DLC-1基因在結(jié)腸癌細(xì)胞sw480中表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制及其抑癌作用的初步研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察去甲基化藥物5-氮雜胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-dC)處理前后結(jié)腸癌細(xì)胞sw480 DLC-1(deleted in liver cancer)表達(dá)水平、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和侵襲力的改變，初步探討DLC-1基因在結(jié)腸癌細(xì)胞sw480中表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制及其抑癌特性。 方法： 1、RT-PCR、Western blot對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞sw480和CaC02 DLC-1基因mRNA及

2、蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 2、用濃度為2.5mg/L的去甲基化藥物5-Aza-dC連續(xù)處理結(jié)腸癌細(xì)胞sw480和CaCO2三天，應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)藥物處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞sw480和CaCo2 DLC-1基因的表達(dá)情況。 3、四唑鹽比色法[3-(4，5)-dimethylthiahiazo(-Z-y1)-3，5-diphenytetrazoliumromide，MTT]檢測(cè)給藥前后結(jié)腸癌細(xì)胞sw480和CaC02細(xì)胞增

3、殖的改變情況。 4、流式細(xì)胞儀(Flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測(cè)給藥前后結(jié)腸癌細(xì)胞sw480細(xì)胞周期的變化。 5、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)給藥前后結(jié)腸癌細(xì)胞sw480侵襲力的改變。 結(jié)果： 1、 RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果提示DLC-1mRNA及其蛋白水平在在結(jié)腸癌細(xì)胞sw480呈陰性表達(dá)，而結(jié)腸癌細(xì)胞CaCo2呈陽(yáng)性表達(dá)。 2、用濃度為2.5mg/L的去甲

4、基化藥物5-Aza-dC連續(xù)處理結(jié)腸癌細(xì)胞sw480和CaCo2三天，可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞sw480的DLC-1表達(dá)，而結(jié)腸癌細(xì)胞CaCo2的DLC-1表達(dá)前后沒(méi)有變化3、MTT、FCM、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，與5-Aza-dC處理前相比，DLC-1陰性表達(dá)的結(jié)腸癌細(xì)胞sw480的細(xì)胞增殖明顯降低，細(xì)胞周期被阻滯在G<,2>期，其侵襲力顯著下降，提示DLC-1表達(dá)后可影響該細(xì)胞的生物學(xué)行為。 結(jié)論: 1、明