亞洲帶絳蟲實驗感染乳豬肝臟的蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、目的：
　　采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和方法研究亞洲帶絳蟲實驗感染乳豬后15 d、75 d幼蟲寄生處肝臟組織與對照組肝組織的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，為進(jìn)一步研究亞洲帶絳蟲感染致乳豬肝損傷的分子機制提供基礎(chǔ)資料。
　　方法:
　　1.絳蟲標(biāo)本采集及蟲卵收集：將采自貴州省都勻市良畝鄉(xiāng)的亞洲帶絳蟲孕節(jié)解剖后，以生理鹽水反復(fù)清洗并離心收集蟲卵。2.乳豬實驗動物模型的建立及肝臟樣本采集：20日齡約克施格雜交乳豬12頭隨機分為實驗組和對照組各6頭

2、，實驗組以定量蟲卵15萬個/頭灌胃感染。于感染后第15 d和第75 d解剖乳豬，取實驗組囊尾蚴寄生處肝組織和對照組對應(yīng)部位肝組織。3.iTRAQ技術(shù)檢測分析實驗組和對照組乳豬肝臟的差異蛋白表達(dá)：主要步驟：蛋白質(zhì)制備、酶解和肽段定量、肽段標(biāo)記、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析、Mascot軟件查庫鑒定及定量分析和生物信息學(xué)分析。4.部分差異蛋白的驗證：運用實時熒光定量 PCR、免疫印跡方法和免疫組織化學(xué)技術(shù)對部分差異蛋白進(jìn)行進(jìn)一步驗證。
　　

3、結(jié)果：
　　1.根據(jù)一般形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，證實2條都勻采集的帶絳蟲為亞洲帶絳蟲。2.實驗組6頭乳豬均感染了亞洲帶絳蟲囊尾蚴，感染率為100%。囊尾蚴只存在于乳豬肝臟，其它組織未檢獲。3. iTRAQ分析結(jié)果顯示感染后第15 d實驗組與對照組比較共有187個蛋白質(zhì)（92個未知）有顯著差異；感染后第75 d實驗組與對照組比較共有158個蛋白質(zhì)（72個未知）有顯著差異。4.驗證結(jié)果顯示感染后第15 d，實驗組半胱氨酸天冬氨

4、酸蛋白酶3（Cysteine aspartyl proteinase3，Caspase-3）mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于對照組（P<0.05，P<0.01），感染后第75 d，實驗組Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)水平較對照組無明顯變化（P>0.05）；感染后第15 d和75 d，實驗組膜聯(lián)蛋白A5（Annexin A5，Anxa5）和甲硫氨酰氨肽酶2（Methionine aminopeptidase2,Metap2）mRNA和

5、蛋白表達(dá)水平均高于對照組（P<0.05，P<0.01），而實驗組細(xì)胞色素P4501A1（CytochromeP4501A1，Cyp1a1）mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于對照組（P<0.05，P<0.01）；免疫組化結(jié)果顯示 Caspase-3、Anxa5陽性染色主要定位在肝細(xì)胞胞質(zhì)中，呈黃色或棕黃色。
　　結(jié)論：
　　1. iTRAQ技術(shù)檢測到了亞洲帶絳蟲實驗感染乳豬肝臟的大量差異蛋白表達(dá)，為進(jìn)一步研究亞洲帶絳蟲致中間宿主乳豬