藏藥甘肅馬先性蒿化學(xué)成分及改善高原運動疲勞活性研究.pdf

1、目的：
　　1.分離藏藥甘肅馬先蒿的化學(xué)成分。
　　2.優(yōu)化藏藥甘肅馬先蒿的醇提工藝。
　　3.篩選藏藥甘肅馬先蒿抗氧化、抗缺氧及抗疲勞的活性組分。
　　4.建立藏藥甘肅馬先蒿苯乙醇苷類成分的純化工藝。
　　5.探究藏藥甘肅馬先蒿苯乙醇苷對高原運動性疲勞的改善作用。
　　方法：
　　1.采用D101型大孔吸附樹脂富集藏藥甘肅馬先蒿總環(huán)烯醚萜苷、聚酰胺柱富集總苯乙醇苷，以中壓柱層析技術(shù)快速分離、制

2、備上述化學(xué)部位中的目標(biāo)化合物，通過MS、NMR與DEPT等波譜方法分析，定性鑒定化合物。
　　2.建立HPLC法測定藏藥甘肅馬先蒿目標(biāo)成分（4個環(huán)烯醚萜苷及2個苯乙醇苷）的含量，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交試驗明確最佳醇提工藝。
　　3.運用大孔吸附樹脂結(jié)合聚酰胺柱富集分離藏藥甘肅馬先蒿水提物中的各化學(xué)部位（藥材水提物，苯乙醇苷，環(huán)烯醚萜苷，大極性成分）。以維生素C（VC）為陽性對照，采用體外抗氧化方法檢測各化

3、學(xué)部位的抗氧化能力；通過不同原理的缺氧模型，研究各化學(xué)部位的抗缺氧能力；采用負(fù)重游泳實驗制備運動型疲勞模型，通過負(fù)重游泳實驗測定小鼠力竭游泳時間，生化法測定血清、肝臟及骨骼及組織中的LA、糖原、ATP含量及CK活力變化，確定抗運動疲勞活性組分。
　　4.以Verbascoside和Isoverbascoside的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為考察指標(biāo)，通過靜態(tài)吸附和動態(tài)解吸附實驗，從01A1、D101、HPD100、AB-8、XAD-6、DM130、

4、DM-301、DM-201、YWD06B及YWD06C中篩選出最佳樹脂，確定藏藥甘肅馬先蒿總苯乙醇苷的最佳純化工藝。
　　5.72只BALB/C小鼠（♀♂各半），隨機分為常氧空白對照組（NG，滅菌注射用水0.2mL/20g）、缺氧模型對照組（HG，滅菌注射用水0.2mL/20g）、紅景天膠囊陽性對照組（Rhodiola，0.5g/kg）、苯乙醇苷低劑量組（PhGs-L，0.1g/kg）、苯乙醇苷中劑量組（PhGs-M，0.3g/k

5、g）、苯乙醇苷高劑量組（PhGs-H，0.5g/kg）6組，每組12只。除NG組置于本地海拔約1500m，其余各組均于模擬海拔8000m的高原環(huán)境飼養(yǎng)。缺氧暴露期間，每天于固定時間進入氧艙，在模擬海拔4000m的高原環(huán)境灌胃給藥7d，末次給藥1h后，于海拔4000m進行力竭游泳實驗。記錄小鼠力竭游泳時間，測定血常規(guī)指標(biāo)，HE染色觀察小鼠肝臟及骨骼肌組織病理改變，生化法檢測糖原、MDH、SDH、PK、LDH、PA、LA、Na+K+-ATP

6、、Ca2+Mg2+-ATP、BUN、SOD、MDA、GSH水平。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)MS、NMR與DEPT最終分離鑒定了5種環(huán)烯醚萜苷類化合物：Euphroside（1）、Ixoroside（2）、Plantarenaloside（3）、Boschanaloside（4）、Bosnarol（5）；3種苯乙醇苷類化合物：Crenatoside（6），Verbascoside（7），Isoverbascoside（8）。其中

7、化合物（2）、（3）、（4）、（5）、（6）均首次在藏藥甘肅馬先蒿中發(fā)現(xiàn)。
　　2.藏藥甘肅馬先蒿環(huán)烯醚萜苷及苯乙醇苷的最佳提取條件分別為8倍量的50％乙醇水溶液，提取1次，每次90min；8倍量的50%乙醇水溶液，提取3次，每次90min。產(chǎn)自青海西寧的甘肅馬先蒿中Euphroside、Ixoroside、Plantarenaloside、Boschanaloside、Verbascoside、Isoverbascoside含量

8、相對較高。
　　3.藏藥甘肅馬先蒿水提物、苯乙醇苷及環(huán)烯醚萜苷對DPPH、ABTS、OH自由基的半數(shù)清除率IC50分別為210.3、52.1、260.3μg/mL，196.3、72.1、503.9μg/mL，87.1、73.1、95.6μg/mL，即苯乙醇苷部位體外抗氧化能力最強；苯乙醇苷部位能顯著延長小鼠在常壓密閉、NaNO2中毒及模擬10000m海拔急性缺氧存活時間（P<0.01或P＜0.05）；苯乙醇苷部位可明顯的延長小鼠力

9、竭游泳時間（P<0.01），降低LA含量，增加糖原、ATP含量，增強CK活性（P<0.01或P＜0.05）。
　　4.藏藥甘肅馬先蒿苯乙醇苷純化工藝：最佳大孔樹脂型號為D101，上樣溶液質(zhì)量濃度為20mg/mL，上樣流速為3BV/h，先用3BV的水除雜，再用5.0 BV50%乙醇以2BV/h的流速洗脫，洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得總苯乙醇苷純化物，該純化物中Verbascoside和Isoverbascoside的質(zhì)量分

10、數(shù)為42.29%和28.51%。
　　5.藏藥甘肅馬先蒿苯乙醇苷各劑量組能顯著的延長高原環(huán)境下小鼠力竭游泳時間，維持小鼠肝臟及骨骼肌組織的正常形態(tài)，降低高原環(huán)境及力竭游泳導(dǎo)致的RBC、HCT、WBC、HGB、MCH、MCHC的明顯升高，顯著降低LA、BUN、MDA的含量，增加PA、GSH及肝/肌糖原含量，增強MDH、SDH、PK、Na+K+-ATP、Ca2+Mg2+-ATP及SOD活性，減弱LDH活性（P<0.01或P＜0.05）

11、。
　　結(jié)論：
　　1.該方法分析效果好，簡單易行，可用于甘肅馬先蒿中5種環(huán)烯醚萜類及3種苯乙醇苷類化合物的定性分析及快速制備。
　　2.該提取工藝合理、穩(wěn)定、可行。不同產(chǎn)地的藏藥甘肅馬先蒿環(huán)烯醚萜苷及苯乙醇苷含量存在一定的差異。
　　3.藏藥甘肅馬先蒿苯乙醇苷類成分具有較強的抗氧化及抗缺氧活性，是一種有潛力的天然抗氧化及抗缺氧物質(zhì)，也是甘肅馬先蒿的抗運動疲勞活性組分。
　　4.該方法高效快速、經(jīng)濟簡單、易