Notch信號在大鼠肝纖維化中的作用及常山酮干預(yù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究 Notch和 TGF-β信號通路在肝纖維化大鼠中的相互作用以及對Th17/Treg平衡的影響；探究常山酮干預(yù)肝纖維化大鼠，Notch和TGF-β通路的變化及其抗纖維化機(jī)制。
　　方法： Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為對照組(12只)、模型組（3組，每組12只）。刀豆蛋白A（ConA）建模，模型組大鼠每周尾靜脈注射ConA12.5mg/kg1次，對照組大鼠每周尾靜脈注射磷酸鹽緩沖液（PBS）300μl1次，連續(xù)8周；血清生

2、化檢測肝功能情況，HE染色觀察肝組織病理變化。建模成功后模型組隨機(jī)分成3組（DAPT組、TGF-β抑制組、DMSO對照組），每組12只，對其體外心尖無菌采血3 ml，分離外周單個核細(xì)胞（PBMCs），分別用Notch抑制劑DAPT及TGF-β抑制劑干預(yù)培養(yǎng)24 h，RT-PCR測Notch和TGF-β信號mRNA表達(dá)，Western Blot測Notch和TGF-β信號相關(guān)蛋白表達(dá)情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測Th17和Treg細(xì)胞頻率，ELIS

3、A檢測PBMCs培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL-17、IL-23、TGF-β及IL-10的表達(dá)水平；Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成模型組、常山酮組和正常組（每組12只），同上ConA建模，常山酮組自造模起灌胃常山酮（10mg/kg），模型組和正常組灌胃等量PBS，連續(xù)8周后 RT-PCR測Notch和TGF-β信號mRNA表達(dá)，Western Blot測Notch和TGF-β信號蛋白表達(dá)情況，免疫組化觀察肝臟Notch和TGF-β信號表達(dá)情況。

4、r>　　結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠的 ALT及 AST水平顯著升高(P＜0.05)，ALB水平顯著下降(P＜0.05)，HE染色顯示肝細(xì)胞壞死伴假小葉形成；模型組 Notch和TGF-β信號激活，其中Notch信號的Notch1、Hes1、Hes5和TGF-β信號的TGF-β1和Smad3 mRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.05），相應(yīng)的蛋白表達(dá)也明顯上升（P＜0.05）。與DMSO組相比，DAPT組Notch和TGF-β信號mRNA表

5、達(dá)降低（P＜0.05），蛋白表達(dá)也顯著減低（P＜0.05）；TGF-β抑制組Notch和TGF-β信號相關(guān)mRNA表達(dá)降低（P＜0.05），蛋白表達(dá)亦明顯減低（P＜0.05）。流式及ELISA法檢測顯示，與DMSO組相比，DAPT組和TGF-β抑制組中Th17細(xì)胞頻率及其相關(guān)細(xì)胞因子（IL-17、IL-23）水平降低（P＜0.05），Treg細(xì)胞頻率及其相關(guān)細(xì)胞因子（TGF-β、IL-10）水平亦明顯降低（P＜0.05），Th17/Tr

6、eg比值均較DMSO組上升。與模型組相比，常山酮組Notch和TGF-β信號Notch1，Hes1，Hes5及TGF-β1，Smad3 mRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；相應(yīng)蛋白表達(dá)也減低（P＜0.05），與正常組相比無明顯差異；免疫組化觀察肝組織，常山酮組中Notch1，Hes1，Hes5及TGF-β，Smad3表達(dá)較模型組下降（P＜0.05），與正常組無明顯差異。
　　結(jié)論： Notch和 TGF-β信號參與肝纖維化的發(fā)生