粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物學(xué)研究.pdf

1、利用RB亮藍(lán)平板檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)，粗毛栓菌有較強(qiáng)的漆酶產(chǎn)生能力，其顯色反應(yīng)明顯強(qiáng)于黃孢原毛平革菌。對(duì)液體培養(yǎng)條件下粗毛栓菌產(chǎn)生漆酶的研究表明，2％以下的胰蛋白胨能明顯促進(jìn)漆酶的產(chǎn)生；高碳(1％葡萄糖)條件下產(chǎn)生的漆酶明顯高于低碳條件;高濃度銅離子(200μmmol/L)能有效促進(jìn)該菌漆酶的產(chǎn)生；胰蛋白胨—葡萄糖培養(yǎng)基(TG)和細(xì)菌用蛋白胨-2％葡萄糖培養(yǎng)基(PG)產(chǎn)生的漆酶活性最高?！　⊙芯苛?9種芳香類化合物對(duì)粗毛栓菌漆酶產(chǎn)生的影響，發(fā)

2、現(xiàn)27種對(duì)漆酶產(chǎn)生有促進(jìn)作用，其中對(duì)苯二酚作用最強(qiáng)；另外32種化合物在不同程度上抑制漆酶的產(chǎn)生，對(duì)硝基苯酚和2，6-二氯苯酚的抑制作用最強(qiáng)?！　∮梅亲冃跃郾０纺z電泳活性染色法研究了12種培養(yǎng)基對(duì)粗毛栓菌漆酶同工酶譜的影響。通過(guò)硫酸銨沉淀，DEAE-sepharoseFastFlow陰離子交換柱層析，SephadexG-100凝膠過(guò)濾層析和改進(jìn)的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳等方法，從粗毛栓菌分泌的胞外蛋白中分離了14種漆酶同工酶(依次

3、命名為L(zhǎng)ac1至Lac14)，純化產(chǎn)物通過(guò)SDS-PAGE電泳檢查，均已經(jīng)達(dá)到了電泳純?！　?duì)6個(gè)漆酶基因片段的核苷酸及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行同源性分析。lacA序列編碼由496個(gè)氨基酸殘基組成的漆酶，結(jié)構(gòu)中含有漆酶特有的3種類型的Cu2+結(jié)合位點(diǎn)，4個(gè)N-糖基化位點(diǎn)以及2個(gè)二硫鍵位點(diǎn)。同源性分析結(jié)果顯示，該cDNA序列出與其它生物的漆酶基因有較高的同源性，但差異也是明顯的。　　以重組質(zhì)粒pGEM-1500a為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反