浙江大學(xué)2003—2007考研生物化學(xué)真題(含詳細(xì)解析)

1、浙江大學(xué)浙江大學(xué)2003—2007考研生物化學(xué)真題（含解析）考研生物化學(xué)真題（含解析）2003、真題解析、真題解析1、簡(jiǎn)述、簡(jiǎn)述SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳得基本原理，你使用該技術(shù)分離和檢測(cè)過(guò)何種物質(zhì)？主聚丙烯酰胺凝膠電泳得基本原理，你使用該技術(shù)分離和檢測(cè)過(guò)何種物質(zhì)？主要操作步驟有哪些？要操作步驟有哪些？該題是實(shí)驗(yàn)操作中的常考題SDS－PAGE：當(dāng)SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，蛋白質(zhì)分子即帶有大量的負(fù)電荷，從而掩蓋了天然蛋白質(zhì)分子間的電荷差別。與此

2、同時(shí)蛋白質(zhì)在SDS的作用下結(jié)構(gòu)變得松散，形狀趨向一致，所以各種SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物在電泳時(shí)產(chǎn)生的泳動(dòng)率差異，只反映了分子量的差異，即純利用分子篩效應(yīng)，按蛋白質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離，分子量越大移動(dòng)越慢。?應(yīng)用應(yīng)用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳還可以用于未知蛋白分子量的測(cè)定，在同一凝膠上對(duì)一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白及未知蛋白進(jìn)行電泳，測(cè)定各個(gè)的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳距離（或遷移率），并對(duì)各自分子量的對(duì)數(shù)（logMr）作圖，即得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定未知蛋白質(zhì)的電

3、泳距離（或遷移率），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以求出未知蛋白的分子量。SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳經(jīng)常應(yīng)用于提純過(guò)程中純度的檢測(cè)，純化的蛋白質(zhì)通常在SDS電泳上應(yīng)只有一條帶，但如果蛋白質(zhì)是由不同的亞基組成的，它在電泳中可能會(huì)形成分別對(duì)應(yīng)于各個(gè)亞基的幾條帶。SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳具有較高的靈敏度，一般只需要不到微克量級(jí)的蛋白質(zhì)，而且通過(guò)電泳還可以同時(shí)得到關(guān)于分子量的情況，這些信息對(duì)于了解未知蛋白及設(shè)計(jì)提純過(guò)程都是非常重要的。SDS－聚丙烯酰胺凝膠

4、電泳可用于單鏈ＤＮＡ、寡核苷酸片斷以及蛋白質(zhì)亞基，膜蛋白、肽類等物質(zhì)的分析，還可以用于研究大分子的折疊結(jié)構(gòu)等方面。?基本操作基本操作SDSPAGE的基本操作和聚丙烯酰胺凝膠電泳相近，其支持介質(zhì)都是聚丙烯酰胺凝膠，因此在制膠、加樣和電泳儀器都都相同或相近，區(qū)別的是SDSPAGE需要有標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液及供試品溶液的制備，樣品預(yù)先需要用SDS處理。一般采用取標(biāo)準(zhǔn)蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，與水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸鈉

5、0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中過(guò)夜。供試品照上述方法配制。此外，在電泳結(jié)束以后，需要對(duì)相對(duì)遷移率和分子量進(jìn)行計(jì)算將電泳脫色后的區(qū)帶用卡尺或用掃描定位法測(cè)量染料移動(dòng)的距離、染色前膠條長(zhǎng)度、蛋白移動(dòng)距離和脫色后的膠條長(zhǎng)度。2、質(zhì)粒是基因工程中最常用得載體，為獲得某種質(zhì)粒、質(zhì)粒是基因工程中最常用得載體，為獲得某種質(zhì)粒(如pUC18)DNA，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)單得實(shí)驗(yàn)過(guò)程單得實(shí)驗(yàn)過(guò)程(步驟步驟)。大腸桿菌質(zhì)粒DN

6、A的提?。▔A裂解法）此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切PCR擴(kuò)增。人們清楚地了解遺傳信息的構(gòu)成和傳遞的途徑.在以后的近50年里分子遺傳學(xué)分子免疫學(xué)細(xì)胞生物學(xué)等新學(xué)科如雨后春筍般出現(xiàn)一個(gè)又一個(gè)生命的奧秘從分子角度得到了更清晰的闡明DNA重組技術(shù)更是為利用生物工程手段的研究和應(yīng)用開辟了廣闊的前景.在人類最終全面揭開生命奧秘的進(jìn)程中化學(xué)已經(jīng)并將更進(jìn)一步地為之提供理論指導(dǎo)和技術(shù)支持.該題太小，以后不大會(huì)再出該題太小，

7、以后不大會(huì)再出5、何謂變性？哪些因素可以引起蛋白質(zhì)的變性？何謂別構(gòu)、何謂變性？哪些因素可以引起蛋白質(zhì)的變性？何謂別構(gòu)(變構(gòu)變構(gòu))？舉一例說(shuō)明之。？舉一例說(shuō)明之。蛋白質(zhì)受到某些物理或化學(xué)因素作用時(shí)，引起生物活性的喪失，溶解度的降低以及其它性質(zhì)的改變，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性作用。變性作用的實(shí)質(zhì)是由于維持蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的次級(jí)鍵遭到破壞而造成天然構(gòu)象的解體，但未涉及共價(jià)鍵的斷裂。有些變性是可逆的，有些變性是不可逆的。引起蛋白質(zhì)的變性的因素有：

8、熱、紫外線照射、高壓和表面張力等物理因素，及有機(jī)溶劑、脲、胍、酸、堿等化學(xué)因素。別構(gòu)效應(yīng)（allostericeffect）某種不直接涉及蛋白質(zhì)活性的物質(zhì)，結(jié)合于蛋白質(zhì)活性部位以外的其他部位（別構(gòu)部位），引起蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化，而導(dǎo)致蛋白質(zhì)活性改變的現(xiàn)象?？煞譃橥傩?yīng)和異促效應(yīng)兩類。以氧與血紅蛋白的結(jié)合為例。該題出現(xiàn)多次，應(yīng)引起重視。6、試述三羧酸循環(huán)是如何溝通糖類、脂類、以及蛋白質(zhì)三大有機(jī)物的代謝的？、試述三羧酸循環(huán)是如何溝通糖類

9、、脂類、以及蛋白質(zhì)三大有機(jī)物的代謝的？一方面，TCA是糖、脂肪、氨基酸等徹底氧化分解的共同末端途徑，另一方面，循環(huán)中生成的草酰乙酸、α酮戊二酸、檸檬酸、琥珀酰CoA和延胡索酸等又是合成糖、氨基酸、脂肪酸、卟啉等的原料，因而TCA將各種有機(jī)物的代謝聯(lián)系起來(lái)。TCA是聯(lián)系體內(nèi)三大物質(zhì)代謝的中心環(huán)節(jié)，為合成其它物質(zhì)提供C架。重要，會(huì)是大題中的一個(gè)知識(shí)點(diǎn)2004、真題解析、真題解析1、名詞解釋、名詞解釋1)埃德曼降解：埃德曼降解是一種蛋白質(zhì)或肽

10、的氨基末端分析法也是一種氨基酸序列測(cè)定法。其原理是在弱堿性條件下使N末端游離的α氨基與苯異硫氰酸酯(PITC)偶聯(lián)反應(yīng)，然后用酸處理，經(jīng)環(huán)化斷裂、轉(zhuǎn)化從多肽鏈上僅使氨基末端殘基以氨基酸的苯基乙內(nèi)酰硫脲衍生物(PTH氨基酸)的形態(tài)從肽鏈上斷裂下來(lái)，然后進(jìn)行分析。2)抗體：抗體是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白，是一種可溶性的血清糖蛋白。其具有高度特異性和龐大的多樣性兩個(gè)特點(diǎn)。