ERK1-2信號(hào)通路介導(dǎo)PDGF-CC誘導(dǎo)的鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的分子機(jī)制.pdf

1、研究背景和目的：
　　心肌纖維化是以心肌間質(zhì)內(nèi)心肌成纖維細(xì)胞過(guò)量增殖、膠原蛋白大量合成為特征的病理變化。其與冠心病、高血壓病、擴(kuò)張型心肌病、病毒性心肌炎等心血管疾病緊密聯(lián)系。心肌纖維化是許多心臟疾病末期的共同表現(xiàn)，臨床上以重度冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄病變?yōu)橹鞯男呐K病可引起心肌持續(xù)或反復(fù)缺血造成心肌纖維化，逐漸發(fā)展為心力衰竭，即慢性缺血性心肌病。ACEI或ARB類(lèi)藥物通過(guò)抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）可以改善心力衰竭預(yù)后

2、的機(jī)制可能與抑制心肌纖維化密切相關(guān)。心肌纖維化的具體發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前認(rèn)為除了RAAS系統(tǒng)在內(nèi)，細(xì)胞生長(zhǎng)因子、氧化應(yīng)激、炎性因子和血管內(nèi)皮功能受損等因素亦參與心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展，而現(xiàn)今對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)因子在心肌纖維化的文獻(xiàn)報(bào)道未見(jiàn)深入研究。心肌成纖維細(xì)胞（cardiac fibroblasts，CFs）是參與心肌纖維化的主要細(xì)胞，血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor，PDGF)是重要的細(xì)胞促

3、生長(zhǎng)因子，能刺激特定細(xì)胞分裂增殖。本研究通過(guò)在體外培養(yǎng)大鼠原代心肌成纖維細(xì)胞，觀察外源性PDGF-CC對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖、PDGF受體、ERK1/2信號(hào)通路和膠原蛋白表達(dá)這些指標(biāo)的影響，來(lái)探討ERK1/2信號(hào)通路在心肌纖維化中可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　取出生1-3天齡SD大鼠乳鼠心臟組織，差速貼壁法分離并純化心肌成纖維細(xì)胞，獲取第2-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。按藥物處理不同將細(xì)胞隨機(jī)分為三組，即對(duì)照組（CON組）、PD

4、GF-CC（P組）和PDGF-CC+U0126(ERK通路抑制劑)（PU組）。MTT比色法檢測(cè)各組心肌成纖維細(xì)胞的增殖情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)各組PDGF-α受體（platelet-derived growth factor receptor-α，PDGFR-α）、PDGFR-β、ERK1、ERK2、Ⅰ型膠原蛋白和Ⅲ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)水平，蛋白印跡法（Western blot）檢測(cè)各組磷酸化PDGFR-α（p

5、-PDGFR-α）、ERK1/2、p-ERK1/2、Ⅰ型膠原蛋白（ColⅠ）、III型膠原蛋白（ColⅢ）的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）MTT法顯示P組細(xì)胞數(shù)較CON組顯著增加(P<0.01)，而PU組細(xì)胞數(shù)較P組明顯減少(P<0.01)。
　?。?）qRT-PCR法顯示P組中PDGF-α受體（PDGFR-α）、ERK1、ERK2、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白（ColⅠ、ColⅢ）的mRNA表達(dá)水平均明顯高于CON組(

6、P<0.001)，PDGFR-β的mRNA表達(dá)量在P組與CON組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與P組相比，PU組中PDGFR-α、ERK1、ERK2、ColⅠ和ColⅢmRNA表達(dá)均明顯下降（P<0.01）。
　　（3）Western blot法顯示P組中磷酸化PDGFR-α（p-PDGFR-α）、ERK1/2、p-ERK1/2、 ColⅠ和ColⅢ的表達(dá)量均明顯高于CON組（P<0.001），PU組中p-PDGFR-α、E

7、RK1/2、p-ERK1/2、ColⅠ和ColⅢ蛋白表達(dá)量均顯著低于P組（P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　PDGF-CC具有誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞增殖并且促進(jìn)膠原蛋白合成的作用；PDGF-CC主要通過(guò)結(jié)合PDGFR-α激活ERK1/2信號(hào)通路，使膠原蛋白的合成增多，PDGFR-α/ERK1/2信號(hào)通路參與了心肌纖維化的發(fā)生；U0126通過(guò)抑制ERK1/2通路減弱了PDGF-CC致心肌纖維化效應(yīng)，可能在抗心肌纖維化方面具有一定