中國(guó)藥科大學(xué)99-10年生物化學(xué)真題問(wèn)答題匯總

1、9910年生物化學(xué)真題問(wèn)答題匯總2010年生物化學(xué)問(wèn)答題三、簡(jiǎn)答題1、輔基和輔酶有何不同，請(qǐng)寫(xiě)出三種維生素與輔酶的關(guān)系。這些輔酶在代謝中的應(yīng)用。答：根據(jù)酶催化反應(yīng)最適條件的要求，原則上在酶測(cè)定體系中應(yīng)加入一定量的輔助因子。輔助因子（cofacts）是指酶的活性所需要的一種非蛋白質(zhì)成分，包括輔酶、輔基和金屬離子激活劑。與酶緊密結(jié)合的輔因子稱(chēng)為輔基；不含輔基的酶蛋白稱(chēng)為脫輔基酶蛋白（apoenzyme），沒(méi)有催化活性，必須加入足量輔基，和它

2、結(jié)合成為全酶（holoenzyme），才有催化活性。脫輔基酶蛋白與輔基孵育一段時(shí)間后，酶活性才會(huì)恢復(fù)，因此，往往需要樣品與試劑中的輔基先預(yù)孵育的過(guò)程。輔基的用量往往較少。與酶蛋白結(jié)合很松弛，用透析和其它方法很易將它們與酶分開(kāi)的稱(chēng)為輔酶（Coenzyme）。輔酶盡管不同于酶的底物，但在作用方式上和底物類(lèi)似，在酶反應(yīng)過(guò)程中與酶結(jié)合、分離及反復(fù)循環(huán)。輔酶用量的確定可將它們按底物處理。例如乳酸脫氫酶中輔酶按雙底物動(dòng)力學(xué)方程計(jì)算。硫胺素即維生素B

3、1。它在生物體內(nèi)的輔酶形式是硫胺素焦磷酸(TPP)。硫胺素焦磷酸過(guò)去也稱(chēng)為輔羧酶。它在動(dòng)物糖代謝中起著重要作用，例如丙酮酸在脫羧作用時(shí)需要它。在TPP缺少的情況下代謝中間物丙酮酸不能順利脫羧會(huì)積聚于血液和組織中而出現(xiàn)神經(jīng)炎癥狀。TPP還是其他酶例如酮酸氧化酶、轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶。TPP催化的酶反應(yīng)還需要有鎂離子的存在。核黃素即維生素B2。參與組成兩種輔酶是細(xì)胞內(nèi)的氧化還原系統(tǒng)的主要成分它們是黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD

4、)。FMN和FAD是一系列黃素連接的氧化還原酶或稱(chēng)為黃素蛋白類(lèi)的輔酶，從它們與酶蛋白結(jié)合緊密的程度來(lái)說(shuō)，也可認(rèn)為是輔基。這些酶中有的除了FMN或FAD外，還需要一些金屬輔助因子，如鐵或鉬離子等。因此它們被稱(chēng)為金屬黃素蛋白。這些酶催化一系列可逆或不可逆的細(xì)胞中的氧化還原反應(yīng)。吡哆醛及其衍生物吡哆醛、吡哆胺和吡哆醇總稱(chēng)為維生素B6（圖3[維生素的結(jié)構(gòu)式]的結(jié)構(gòu)式“class=image）。維生素B6參與形成兩種輔酶，即吡哆醛磷酸和吡哆胺磷酸

5、。需要吡哆醛磷酸或吡哆胺磷酸作為輔酶的酶在氨基酸代謝中特別重要，催化轉(zhuǎn)氨、脫羧以及消旋作用等。輔酶輔酶作為酶的輔因子的有機(jī)分子，本身無(wú)催化作用，但一般在酶促反應(yīng)中有傳遞電子、原子或某些功能基團(tuán)作為酶的輔因子的有機(jī)分子，本身無(wú)催化作用，但一般在酶促反應(yīng)中有傳遞電子、原子或某些功能基團(tuán)(如參與氧化還如參與氧化還原或運(yùn)載?；幕鶊F(tuán)原或運(yùn)載?；幕鶊F(tuán))的作用。在大多數(shù)情況下，可通過(guò)透析將輔酶除去。的作用。在大多數(shù)情況下，可通過(guò)透析將輔酶除去。輔

6、酶（輔酶（coenzymecoenzyme）是一類(lèi)可以將化學(xué)基團(tuán)從一個(gè)酶轉(zhuǎn)移到另一個(gè)酶上的有機(jī)小分子，與酶較為松散地結(jié)合，對(duì)于特定酶的）是一類(lèi)可以將化學(xué)基團(tuán)從一個(gè)酶轉(zhuǎn)移到另一個(gè)酶上的有機(jī)小分子，與酶較為松散地結(jié)合，對(duì)于特定酶的活性發(fā)揮是必要的。有許多維他命及其衍生物，如核黃素、硫胺素和葉酸，都屬于輔酶。這些化合物無(wú)法由人體合成，必活性發(fā)揮是必要的。有許多維他命及其衍生物，如核黃素、硫胺素和葉酸，都屬于輔酶。這些化合物無(wú)法由人體合成，必須

7、通過(guò)飲食補(bǔ)充。不同的輔酶能夠攜帶的化學(xué)基團(tuán)也不同：須通過(guò)飲食補(bǔ)充。不同的輔酶能夠攜帶的化學(xué)基團(tuán)也不同：NADNAD或NADPNADP攜帶氫離子，輔酶攜帶氫離子，輔酶A攜帶乙?；?，葉酸攜帶甲?；瑪y帶乙酰基，葉酸攜帶甲?；琒S腺苷基蛋氨酸也可攜帶甲?；Ｏ佘栈鞍彼嵋部蓴y帶甲?；?。二、甲氨蝶呤抗腫瘤作用的化學(xué)原理。答：甲氨蝶呤為抗甲氨蝶呤為抗葉酸葉酸類(lèi)抗腫瘤藥，主要通過(guò)類(lèi)抗腫瘤藥，主要通過(guò)對(duì)二氫葉酸還原酶的抑制對(duì)二氫葉酸還原酶的抑制而達(dá)

8、到阻礙腫瘤細(xì)胞的合成，而抑制腫瘤細(xì)胞的生而達(dá)到阻礙腫瘤細(xì)胞的合成，而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與繁殖。長(zhǎng)與繁殖。②旋光性下降；旋光性下降；③粘度降低；粘度降低；④生物學(xué)功能喪失或改變。生物學(xué)功能喪失或改變。應(yīng)用：應(yīng)用：DNA雜交是指不同來(lái)源的雜交是指不同來(lái)源的DNA經(jīng)熱變性后，在慢慢冷卻的復(fù)性過(guò)程中，由于異源經(jīng)熱變性后，在慢慢冷卻的復(fù)性過(guò)程中，由于異源DNA之間的某些區(qū)域有相同之間的某些區(qū)域有相同的序列，可以彼此結(jié)合形成雜交分子，稱(chēng)此方法為的序

9、列，可以彼此結(jié)合形成雜交分子，稱(chēng)此方法為DNA分子雜交。分子雜交。DNA也可與互補(bǔ)的也可與互補(bǔ)的RNA之間發(fā)生雜交，形成之間發(fā)生雜交，形成DNA—RNA雜交分子。核酸雜交可在液相或固相上進(jìn)行，由于硝酸纖維素膜只吸附變性雜交分子。核酸雜交可在液相或固相上進(jìn)行，由于硝酸纖維素膜只吸附變性DNA，故常用硝酸纖維素膜作核酸雜交的，故常用硝酸纖維素膜作核酸雜交的支持介質(zhì)。支持介質(zhì)。由于嘌呤和嘧啶在由于嘌呤和嘧啶在240nm240nm～290nm

10、290nm紫外線(xiàn)處表現(xiàn)出強(qiáng)烈的吸收性能，所以可以利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定堿基、核苷、紫外線(xiàn)處表現(xiàn)出強(qiáng)烈的吸收性能，所以可以利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定堿基、核苷、核苷酸和核酸，它們的最大吸收峰值在核苷酸和核酸，它們的最大吸收峰值在260nm260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性，可以此作定性定量檢測(cè)。附近。不同核苷酸有不同的吸收特性，可以此作定性定量檢測(cè)。DNA變性后，粘度改變，鋼性線(xiàn)性分子變得無(wú)序，粘度下降，變性后，粘度改變，鋼性線(xiàn)性分子

11、變得無(wú)序，粘度下降，UV吸收增強(qiáng)，其規(guī)律如下：高色效應(yīng)吸收增強(qiáng)，其規(guī)律如下：高色效應(yīng)核酸變性后、氫核酸變性后、氫鍵破壞，雙螺旋結(jié)構(gòu)破壞，堿基暴露，紫外吸收（鍵破壞，雙螺旋結(jié)構(gòu)破壞，堿基暴露，紫外吸收（260nm）增強(qiáng)，謂高色效應(yīng)。解鏈溫度）增強(qiáng)，謂高色效應(yīng)。解鏈溫度融解溫度（融解溫度（Tm）UV吸收增吸收增值達(dá)到最大吸收增值值達(dá)到最大吸收增值50%時(shí)的溫度，稱(chēng)時(shí)的溫度，稱(chēng)Tm。Tm值與值與DNAGC含量有關(guān)，含量有關(guān)，GC含量愈大，含量

12、愈大，Tm愈高，反之則反；與核酸分子長(zhǎng)度有關(guān)，分子愈長(zhǎng)，愈高，反之則反；與核酸分子長(zhǎng)度有關(guān)，分子愈長(zhǎng)，2.2.核酸雜交的分子基礎(chǔ)是什么？有哪些應(yīng)用價(jià)值？核酸雜交的分子基礎(chǔ)是什么？有哪些應(yīng)用價(jià)值？答：答：雜交（雜交（hydridizationhydridization）：兩個(gè)以上的分子因具有相近的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)而在適宜的條件下形成雜交體（）：兩個(gè)以上的分子因具有相近的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)而在適宜的條件下形成雜交體（hybridhybrid），）

13、，雜交體中的分子不是來(lái)自一個(gè)二聚體分子。同一個(gè)二聚體中的兩個(gè)分子在變性解離后重組合稱(chēng)為復(fù)性。雜交體中的分子不是來(lái)自一個(gè)二聚體分子。同一個(gè)二聚體中的兩個(gè)分子在變性解離后重組合稱(chēng)為復(fù)性。利用兩條不同來(lái)源利用兩條不同來(lái)源的多核苷酸鏈之間的互補(bǔ)性而使它們形成雜交體雙鏈叫核酸雜交。的多核苷酸鏈之間的互補(bǔ)性而使它們形成雜交體雙鏈叫核酸雜交。與核酸雜交技術(shù)相對(duì)應(yīng)的另一項(xiàng)技術(shù)被稱(chēng)為探針技術(shù)，與核酸雜交技術(shù)相對(duì)應(yīng)的另一項(xiàng)技術(shù)被稱(chēng)為探針技術(shù)，它是指利用標(biāo)記

14、分子對(duì)其它分子的識(shí)別性而實(shí)現(xiàn)對(duì)后者進(jìn)行檢測(cè)的一種技術(shù)，我們把標(biāo)記的分子叫探針（它是指利用標(biāo)記分子對(duì)其它分子的識(shí)別性而實(shí)現(xiàn)對(duì)后者進(jìn)行檢測(cè)的一種技術(shù)，我們把標(biāo)記的分子叫探針（ProbeProbe）。將探）。將探針技術(shù)與分子雜交技術(shù)相結(jié)合，從而使分子雜交技術(shù)得以廣泛推廣應(yīng)用。目前所用的核酸雜交技術(shù)均應(yīng)用了標(biāo)記技術(shù)。針技術(shù)與分子雜交技術(shù)相結(jié)合，從而使分子雜交技術(shù)得以廣泛推廣應(yīng)用。目前所用的核酸雜交技術(shù)均應(yīng)用了標(biāo)記技術(shù)。核酸雜交的原理核酸雜交的原

15、理：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）可按堿基互補(bǔ)原則形成：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）可按堿基互補(bǔ)原則形成雙鏈，此雜交過(guò)程是高度特異的。雜交的雙方是待測(cè)核酸及探針。待測(cè)核酸序列為性病病原體基因組或質(zhì)粒雙鏈，此雜交過(guò)程是高度特異的。雜交的雙方是待測(cè)核酸及探針。待測(cè)核酸序列為性病病原體基因組或質(zhì)粒DNADNA。探針以。探針以放射核素或非放射性核素標(biāo)記，以利于雜交信號(hào)的檢

16、測(cè)。放射核素或非放射性核素標(biāo)記，以利于雜交信號(hào)的檢測(cè)。核酸的分子雜交技術(shù)是目前生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)之一，是定性或定量檢測(cè)特異核酸的分子雜交技術(shù)是目前生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)之一，是定性或定量檢測(cè)特異RNARNA或DNADNA序列片段的有力工具。序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的堿基互補(bǔ)原則而發(fā)展起來(lái)的。在堿性環(huán)境中加熱或加入變性劑等條件下，雙鏈它是利用核酸分子的堿基互補(bǔ)原則而發(fā)展起來(lái)的。在堿性

17、環(huán)境中加熱或加入變性劑等條件下，雙鏈DNADNA之間的氫鍵被破壞之間的氫鍵被破壞(變性變性)，雙鏈解開(kāi)成兩條單鏈。這時(shí)加入異源的，雙鏈解開(kāi)成兩條單鏈。這時(shí)加入異源的DNADNA，在核酸雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種用于研究，在核酸雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種用于研究和診斷的非常有用的技術(shù)稱(chēng)探針技術(shù)和診斷的非常有用的技術(shù)稱(chēng)探針技術(shù)(Probe)(Probe)。一小段。一小段(例如十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)百個(gè)例如十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)百個(gè))核苷酸聚合體的單鏈，有放射性同位

18、素如核苷酸聚合體的單鏈，有放射性同位素如32P32P、35S35S或生物素標(biāo)記其末端或全鏈，就可作為探針。把待測(cè)或生物素標(biāo)記其末端或全鏈，就可作為探針。把待測(cè)DNADNA變性并吸附在一種特殊的濾膜，例如硝酸纖維素膜上。變性并吸附在一種特殊的濾膜，例如硝酸纖維素膜上。然后把濾膜與探針共同培育一段時(shí)間，使發(fā)生雜交。用緩沖液沖洗膜。由于這種濾膜能較牢固地吸附雙鏈的核酸，單鏈的然后把濾膜與探針共同培育一段時(shí)間，使發(fā)生雜交。用緩沖液沖洗膜。由于這

19、種濾膜能較牢固地吸附雙鏈的核酸，單鏈的在沖洗時(shí)洗脫了。帶有放射性的探針若能與待測(cè)在沖洗時(shí)洗脫了。帶有放射性的探針若能與待測(cè)DNADNA結(jié)合成雜化雙鏈，則保留在濾膜上結(jié)合成雜化雙鏈，則保留在濾膜上。通過(guò)同位素的放射自顯影或生物。通過(guò)同位素的放射自顯影或生物素的化學(xué)顯色，就可判斷探針是否與被測(cè)的素的化學(xué)顯色，就可判斷探針是否與被測(cè)的DNADNA發(fā)生雜交。有雜交現(xiàn)象則說(shuō)明被測(cè)發(fā)生雜交。有雜交現(xiàn)象則說(shuō)明被測(cè)DNADNA與探針有同源性與探針有同源