歐當歸內酯A的生物利用度及其對Aβ清除的影響.pdf

1、背景:
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)即老年性癡呆，是常見的進行性加重的神經退行性疾病，可因并發(fā)癥而死亡。發(fā)病率隨年齡而增加，患病率隨著步入老齡化社會而逐步增加。AD將成為醫(yī)學界和公眾都關注的重大健康問題，且目前并無理想的治療藥物，而中醫(yī)藥相關研究因其多途徑、多靶點的治療機制正成為研究熱點。
　　目的:
　　探討LA對M146L細胞（雙轉APP/PS1基因的CHO細胞）胞內及胞外Aβ1

2、-42的調節(jié)作用及作用機制，為抗AD的研究提供參考。并通過探討當歸芍藥散醇提物、川芎醇提物和川芎有效成分歐當歸內酯A(levistolide A，LA)的含量測定及其在SD大鼠血漿和腦中的藥代動力學過程，研究提高歐當歸內酯A的生物利用度的方法，為延長吸收尋找更有效的手段。
　　方法:
　　1.藥效學實驗
　　(1)不同濃度LA對M146L的細胞活力測定（CCK-8法）:檢測細胞存活率，明確藥物的無毒最佳濃度和作用時間。

3、
　　(2)ELISA法檢測LA對M146L細胞中Aβ1-42產生量的影響。
　　(3)用Western blot法檢測LA作用于M146L細胞后，對細胞內外Aβ1-42蛋白表達量的影響。
　　2.藥動學實驗
　　(1)川芎醇提物和當歸芍藥散醇提物中LA的含量測定
　　分別制備當歸芍藥散醇提物和川芎醇提物，建立并驗證LA含量測定的HPLC-UV方法，包括線性，準確性，重復性，檢測限，定量限，穩(wěn)定性的驗證。<

4、br>　　(2) LA與川芎醇提物和當歸芍藥散醇提物中LA的藥代動力學比較研究
　?、俳C-MS/MS測定大鼠LA血藥濃度法。
　　32只300g左右雄性SD鼠隨機分為4組:單體灌胃組、藥材灌胃組、復方灌胃組（劑量為20mg/kg）和單體靜注組(劑量為2mg/kg)，在相應時間點予連續(xù)眼球后靜脈取血，于LC-MS/MS中測定其血藥含量，繪制時間-藥物濃度曲線，用NONMEM Programversion1.1軟件擬合藥動

5、參數，并對各組藥動參數進行比較。
　?、诮C-MS/MS測定大鼠LA腦藥濃度法。
　　把24只300g左右的雄性SD大鼠隨機分為4組，每組6只，尾靜脈注射LA2mg/kg，于給藥后0.03，0.17，0.5，4h斷頭取腦。于LC-MS/MS中測定其腦藥含量，繪制時間-藥物濃度曲線，用NONMEM Program version1.1軟件擬合藥動參數，進行比較。
　　結果:
　　1.藥效學實驗:
　　(1

6、)濃度為20mmol/L的LA溶液對細胞活性有影響，濃度為15，10，5，1，0mmol/L的LA溶液(DMSO終濃度為0.08％)對細胞活性沒有影響，無細胞毒性。
　　(2)ELISA實驗結果顯示，使用不同濃度的LA對M146L細胞干預24小時后，15mM、10mM的濃度均能降低細胞外Aβ1-42的含量(P＜0.05)。
　　(3) WB結果顯示15mM、10mM的LA濃度能下調細胞內外Aβ1-42的表達量(P＜0.05)

7、。
　　2.藥動學實驗:
　　(1)經方法學驗證，當歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測定的HPLC-UV方法符合體外藥物含量測定的方法學要求。經測定，當歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA的含量分別為0.119％和3.2％。
　　(2)經方法學驗證，大鼠血漿中當歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測定的HPLC方法符合體外藥物含量測定的方法學指導原則的要求。測定各組LA的血藥濃度并進行數據分析發(fā)現(xiàn)，LA在SD大鼠血漿內

8、的藥動學過程為二房室模型。復方組的t1/2和AUC0→∞值比其他組的大(P＜0.05)，LA的生物利用度為7.5％。
　　(3)經方法學驗證，大鼠全腦中當歸芍藥散醇提物和川芎醇提物中LA含量測定的HPLC-UV方法符合體外藥物含量測定方法學指導原則的要求。測定各組LA的腦藥濃度并進行數據分析發(fā)現(xiàn)，LA能透過血腦屏障，在給藥后30分鐘達到最大濃度(約43ng/mL)。
　　結論:
　　1.LA能透過血腦屏障，從而發(fā)揮對A