gè)比較窄的有機(jī)溶劑范圍內(nèi)沉淀；②沉淀不需脫鹽；③有機(jī)溶劑密度低，與沉淀物密度差大，容易進(jìn)行固液分離；④有機(jī)溶劑容易蒸發(fā)，不會在成品中殘留，適用于食品、藥品的制備。,4. 非離子型多聚物沉淀,定義：水溶性

38、的非離子多聚物如聚乙二醇（PEG）、葡聚糖右旋糖酐硫酸鈉等，可用于沉淀分離蛋白質(zhì)（尤其是不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)）、DNA和RNA等。。,機(jī)制：多聚物與有機(jī)溶劑相似，能降低水化度使蛋白質(zhì)沉淀；與大分子形成復(fù)合物，發(fā)生共沉淀作用等,應(yīng)用最多的是PEG。,優(yōu)點(diǎn)：其操作條件溫和，不易引起生物大分子的變性，沉淀效能高，很少量的沉淀劑就可以使相當(dāng)多的生物大分子沉淀，且沉淀后的多聚物也容易除去，無毒、不可燃，對大多數(shù)蛋白質(zhì)有保護(hù)作用。,應(yīng)用：廣泛用于蛋白質(zhì)、

39、核酸、細(xì)菌和病毒等的分離純化。,11.7 萃取分離技術(shù),定義：利用不同物質(zhì)在選定溶劑中具有不同的溶解度的原理來進(jìn)行不同物質(zhì)的分離純化。,優(yōu)點(diǎn)：①選擇性好，分離效果好； ②對熱敏性物質(zhì)破壞小，且耗能低； ③生產(chǎn)能力大，周期短； ④便于連續(xù)操作，容易實(shí)現(xiàn)自動化控制等。,應(yīng)用：適用于抗生素等小分子物質(zhì)的分離純化,定義：是利用萃取目標(biāo)物質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度的不同

40、，使其從一種溶劑轉(zhuǎn)入另一種溶劑從而實(shí)現(xiàn)分離。,1. 溶劑萃取,在溶劑萃取中，被提取的溶液稱為料液，從料液中提取出來的物質(zhì)稱為溶質(zhì)，用來進(jìn)行萃取的溶劑稱為萃取劑，溶質(zhì)轉(zhuǎn)移到萃取劑中與萃取劑形成的溶液為萃取液，被萃取出溶質(zhì)的料液稱為萃余液。,（1）生產(chǎn)中萃取操作一般應(yīng)包括下面三個(gè)過程 ① 混合——料液和萃取劑密切接觸； ② 分離——萃取相與萃余相分離； ③ 溶劑回收——萃取劑從萃取相(有時(shí)也需從萃余相)中除去，并

41、加以回收。,萃取操作流程分為單級萃取和多級萃取，多級萃取又分為多級錯流萃取和多級逆流萃取。,（2）溶劑的選擇,萃取用的有機(jī)溶劑應(yīng)對產(chǎn)物有較大的溶解度和良好的選擇性。遵循一個(gè)簡單的規(guī)律：“相似物容易溶解在相似物中”，即分子的極性。極性液體互相混和并溶解鹽類和極性固體，而非極性化合物溶劑是低極性或沒有極性的液體。,選擇溶劑時(shí)還應(yīng)注意： ①與料液的互溶度應(yīng)盡可能??； ②毒性低； ③化學(xué)穩(wěn)定性高，腐蝕性低，揮發(fā)性

42、?。?④價(jià)格便宜，來源方便，便于回收。,工業(yè)上常用的溶劑：乙酸乙酯、乙酸戊酯和丁酯等。,（3）水相條件的影響,① pH值：直接影響表觀分配系數(shù)。另外對選擇性有影響。 ② 溫度：溫度會影響生化物質(zhì)的穩(wěn)定性，所以一般在室溫或低溫下進(jìn)行。同時(shí)影響分配系數(shù)K和萃取的速度。③ 鹽析：硫酸銨、氯化鈉等可降低產(chǎn)物在水中的溶解度，還能減小有機(jī)溶劑在水相中的溶解度。④ 帶溶劑：能和產(chǎn)物形成復(fù)合物，使產(chǎn)物更易溶于有機(jī)溶劑相中，提高分配系數(shù)。

43、,（4）乳化和去乳化,定義：乳化是一種液體(分散相)分散在另一種不相混溶的液體(連續(xù)相)中的現(xiàn)象。,害處：乳化產(chǎn)生后會使有機(jī)溶劑相和水相分層困難，產(chǎn)生乳化后使有機(jī)相和水相分層困難，,原因：是發(fā)酵液中存在的蛋白質(zhì)和固體顆粒等物質(zhì)，這些物質(zhì)具有表面活劑性的作用，使有機(jī)溶劑和水的表面張力降低，水易于以微小液滴的形式分散于油相稱為油包水型W/O乳濁液；相反，為O/W型乳濁液。,① 乳化,方法： a. 過濾或離心分離破乳法； b. 化學(xué)法：加

44、電解質(zhì)中和離子型乳油液的電荷； c. 物理法：加熱、稀釋、吸附等； d. 頂替法：加入表面活性更大，但因其碳鏈較短難以形成堅(jiān)固的保護(hù)膜的物質(zhì)，取代界面上的乳化劑； e. 轉(zhuǎn)型法：如在O/W中加入親油性乳化刑，使乳化液有生成W/O的傾向，但又不穩(wěn)定，從而達(dá)到破乳目的。最好的方法是防止乳化，如蛋白質(zhì)是乳化起因，就應(yīng)設(shè)法去除蛋白質(zhì)。,,②去乳化：破壞乳濁液,（5）萃取的方式,根據(jù)混合- 分離的操作方式，可以分為單級萃取和多級萃取。,

45、①單級萃?。褐皇褂靡粋€(gè)混合器和一個(gè)分離器的萃取。 特點(diǎn)：流程最簡單，單收率不高。,②多級錯流萃取：每級都加入新鮮萃取溶劑，溶劑消耗多，萃取液產(chǎn)物平均濃度較稀，但萃取較完全。,多級錯流萃?。‵料液；S溶劑；L萃取液；R萃余液）,③多級逆流萃?。毫弦鹤呦蚺c萃取走向相反，萃取劑只在最后一級加入，萃取劑消耗少，萃取液產(chǎn)物平均濃度高，產(chǎn)物收率最高。,多級逆流萃取 （F料液；S溶劑；L萃取液；R萃余液）,2. 雙水相萃取法,

46、定義：利用物質(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異來進(jìn)行萃取的方法。,（1）雙水相形成,大多數(shù)親水性聚合物水溶液與第二種親水性聚合物混合，達(dá)到一定濃度時(shí)，會產(chǎn)生兩相，兩種高聚物分別溶于互不相溶的兩相中。,高聚物之間的不相溶性，使得它們無法相互滲透，不能形成均一相，從而具有相分離的傾向，在一定條件下，即能分為兩相。,聚合物與鹽類溶液也能形成兩相。,（2）影響雙水相分配的因素,① 成相聚合物的相對分子質(zhì)量② 成相聚合物的濃度③ 鹽的種類和

47、濃度④ pH⑤ 溫度,（3）雙水相萃取的應(yīng)用,可用于分離和純化酶、核酸、生長素、病毒、干擾素等。,常用的雙水相系統(tǒng)為聚乙二醇/葡聚糖和聚乙二醇/無機(jī)鹽，后者中聚乙二醇/硫酸鹽或磷酸鹽系統(tǒng)最為常用。,①目的分子與雜質(zhì)（如細(xì)胞等）應(yīng)分配在不同的相。②分配系數(shù)應(yīng)足夠大。③容易離心分離。,（4）兩水相分離條件,3. 反膠團(tuán)萃取,定義：利用表面活性劑在有機(jī)溶劑中自發(fā)形成的內(nèi)含親水微環(huán)境的反膠團(tuán)，使生物分子溶于此親水微環(huán)境，進(jìn)而進(jìn)行萃取的分

48、離方法。,若將表面活性劑溶于非極性的有機(jī)溶劑中，并使其濃度超過某一臨界濃度，便會在有機(jī)溶劑內(nèi)形成聚集體，稱為反膠束，,在反膠束中，表面活性劑的非極性基團(tuán)在外與非極性的有機(jī)溶劑接觸，而極性基團(tuán)則排列在內(nèi)形成一個(gè)極性核。此極性核具有溶解極性物質(zhì)的能力，極性核溶解于水后，就形成了“水池”。,反相膠團(tuán)萃取的優(yōu)點(diǎn)：,①成本低②選擇性高③操作方便④放大容易⑤萃取劑 (反膠團(tuán)相 )可循環(huán)利用⑥蛋白質(zhì)不易變性等優(yōu)點(diǎn)。,4. 超臨界流體萃取,定

49、義：是將超臨界流體作為萃取劑，從固體或液體中萃取出某些高沸點(diǎn)或熱敏性成分，達(dá)到分離和提純目的。,超臨界流體是物質(zhì)處于臨界溫度、臨界壓力之上的一種流體狀態(tài)，具有氣體和液體雙重，即密度接近液體，而黏度與氣體相似，擴(kuò)散系數(shù)約比液體大100倍。不僅具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)妮腿∧芰?，而且具有傳質(zhì)擴(kuò)散速度快的優(yōu)點(diǎn)。,①具有較高的擴(kuò)散性，從而減小了傳質(zhì)阻力，這對多孔疏松的固態(tài)物質(zhì)和細(xì)胞材料中的化合物的萃取特別有利。②對改變操作條件(如壓力、溫度)特別敏

50、感，這就提供了操作上的靈活性和可調(diào)性。③具有低的化學(xué)活性和毒性。,（1）超臨界流體具有以下特點(diǎn)：,超臨界CO2成為目前最常用的萃取劑，它具有以下特點(diǎn)： 1. CO2臨界溫度為31.1℃，臨界壓力為7.2MPa，臨界條件容易達(dá)到。 2. CO2化學(xué)性質(zhì)不活波，無色無味無毒，安全性好。 3. 價(jià)格便宜，純度高，容易獲得。因此，CO2特別適合天然產(chǎn)物有效成分的提取。,（2）超臨界CO2的特點(diǎn)：,（3）應(yīng)用

51、,超臨界萃取技術(shù)具有低能耗。無污染和適用于分離易受熱分解的高沸點(diǎn)物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)。最適用于分離價(jià)值高、難于用常規(guī)方法分離的生物化合物。除了用在化工、醫(yī)藥等行業(yè)外，還可用在煙草、香料、食品等方面。,超臨界流體萃取過程由萃取階段與分離階段組成分離,（4）超臨界萃取典型流程,①等溫法：等溫條件下，萃取相減壓、膨脹，溶質(zhì)從分離槽下部取出。氣體經(jīng)壓縮機(jī)加壓后返回萃取槽。②等壓法：等壓條件下，萃取相加熱、升溫，氣體和溶質(zhì)分離。溶質(zhì)從分離槽下部取出，

52、氣體冷卻、壓縮后回到萃取槽。③吸附法：溶質(zhì)被分離槽中的吸附劑吸附，氣體壓縮后回到分離槽。,等溫法（T1=T2，P1＞P2）,等壓法（T1＜T2，P1=P2）,吸附法（T1=T2，P1=P2）,11.8 膜分離法,定義：是物質(zhì)通過膜的傳遞速度不同而得到分離。,優(yōu)點(diǎn)：過程一般較簡單，操作方便，費(fèi)用較低，效率較高，無相變，可在常溫下操作，既節(jié)能又特別適用于熱敏性物質(zhì)的分離純化，便于維修，有利于生產(chǎn)自動化的推廣與普及。,1、膜分離

53、特點(diǎn)  ※ 膜的種類、孔徑可以根據(jù)需要選擇   ※ 膜對于阻止大的粒子或分子透過的能力很強(qiáng) ※ 把產(chǎn)物分在兩側(cè)，很容易收集樣品 ※ 節(jié)能、環(huán)保,膜的特性及分離原理,所謂的膜，是指在一種流體相內(nèi)或是在兩種流體相之間有一層薄的凝聚相，它把流體相分隔為互不相通的兩部分，并能使這兩部分之間產(chǎn)生傳質(zhì)作用。 膜的特性：◆ 不管膜多薄, 它必須有兩個(gè)界面。這兩個(gè)界面分別與兩側(cè)的流體相接觸◆ 膜傳

54、質(zhì)有選擇性，它可以使流體相中的一種或幾種物質(zhì)透過，而不允許其它物質(zhì)透過。,,膜分離過程原理：以選擇性透膜為分離介質(zhì)，通過在膜兩邊施加一個(gè)推動力（如濃度差、壓力差或電壓差等）時(shí)，使原料側(cè)組分選擇性地透過膜，以達(dá)到分離提純的目的。通常膜原料側(cè)稱為膜上游，透過側(cè)稱為膜下游。,膜上游 透膜 膜下游,分離膜種類,分離膜,膜分離的物理化學(xué)原理,截流機(jī)理和篩孔效應(yīng)滲透和滲透壓 Donnan效應(yīng),機(jī)械

55、截留（篩孔效應(yīng)） 物理作用或吸附截留架橋作用網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部截流,,2. 膜分離方法的分類,透析超濾反滲透微濾電滲析液膜技術(shù)氣體滲透滲透蒸發(fā),,（1）微濾：微孔過濾，利用孔徑0.025µm~14µm的多孔膜，過濾含有微粒的溶液，將微粒從溶液中除去，達(dá)到凈化、分離和濃縮的目的。推動力為壓力差，通常為0.1MPa~0.5MPa。（2）超濾：濾膜孔徑為lnm~20nm，用于過濾含有微粒和大分子的溶液。以壓力差

56、為推動力，通常為0.1MPa~0.6MPa。,（3）反滲透：用反滲透膜(孔徑0.1nm~1nm)，對溶液施加壓力，使溶劑通過反滲透膜，截留所有可溶物而得到分離的操作。反滲透也是以壓力差為推動力，操作壓達(dá)3MPa~10MPa。,,3. 膜的材料、結(jié)構(gòu)和性能參數(shù),膜的要求：透過速度大，選擇性高，非特異性吸附低，機(jī)械強(qiáng)度好，不易被微生物侵襲，耐熱、可高溫滅菌，耐化學(xué)試劑，廉價(jià)等。,（1）制膜的材料,種類：天然高分子材料、合成高分子材料和特殊材

57、料。,實(shí)際應(yīng)用中，目前以纖維素膜和聚砜膜使用最廣。,（2）表征膜性能的參數(shù),①孔徑的性質(zhì)(包括孔徑、孔徑分布和孔隙度)②水通量③截留率和截?cái)喾肿恿竣芸箟耗芰Β輕H適用范圍⑥對熱和溶劑的穩(wěn)定性。,4. 膜的污染與清洗,污染：膜在使用中，盡管操作條件保持不變，但通量仍逐漸降低的現(xiàn)象。原因：膜與料液中某一溶質(zhì)的相互作用，或吸附在膜上的溶質(zhì)和其它溶質(zhì)的相互作用而引起的。,（1）膜的污染,②膜的清洗方法 a. 機(jī)械方法：加海綿球，增

58、大流速，逆洗（對中空纖維超濾器），脈沖流動，超聲波等。 b. 化學(xué)方法：水、鹽溶液、稀酸、稀堿、表面活性劑、螯合劑、過氧化氫、酶溶液等清洗劑。,（2）膜的清洗,①減輕膜污染的方法 a. 對料液進(jìn)行預(yù)處理 b. 制模時(shí)改變膜的表面極性和電荷,（3）過濾方式與裝置,膜過濾的方式有常規(guī)過濾和切向過濾兩種。,膜分離設(shè)備： 平板式膜器 管式膜器 螺旋卷式膜器

59、 中空纖維膜器,（4）膜分離技術(shù)的應(yīng)用：,①菌體、細(xì)胞的分離和收集；②小分子產(chǎn)物的純化，如抗生素、檸檬酸等；③大分子產(chǎn)物的純化，主要是酶制劑等；④純水的制備；⑤純凈水和最終制品中的除菌和除熱源。⑥作膜反應(yīng)器中的分離部件。,11.9 吸附分離技術(shù),定義：利用不同組分（溶質(zhì)）在吸附劑表面吸附和解吸能力的差異進(jìn)行分離的方法,脫附：吸附的逆過程,吸附過程通常包括：待分離料液與吸附劑混合、吸附質(zhì)被吸附到吸附劑表面、料

60、液流出、吸附質(zhì)解吸回收等四個(gè)過程。,常用于從稀溶液中將溶質(zhì)分離出來，由于受固體吸附劑的限制，處理能力較小；對溶質(zhì)的作用較小，這一點(diǎn)在蛋白質(zhì)分離中特別重要；可直接從發(fā)酵液中分離所需的產(chǎn)物，成為發(fā)酵與分離的耦合過程，從而可消除某些產(chǎn)物對微生物的抑制作用；溶質(zhì)和吸附劑之間的相互作用及吸附平衡關(guān)系通常是非線性關(guān)系，故設(shè)計(jì)比較復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)的工作量較大。,1. 吸附法的特點(diǎn)：,優(yōu)點(diǎn)：有機(jī)溶劑摻入少 操作簡便，安全，設(shè)備簡單 pH變化小，適

61、于穩(wěn)定性差的物質(zhì),缺點(diǎn)：選擇性差收率低無機(jī)吸附劑性能不穩(wěn)定不能連續(xù)操作，勞動強(qiáng)度大碳粉等吸附劑有粉塵污染,2. 吸附機(jī)理,固體的表面性質(zhì)——固體表面分子（或原子）所處的狀態(tài)與固體內(nèi)部分子（或原子）所處的狀態(tài)不同。,固體表面分子(或原子)處于特殊的狀態(tài)。固體內(nèi)部分子所受的力是對稱的，故彼此處于平衡。但在界面分子的力場是不飽和的，即存在一種固體的表面力，它能從外界吸附分子、原子、或離子，并在吸附表面上形成多分子層或單分子層。,實(shí)際

62、過程中物理和化學(xué)吸附是主要的，比較如下,2. 吸附的類型：,（1）疏水或非極性吸附劑,（2）親水和極性吸附劑,（3）各種離子交換劑,多孔型：活性炭、硅膠、硅藻土；大網(wǎng)格吸附劑：有機(jī)高分子材料，如聚苯乙烯，聚酯。凝膠型：纖維素凝膠，瓊脂糖凝膠，匍聚糖凝膠等。,吸附分離介質(zhì),（1）吸附樹脂指的是一類高分子聚合物。常用的有聚苯乙烯樹脂和聚丙烯酸酯樹脂等。吸附樹脂品種很多，單體的變化和單體上官能團(tuán)的變化賦予樹脂以各種特殊的性能。（2）吸附

63、樹脂分為非極性、中極性、極性及強(qiáng)極性四類。（3）吸附樹脂可用于除去廢水中的有機(jī)物，糖液脫色，天然產(chǎn)物和生物化學(xué)制品的分離與精制等。,吸附樹脂,1)組成結(jié)構(gòu)：有機(jī)高分子聚合物的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)2)特點(diǎn)：選擇性好；解吸容易；機(jī)械強(qiáng)度好；流體阻力較?。粌r(jià)格高3）類型：非極性吸附劑——芳香族（苯乙烯等） 中等極性吸附劑——脂肪族（甲基丙烯酸酯等） 極性吸附劑——含硫氧、酰氨、氮氧等基團(tuán),吸附, 沖洗 和 洗脫,,,,,

64、,,,,,,,時(shí)間/體積,y,,,吸附,沖洗,洗脫,,吸附過程的影響因素,1. 吸附劑的特性（組成結(jié)構(gòu)、容量、穩(wěn)定性 ）2. 吸附物的性質(zhì)（熔點(diǎn)、締合、離解、氫鍵等）3. 溶劑（單、混合）4.吸附操作條件1）溫度2）pH值3）鹽的濃度,應(yīng)用： 大孔吸附樹脂廣泛應(yīng)用于制藥及天然植物中活性成分如皂甙、黃酮、內(nèi)脂、生物堿等大分子化合物的提取分離。 對人參皂甙、三七皂甙、淫羊藿黃酮、大豆異黃酮、茶多酚、洋地黃強(qiáng)心甙、麻黃

65、精粉、柚甙、紅豆杉生物堿、多種天然色素、中藥復(fù)方藥物提取等以及生物化學(xué)制品的凈化、分離、回收都有良好的效果。 并在抗生素、維生素、氨基酸、蛋白質(zhì)提純，生化制藥方面有很廣泛的應(yīng)用。,11.10 離子交換層析技術(shù),定義：利用離子交換劑上的可交換離子與周圍介質(zhì)中被分離的各種離子間的親和力不同，經(jīng)過交換平衡達(dá)到分離的目的的一種柱層析法。在以離子交換劑為固定相，液體為流動相的系統(tǒng)中進(jìn)行。 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，重復(fù)性、選擇性好，分析速度快等

66、優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)前最常用的層析法之一。,（1）離子交換劑的組成結(jié)構(gòu)及其特性,（2）離子交換樹脂的形狀結(jié)構(gòu)示意圖,,示意圖（離子交換過程）,,電離基團(tuán)（磺酸根）,可交換離子（鈉離子）,交換離子,不交換離子,,三、離子交換柱層析原理示意圖,,,,,,,,,柱層析系統(tǒng)的組裝,線性和階梯式梯度溶液分離牛血清白蛋白的圖譜,11.11 凝膠色譜技術(shù),凝膠過濾法又稱為分子篩層析，是利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)為固定相，根據(jù)分子大小進(jìn)行分離的一種方法。凝膠過濾所用

67、的介質(zhì)是由交聯(lián)葡萄糖、瓊脂糖或聚丙烯酰胺形成的凝膠珠。凝膠珠的內(nèi)部是多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。單個(gè)凝膠珠本身象“篩子”，不同類型凝膠的篩孔的大小不同。,,Services,,基本原理,凝膠過濾層析過程示意圖,,（1）要分離的分子分為三類： A類：dA＞最大孔徑，全排阻（出） 凝膠對它無阻滯，最早流出； C類：dC＜最小孔徑，能進(jìn)入全部孔隙區(qū)，阻滯最大，流速最慢，最晚流出； B類：最小孔徑＜dB＜最大孔徑，進(jìn)入部分孔隙區(qū)大

68、小不同B類分子之間阻滯不同，可以分離把B類分子的分離稱為分級分離B′B″… 把A、B、C類分子間分離稱為組別分離A B C,,,,,,,,,,,,典型的凝膠類型,交聯(lián)葡聚糖凝膠：Sephadex􀂄聚丙烯酰胺凝膠：Sephacryl 􀂄瓊脂糖凝膠：Sepharose和Bio-Gel􀂄其它：有機(jī)凝膠Sepharon，交聯(lián)聚醚Toyopeal，纖維素凝膠，改性剛性填料等。,1