分子生物學(xué)電子版最新

1、最新 精品 Word 歡迎下載 可修改1.snRNA：小核 RNA，只存在于細(xì)胞核或者核質(zhì)核仁中的一類小分子量的 RNA，具有獨(dú)特功 能并且獨(dú)立存在的實(shí)體，約為 70-300 個核苷酸，可參與真核生物的 RNA 剪接。2.siRNA：即干擾 RNA，一類小分子量的 RNA，可以高效，特意地阻斷體內(nèi)同源基因的表 達(dá)，促使同源 mRNA 降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定的基因缺失。3.核酶：一類具有催化活性的核糖核酸，呈錘頭狀，參加 RNA

2、的剪切和降解。與 RNA 酶有顯著區(qū)別，它是 RNA，后者是蛋白質(zhì)。4.反義 RNA 又稱調(diào)節(jié) RNA，是指能與特定 mRNA 互補(bǔ)結(jié)合的 RNA 片段，即堿基序列正好與有意義的 mRNA 互補(bǔ)的 RNA 分子。5 三鏈 DNA：是在 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成的，由多聚嘧啶核苷酸或者多聚嘌呤核苷酸與 DNA 雙螺旋形成的。/由于雙螺旋的一股輕微折疊后，該股中的堿基可與雙螺旋的堿基以 Hoogsteen 氫鍵相連如 TAT、CGC、T

3、AA、CGG。6.RNAi：即 RNAi 干擾，siRNA 高效特異地阻斷體內(nèi)同源基因表達(dá)，促使同源 RNA 降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型的現(xiàn)象。7.何謂反義 RNA？其功能和醫(yī)學(xué)意義如何？答：又稱為調(diào)節(jié) RNA，是指能與特定 mRNA 互補(bǔ)結(jié)合的 RNA 片段，也即堿基序列與有意義的 mRNA 互補(bǔ)的 RNA 分子。功能：a 阻斷mRNA 的翻譯，b 抑制 DNA 復(fù)制和 mRNA 的轉(zhuǎn)錄，c 選擇性的關(guān)閉基因。意義：參與基

4、因調(diào)控：可用于基因治療（病毒、腫瘤） ；8 什么叫做核酶？如何發(fā)揮作用？有何應(yīng)用價值？答：即一類具有催化活性的核糖核酸。主要催化 RNA 的剪接反應(yīng)和剪切反應(yīng)。應(yīng)用意義：通過設(shè)計合成特異性切割病毒以及病毒的 RNA 的核酶，對病毒和腫瘤的基因治療將發(fā)揮重要作用。9.何謂 RNAi？其作用機(jī)理和應(yīng)用前景如何？答：：即 RNAi 干擾，siRNA 高效特異地阻斷體內(nèi)同源基因表達(dá)，促使同源 RNA 降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型的現(xiàn)象

5、。作用機(jī)理：分為起始階段和效應(yīng)階段。起始階段 Dicer 酶以依賴 ATP 的方式切割外源性的雙鏈 RNA 為小分子干擾 RNA，清除病毒，阻斷轉(zhuǎn)座子表達(dá)；效應(yīng)階段小分子干擾 RNA 結(jié)合核酶復(fù)合物形成 RNA 誘導(dǎo)活化的復(fù)合物及 RISC，然后 RISC 結(jié)合至 mRNA 轉(zhuǎn)錄本上并切割它，從而發(fā)揮作用。應(yīng)用前景：大通量研究基因功能的工具；基因敲除中的應(yīng)用；用于基因治療；基因表達(dá)的調(diào)控。第二章 第二章 1 移動基因：又叫轉(zhuǎn)位因子（t

6、ransposable elements）,由于它可以在染色體基因組上移動，甚至可在不同染色體間躍遷，故又稱跳躍基因（jumping gene） 。2 斷裂基因：真核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)基因，其核苷酸序列中含有與氨基酸編碼無關(guān)的 DNA 間隔區(qū) 段，從而被分割成不連續(xù)的若干區(qū)域。將這種編碼序列不連續(xù)，有間隔區(qū)段的 DNA 片斷稱為斷裂基因3 RNA 剪接：將斷裂基因的內(nèi)含子刪除和表達(dá)子連接并最終形成成熟 mRNA 的過程。4 重疊基因：不同基因的

7、核苷酸序列有時為相鄰兩個基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個基 因稱為重疊基因。5 假基因：在珠蛋白基因簇各片段核苷酸序列分析時發(fā)現(xiàn)，除了有正常的功能基因之外，還 有功能失活的特殊序列片段，它不能行使表達(dá)功能。該類核苷酸序列中存在的無表達(dá)功能的畸變核苷酸序列片段。6 衛(wèi)星 DNA：又稱隨體 DNA,不編碼蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄 RNA 的小片段高度重復(fù)一類小片段 DNA 序列，多富含 GC 堿基在 DNA 浮力密度實(shí)驗(yàn)中會在主峰旁形成些小峰，形似衛(wèi)星

8、分布而稱之。一般 5-10bp 短序列，人類為 171bp，保護(hù)和穩(wěn)定染色體7 基因組：表示某物種單倍體的總 DNA。對于二倍體高等生物其配子的 DNA 總和即為一組基因組不同生物基因組數(shù)目不同。8 LTR：即長末端重復(fù)序列，為 RNA 基因組的兩端含有的 U3RU5 兩個完全相同的正向重復(fù) 序列。具隨機(jī)整和能力，可用作病毒載體問答：1 什么叫做基因？何謂基因的新概念？基因的主要功能是什么?答：基因就是指編碼有最新 精品 Word

9、歡迎下載 可修改活性，可獨(dú)立存在與上游區(qū)、下游區(qū)或基因內(nèi)部，可進(jìn)行遠(yuǎn)距離增強(qiáng)啟動作用，而且無方 向性。問答 1 真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？ 答：順式作用元件有： 啟動子，增強(qiáng)子，沉默子，衰減子，終止子。作用特點(diǎn)：是能夠與 DNA 結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合的特定序列的 DNA 片段，決定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和 RNA 聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng)。2 真核表達(dá)調(diào)控的反式作用因子有哪些？其作用特點(diǎn)？答：反式作用元件：主要分為通用轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)

10、錄調(diào)節(jié)因子兩大類。作用特點(diǎn)：一，同一 DNA 序列可被不同蛋白質(zhì)識別；二：同一蛋白質(zhì)因子可與多種不同 DNA 序列發(fā)生聯(lián)系，多通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)先結(jié)合再影 響 DNA。三：蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-DNA 的結(jié)合，導(dǎo)致構(gòu)象上細(xì)微的改變，從而發(fā)揮調(diào)控作用。四：反式作用元件在合成過程中有相當(dāng)大的可變性和可塑性。4 常用的真核表達(dá)載體有哪些？并簡述其特點(diǎn)。答：主要有一下幾種：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，痘類病毒載體，HSV-I 單純皰疹病毒載體。特點(diǎn)：一，

11、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體：對細(xì)胞的感染效率高，并能表達(dá)整合的病毒基因；可以同時感染大量細(xì)胞；長時間感染細(xì)胞并不會發(fā)生毒害作用；宿主范圍十分廣泛；可以進(jìn)行 DNA 的單拷貝整合；但穩(wěn)定性差，安全性差，重組病毒滴度不高而且局限于感染分裂細(xì)胞。二，痘類病毒載體：對多種細(xì)胞敏感易于培養(yǎng)利 于大量生產(chǎn)制備；對外環(huán)境相對穩(wěn)定并易于保存運(yùn)輸；接種途徑簡單易行；利于多價疫苗的研究開發(fā)；利于大片段的外源性基因的插入，且不影響病毒的正常復(fù)制和表達(dá)，但是基因組分子量大

12、不易操作，沒有 mRNA 的剪切功能故不宜采用基因組 DNA，需使用無內(nèi)含 子的 cDNA。三，HSV-I 單純皰疹病毒載體：比較大利于大片段的外源性基因插入提供條件，而且插入容量大；可以感染神經(jīng)細(xì)胞。5 簡述真核，原核倆大表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)？答：一，真核生物 DNA 只有一小部分是裸露的，有核膜包裹；原核生物大部分屬于非結(jié)合狀態(tài)，且無核膜的阻隔，轉(zhuǎn)錄的 mRNA 直接在胞質(zhì)中進(jìn)行蛋白合成。二，真核生物 DNA 都有內(nèi)含子，可以剪接加以

13、去除；原核生物mRNA 的剪接加工能力。三，真核生物可以在需要時可以重排某些 DNA 片段和擴(kuò)增特定基因的機(jī)制，而原核生物沒有。四，真核生物有三種 mRNA 酶，可參與不同類型的 RNA 分子轉(zhuǎn)錄作用，而原核生物只有一種 RNA 酶。五，真核生物產(chǎn)生的 mRNA 分子壽命大多比原核生物長。六，真核生物具有對初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接能力。七，真核生物不存在操縱子結(jié)構(gòu)，原核生物多是。八，真核生物基因多拷貝，而原核生物含有很少的重復(fù)序列。第五章 第

14、五章 名詞解釋：1 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識別雙鏈 DNA 分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割 DNA 雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。2 同尾酶：有一些限制性核酸內(nèi)切酶識別 的堿基順序不完全恒定，即識別順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣黏性末端的兩種酶稱為同尾 酶，如 BamHⅠ和 Bgl Ⅱ。 3 同裂酶：識別序列相同，對甲基化切點(diǎn)敏感性不同的兩種酶 。如:Mbo Ⅰ和 Sau3AⅠ共同識別序列 GATC ，但對 GmeATC 切點(diǎn),前

15、者不能切，后者能切。4 甲基化酶：常見的有 dam 甲基化酶和 dcm 甲基化酶，可使相應(yīng)堿基甲基化。常用于使酶 切位點(diǎn)中的堿基甲基化而避免降解，保護(hù)酶切位點(diǎn)。5 Klenow 酶：為 DNA 聚合酶Ⅰ大片段，分子質(zhì)量為 7.6KD，是經(jīng)過枯草桿菌蛋白酶或胰蛋白酶分解 DNA 聚合酶Ⅰ，切除小亞基，保留的大亞基部分。這種酶只有 DNA 聚合酶的活 性和 3/外切酶的活性，但是沒有 5/外切酶活性。6 堿性磷酸酶：該酶的功能是以單鏈或

16、雙鏈的 DNA、RNA 為基質(zhì)，將 DAN 或 RNA 片段的 5’端的磷酸切除，產(chǎn)生 5’-OH7 逆轉(zhuǎn)錄酶：又稱為依賴 RNA 的 DNA 聚合酶，可以 RNA 為模板，逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA 第一鏈，這種酶具有聚合酶活性和 3’外切酶活性。8 DNA 連接酶(Ligase）:是一種能夠催化在雙股 DNA 鏈的 3′-OH 和 5′-P 之間形成磷酸二 酯鍵的酶，可連接互補(bǔ)粘性末端或平端以及缺口修復(fù)，不能連接單鏈 DNA,被連接的 D