冠癭病菌檢疫技術(shù)操作辦法

1、冠癭病菌檢疫技術(shù)操作辦法冠癭病菌檢疫技術(shù)操作辦法字體：大中小200991來源：省林檢局閱讀：134次[關(guān)閉]11主題內(nèi)容及應(yīng)檢范圍主題內(nèi)容及應(yīng)檢范圍主題內(nèi)容及應(yīng)檢范圍主題內(nèi)容及應(yīng)檢范圍1.11.11.1本辦法規(guī)定了冠癭病菌本辦法規(guī)定了冠癭病菌本辦法規(guī)定了冠癭病菌AgrobacteriumAgrobacteriumAgrobacteriumtumefacienstumefacienstumefaciens(Smith(Smith(Smit

2、hetetetTownsend)Townsend)Townsend)ConnConnConn的檢疫檢驗及檢疫處理操作辦法。的檢疫檢驗及檢疫處理操作辦法。的檢疫檢驗及檢疫處理操作辦法。1.21.21.2本辦法適用于林業(yè)植物檢疫機(jī)構(gòu)對楊屬本辦法適用于林業(yè)植物檢疫機(jī)構(gòu)對楊屬本辦法適用于林業(yè)植物檢疫機(jī)構(gòu)對楊屬PopulusPopulusPopulusspp.spp.spp.、柳屬、柳屬、柳屬SalixSalixSalixspp.spp.spp.

3、、蘋果屬、蘋果屬、蘋果屬MalusMalusMalusspp.spp.spp.、梨屬、梨屬、梨屬PyrusPyrusPyrusspp.spp.spp.、薔薇屬、薔薇屬、薔薇屬RosaRosaRosaspp.spp.spp.、山楂屬、山楂屬、山楂屬CrataegusCrataegusCrataegusspp.spp.spp.、李屬、李屬、李屬PrunusPrunusPrunusspp.spp.spp.、栗屬、栗屬、栗屬CastaneaCa

4、staneaCastaneaspp.spp.spp.、葡萄屬、葡萄屬、葡萄屬VitisVitisVitisspp.spp.spp.等林木、果樹和木本花卉植物活等林木、果樹和木本花卉植物活等林木、果樹和木本花卉植物活體、殘體的檢疫檢驗和檢疫處理。體、殘體的檢疫檢驗和檢疫處理。體、殘體的檢疫檢驗和檢疫處理。22產(chǎn)地檢疫產(chǎn)地檢疫產(chǎn)地檢疫產(chǎn)地檢疫2.12.12.1種苗繁育基地的建立種苗繁育基地的建立種苗繁育基地的建立2.1.12.1.12.1.

5、1應(yīng)選用無疫情的繁殖材料。應(yīng)選用無疫情的繁殖材料。應(yīng)選用無疫情的繁殖材料。2.1.22.1.22.1.2有疫情發(fā)生的地塊，有疫情發(fā)生的地塊，有疫情發(fā)生的地塊，33年內(nèi)不再繁育其寄主植物。年內(nèi)不再繁育其寄主植物。年內(nèi)不再繁育其寄主植物。2.22.22.2踏查踏查踏查2.2.12.2.12.2.1在種苗繁育基地、林地、果園和木本花卉栽植地，以自然界線、道路為單在種苗繁育基地、林地、果園和木本花卉栽植地，以自然界線、道路為單在種苗繁育基地、林

6、地、果園和木本花卉栽植地，以自然界線、道路為單位進(jìn)行線路（目測）踏查。位進(jìn)行線路（目測）踏查。位進(jìn)行線路（目測）踏查。2.2.22.2.22.2.2調(diào)查罹病植株是否表現(xiàn)矮化、干枯，葉片是否黃化、早落，根系是否細(xì)調(diào)查罹病植株是否表現(xiàn)矮化、干枯，葉片是否黃化、早落，根系是否細(xì)調(diào)查罹病植株是否表現(xiàn)矮化、干枯，葉片是否黃化、早落，根系是否細(xì)小、須根少。小、須根少。小、須根少。2.2.32.2.32.2.3調(diào)查中、幼齡植株的根冠部是否有灰白色、球

7、形或扁球形的光滑軟質(zhì)瘤，調(diào)查中、幼齡植株的根冠部是否有灰白色、球形或扁球形的光滑軟質(zhì)瘤，調(diào)查中、幼齡植株的根冠部是否有灰白色、球形或扁球形的光滑軟質(zhì)瘤，是否有褐色、深褐色、表面粗糙龜裂、周圍和表面生有細(xì)根的木瘤；根莖和主干是否有褐色、深褐色、表面粗糙龜裂、周圍和表面生有細(xì)根的木瘤；根莖和主干是否有褐色、深褐色、表面粗糙龜裂、周圍和表面生有細(xì)根的木瘤；根莖和主干上是否有上是否有上是否有表面粗糙、龜裂、質(zhì)地堅硬的木瘤表面粗糙、龜裂、質(zhì)地堅硬

8、的木瘤表面粗糙、龜裂、質(zhì)地堅硬的木瘤。。2.2.42.2.42.2.4確認(rèn)有疫情需進(jìn)一步掌握危害情況的，應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）做詳細(xì)調(diào)確認(rèn)有疫情需進(jìn)一步掌握危害情況的，應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）做詳細(xì)調(diào)確認(rèn)有疫情需進(jìn)一步掌握危害情況的，應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）做詳細(xì)調(diào)查。查。查。2.32.32.3標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)地（或樣方）調(diào)查2.3.12.3.12.3.1種苗繁育基地樣方設(shè)置與調(diào)查種苗繁育基地樣方設(shè)置與調(diào)查種苗繁育基地

9、樣方設(shè)置與調(diào)查2.3.1.12.3.1.12.3.1.1樣方的累積面積應(yīng)不少于調(diào)查總面積的樣方的累積面積應(yīng)不少于調(diào)查總面積的樣方的累積面積應(yīng)不少于調(diào)查總面積的5%5%5%。。2.3.1.22.3.1.22.3.1.2每塊樣方面積為每塊樣方面積為每塊樣方面積為101010mm22，在樣方內(nèi)按“，在樣方內(nèi)按“，在樣方內(nèi)按“ZZ”形線路取樣，抽取樣株不得少”形線路取樣，抽取樣株不得少”形線路取樣，抽取樣株不得少于于202020株。株。株。2.

10、3.22.3.22.3.2林分標(biāo)準(zhǔn)地設(shè)置與調(diào)查林分標(biāo)準(zhǔn)地設(shè)置與調(diào)查林分標(biāo)準(zhǔn)地設(shè)置與調(diào)查2.3.2.12.3.2.12.3.2.1按林分面積設(shè)置，按林分面積設(shè)置，按林分面積設(shè)置，101010hmhmhm22以下（含以下（含以下（含101010hmhmhm22）設(shè)）設(shè)）設(shè)11塊，塊，塊，101010hmhmhm22以上按總面以上按總面以上按總面積的積的積的2%2%2%設(shè)置。設(shè)置。設(shè)置。2.3.2.22.3.2.22.3.2.2每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積

11、為每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為0.10.10.1hmhmhm22，在標(biāo)準(zhǔn)地內(nèi)隨機(jī)抽取，在標(biāo)準(zhǔn)地內(nèi)隨機(jī)抽取，在標(biāo)準(zhǔn)地內(nèi)隨機(jī)抽取202020––303030株進(jìn)行調(diào)查。株進(jìn)行調(diào)查。株進(jìn)行調(diào)查。2.42.42.4病害分級標(biāo)準(zhǔn)病害分級標(biāo)準(zhǔn)病害分級標(biāo)準(zhǔn)土壤桿菌屬為革蘭氏陰性，呈紅色。土壤桿菌屬為革蘭氏陰性，呈紅色。土壤桿菌屬為革蘭氏陰性，呈紅色。4.2.34.2.34.2.3鞭毛染色鞭毛染色鞭毛染色采用西薩采用西薩采用西薩——基爾（基爾（基爾

12、（CesaresGillCesaresGillCesaresGill）染色法。經(jīng)染媒劑）染色法。經(jīng)染媒劑）染色法。經(jīng)染媒劑55––77minminmin處處理→水洗干燥→苯酚品紅染色理→水洗干燥→苯酚品紅染色理→水洗干燥→苯酚品紅染色55minminmin→水洗干燥后鏡檢?！锤稍锖箸R檢?！锤稍锖箸R檢。土壤桿菌屬鏡檢菌體和鞭毛為陰性反應(yīng)，呈紅色，鞭毛土壤桿菌屬鏡檢菌體和鞭毛為陰性反應(yīng)，呈紅色，鞭毛土壤桿菌屬鏡檢菌體和鞭毛為陰性反應(yīng)

13、，呈紅色，鞭毛11––66根。根。根。4.34.34.3生理生化檢驗生理生化檢驗生理生化檢驗4.3.14.3.14.3.1生長與溫度試驗生長與溫度試驗生長與溫度試驗生物變種生物變種生物變種11可以在可以在可以在353535℃生長，生物變種℃生長，生物變種℃生長，生物變種22和生物變種和生物變種和生物變種33則不能生長。則不能生長。則不能生長。4.3.24.3.24.3.2耐鹽性試驗?zāi)望}性試驗?zāi)望}性試驗生物變種生物變種生物變種11和生物變

14、種和生物變種和生物變種33可在含可在含可在含2%2%2%NaClNaClNaCl的培養(yǎng)液上生長，的培養(yǎng)液上生長，的培養(yǎng)液上生長，而生物變種而生物變種而生物變種22不能生長。不能生長。不能生長。4.3.34.3.34.3.3333酮基乳糖試驗酮基乳糖試驗酮基乳糖試驗4.3.3.14.3.3.14.3.3.1將菌種接種在將菌種接種在將菌種接種在GYCAGYCAGYCA培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)11––22dd，再將細(xì)菌

15、點種在乳糖培，再將細(xì)菌點種在乳糖培，再將細(xì)菌點種在乳糖培養(yǎng)基平板上，每皿接種養(yǎng)基平板上，每皿接種養(yǎng)基平板上，每皿接種44––66個菌株，培養(yǎng)個菌株，培養(yǎng)個菌株，培養(yǎng)11––22dd，使每個菌落直徑達(dá)，使每個菌落直徑達(dá)，使每個菌落直徑達(dá)0.50.50.5cmcmcm。。4.3.3.24.3.3.24.3.3.2在培養(yǎng)皿上加在培養(yǎng)皿上加在培養(yǎng)皿上加BenedictBenedictBenedict試劑，試劑，試劑，11hh之內(nèi)在菌落周圍產(chǎn)生一

16、圈黃色的之內(nèi)在菌落周圍產(chǎn)生一圈黃色的之內(nèi)在菌落周圍產(chǎn)生一圈黃色的CuCuCu22OO為陽性反應(yīng)。為陽性反應(yīng)。為陽性反應(yīng)。生物變種生物變種生物變種11為陽性反應(yīng)，生物變種為陽性反應(yīng)，生物變種為陽性反應(yīng)，生物變種22和和33均為陰性反應(yīng)。均為陰性反應(yīng)。均為陰性反應(yīng)。4.44.44.4碳素化合物的利用和分解碳素化合物的利用和分解碳素化合物的利用和分解4.4.14.4.14.4.1碳素化合物產(chǎn)酸試驗碳素化合物產(chǎn)酸試驗碳素化合物產(chǎn)酸試驗4.4.1

17、.14.4.1.14.4.1.1在在AyersAyersAyers培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或DyeDyeDye培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基CC中加中加中加1%1%1%測定的碳素化合物，接菌培養(yǎng)。測定的碳素化合物，接菌培養(yǎng)。測定的碳素化合物，接菌培養(yǎng)。4.4.1.24.4.1.24.4.1.2生物變種生物變種生物變種11可以利用蔗糖、松子糖和乙醇產(chǎn)酸，不能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸；可以利用蔗糖、松子糖和乙醇產(chǎn)酸，不能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸；可以利用蔗糖、松子糖和乙

18、醇產(chǎn)酸，不能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸；生物變種生物變種生物變種22則只能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸，不能利用蔗糖、松子糖和乙醇產(chǎn)酸；生物則只能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸，不能利用蔗糖、松子糖和乙醇產(chǎn)酸；生物則只能利用赤蘚糖醇產(chǎn)酸，不能利用蔗糖、松子糖和乙醇產(chǎn)酸；生物變種變種變種33只能利用蔗糖產(chǎn)酸，不能利用松子糖、乙醇和赤蘚糖醇產(chǎn)酸。只能利用蔗糖產(chǎn)酸，不能利用松子糖、乙醇和赤蘚糖醇產(chǎn)酸。只能利用蔗糖產(chǎn)酸，不能利用松子糖、乙醇和赤蘚糖醇產(chǎn)酸。4.4.24.4.24.

19、4.2有機(jī)酸產(chǎn)堿試驗有機(jī)酸產(chǎn)堿試驗有機(jī)酸產(chǎn)堿試驗4.4.2.14.4.2.14.4.2.1用用AyersAyersAyers培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，252525℃培養(yǎng)℃培養(yǎng)℃培養(yǎng)77dd，測定酒石酸鹽或丙二酸鹽；檸檬酸鹽用，測定酒石酸鹽或丙二酸鹽；檸檬酸鹽用，測定酒石酸鹽或丙二酸鹽；檸檬酸鹽用SimmonsSimmonsSimmons培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4.4.2.24.4.2.24.4.2.2培養(yǎng)基滅菌后，制成試管斜面，接菌后培養(yǎng)

20、基滅菌后，制成試管斜面，接菌后培養(yǎng)基滅菌后，制成試管斜面，接菌后242424––484848hh變深藍(lán)色為陽性。變深藍(lán)色為陽性。變深藍(lán)色為陽性。生物變種生物變種生物變種11不能利用丙二酸鹽和檸檬酸鹽產(chǎn)堿為陰性；生物變種不能利用丙二酸鹽和檸檬酸鹽產(chǎn)堿為陰性；生物變種不能利用丙二酸鹽和檸檬酸鹽產(chǎn)堿為陰性；生物變種22和生物變和生物變和生物變種種33能利用丙二酸鹽和酒石酸鈉產(chǎn)堿為陽性。能利用丙二酸鹽和酒石酸鈉產(chǎn)堿為陽性。能利用丙二酸鹽和酒石酸

21、鈉產(chǎn)堿為陽性。4.54.54.5大分子化合物分解大分子化合物分解大分子化合物分解4.5.14.5.14.5.1石蕊牛乳反應(yīng)。石蕊牛乳反應(yīng)。石蕊牛乳反應(yīng)。4.5.1.14.5.1.14.5.1.1用石蕊牛乳培養(yǎng)液，間隙滅菌用石蕊牛乳培養(yǎng)液，間隙滅菌用石蕊牛乳培養(yǎng)液，間隙滅菌33次，每次通蒸氣次，每次通蒸氣次，每次通蒸氣202020––303030minminmin。。4.5.1.24.5.1.24.5.1.2培養(yǎng)液接菌后，在培養(yǎng)液接菌后，

22、在培養(yǎng)液接菌后，在282828℃條件下培養(yǎng)℃條件下培養(yǎng)℃條件下培養(yǎng)44––66周。周。周。生物變種生物變種生物變種11使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)，后來形成褐色血清區(qū)；生物變種使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)，后來形成褐色血清區(qū)；生物變種使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)，后來形成褐色血清區(qū)；生物變種22使石蕊使石蕊使石蕊牛乳產(chǎn)酸變紅并凝固；生物變種牛乳產(chǎn)酸變紅并凝固；生物變種牛乳產(chǎn)酸變紅并凝固；生物變種33使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)后，還原為白色。使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)后，還原為白色。

23、使石蕊牛乳產(chǎn)堿變藍(lán)后，還原為白色。4.5.24.5.24.5.2檸檬酸鐵胺產(chǎn)褐色表膜試驗。檸檬酸鐵胺產(chǎn)褐色表膜試驗。檸檬酸鐵胺產(chǎn)褐色表膜試驗。4.5.2.14.5.2.14.5.2.1將檸檬酸鐵胺培養(yǎng)液分裝試管，每管約將檸檬酸鐵胺培養(yǎng)液分裝試管，每管約將檸檬酸鐵胺培養(yǎng)液分裝試管，每管約55mlmlml，滅菌后接，滅菌后接，滅菌后接10101088CFUmlCFUmlCFUml細(xì)菌細(xì)菌細(xì)菌液液0.10.10.1mlmlml，靜置培養(yǎng)，靜置