歐當(dāng)歸內(nèi)酯A的生物利用度及其對(duì)Aβ清除的影響.pdf

1、背景:
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)即老年性癡呆，是常見的進(jìn)行性加重的神經(jīng)退行性疾病，可因并發(fā)癥而死亡。發(fā)病率隨年齡而增加，患病率隨著步入老齡化社會(huì)而逐步增加。AD將成為醫(yī)學(xué)界和公眾都關(guān)注的重大健康問(wèn)題，且目前并無(wú)理想的治療藥物，而中醫(yī)藥相關(guān)研究因其多途徑、多靶點(diǎn)的治療機(jī)制正成為研究熱點(diǎn)。
　　目的:
　　探討LA對(duì)M146L細(xì)胞（雙轉(zhuǎn)APP/PS1基因的CHO細(xì)胞）胞內(nèi)及胞外Aβ1

2、-42的調(diào)節(jié)作用及作用機(jī)制，為抗AD的研究提供參考。并通過(guò)探討當(dāng)歸芍藥散醇提物、川芎醇提物和川芎有效成分歐當(dāng)歸內(nèi)酯A(levistolide A，LA)的含量測(cè)定及其在SD大鼠血漿和腦中的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程，研究提高歐當(dāng)歸內(nèi)酯A的生物利用度的方法，為延長(zhǎng)吸收尋找更有效的手段。
　　方法:
　　1.藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　(1)不同濃度LA對(duì)M146L的細(xì)胞活力測(cè)定（CCK-8法）:檢測(cè)細(xì)胞存活率，明確藥物的無(wú)毒最佳濃度和作用時(shí)間。

3、
　　(2)ELISA法檢測(cè)LA對(duì)M146L細(xì)胞中Aβ1-42產(chǎn)生量的影響。
　　(3)用Western blot法檢測(cè)LA作用于M146L細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞內(nèi)外Aβ1-42蛋白表達(dá)量的影響。
　　2.藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　(1)川芎醇提物和當(dāng)歸芍藥散醇提物中LA的含量測(cè)定
　　分別制備當(dāng)歸芍藥散醇提物和川芎醇提物，建立并驗(yàn)證LA含量測(cè)定的HPLC-UV方法，包括線性，準(zhǔn)確性，重復(fù)性，檢測(cè)限，定量限，穩(wěn)定性的驗(yàn)證。<

4、br>　　(2) LA與川芎醇提物和當(dāng)歸芍藥散醇提物中LA的藥代動(dòng)力學(xué)比較研究
　?、俳C-MS/MS測(cè)定大鼠LA血藥濃度法。
　　32只300g左右雄性SD鼠隨機(jī)分為4組:單體灌胃組、藥材灌胃組、復(fù)方灌胃組（劑量為20mg/kg）和單體靜注組(劑量為2mg/kg)，在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)予連續(xù)眼球后靜脈取血，于LC-MS/MS中測(cè)定其血藥含量，繪制時(shí)間-藥物濃度曲線，用NONMEM Programversion1.1軟件擬合藥動(dòng)

5、參數(shù)，并對(duì)各組藥動(dòng)參數(shù)進(jìn)行比較。
　　②建立LC-MS/MS測(cè)定大鼠LA腦藥濃度法。
　　把24只300g左右的雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組6只，尾靜脈注射LA2mg/kg，于給藥后0.03，0.17，0.5，4h斷頭取腦。于LC-MS/MS中測(cè)定其腦藥含量，繪制時(shí)間-藥物濃度曲線，用NONMEM Program version1.1軟件擬合藥動(dòng)參數(shù)，進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　1.藥效學(xué)實(shí)驗(yàn):
　　(1

6、)濃度為20mmol/L的LA溶液對(duì)細(xì)胞活性有影響，濃度為15，10，5，1，0mmol/L的LA溶液(DMSO終濃度為0.08％)對(duì)細(xì)胞活性沒(méi)有影響，無(wú)細(xì)胞毒性。
　　(2)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用不同濃度的LA對(duì)M146L細(xì)胞干預(yù)24小時(shí)后，15mM、10mM的濃度均能降低細(xì)胞外Aβ1-42的含量(P＜0.05)。
　　(3) WB結(jié)果顯示15mM、10mM的LA濃度能下調(diào)細(xì)胞內(nèi)外Aβ1-42的表達(dá)量(P＜0.05)

7、。
　　2.藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn):
　　(1)經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，當(dāng)歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測(cè)定的HPLC-UV方法符合體外藥物含量測(cè)定的方法學(xué)要求。經(jīng)測(cè)定，當(dāng)歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA的含量分別為0.119％和3.2％。
　　(2)經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，大鼠血漿中當(dāng)歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測(cè)定的HPLC方法符合體外藥物含量測(cè)定的方法學(xué)指導(dǎo)原則的要求。測(cè)定各組LA的血藥濃度并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，LA在SD大鼠血漿內(nèi)

8、的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程為二房室模型。復(fù)方組的t1/2和AUC0→∞值比其他組的大(P＜0.05)，LA的生物利用度為7.5％。
　　(3)經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，大鼠全腦中當(dāng)歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測(cè)定的HPLC-UV方法符合體外藥物含量測(cè)定方法學(xué)指導(dǎo)原則的要求。測(cè)定各組LA的腦藥濃度并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，LA能透過(guò)血腦屏障，在給藥后30分鐘達(dá)到最大濃度(約43ng/mL)。
　　結(jié)論:
　　1.LA能透過(guò)血腦屏障，從而發(fā)揮對(duì)A