SIRT2在缺血性腦卒中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：SIRT2是sirtuins蛋白家族成員之一，具有NAD+依賴去乙?；腹δ堋IRT2被證實(shí)可通過其去乙?；孜飬⑴c缺血性心肌梗死、神經(jīng)退行性疾病等眾多疾病的病理生理過程。雖然 SIRT2蛋白在腦組織內(nèi)高表達(dá)，但目前對 SIRT2在缺血性腦卒中的作用尚不明確。本研究試圖探討缺血性腦卒中的人腦及小鼠 MCAO模型中的表達(dá)變化，并進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。
　　方法：⑴收集人腦尸檢標(biāo)本并采用免疫組織化學(xué)方法檢測并比較缺血性腦卒中患

2、者腦組織與正常腦組織內(nèi)SIRT2蛋白的表達(dá)變化；⑵采用小鼠MCAO模型，在缺血再灌注后不同時間點(diǎn)，采用Western blot、免疫組織化學(xué)及免疫熒光雙標(biāo)等方法檢測小鼠腦組織內(nèi)不同部位SIRT2蛋白的表達(dá)變化；⑶在原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的氧糖剝奪細(xì)胞模型中，采用Western blot及免疫熒光雙標(biāo)等方法檢測OGD后不同時間點(diǎn)SIRT2蛋白的表達(dá)變化；⑷采用Sirt2基因敲除及野生型小鼠制備MCAO模型，比較兩組之間梗死體積、梗死百分比及術(shù)

3、后神經(jīng)功能評分等指標(biāo)；⑸采用野生型小鼠制備MCAO模型，比較AGK2藥物抑制SIRT2蛋白組及對照組之間梗死體積、梗死百分比及術(shù)后神經(jīng)功能評分等指標(biāo)；⑹采用Sirt2基因敲除及野生型小鼠制備MCAO模型，比較兩組之間14-3-3蛋白家族成員表達(dá)變化。
　　結(jié)果：①人腦尸檢標(biāo)本免疫組織化學(xué)方法檢測SIRT2蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示在正常人腦 SIRT2陽性細(xì)胞較少呈零星散在分布，在缺血性腦梗死患者中 SIRT2陽性細(xì)胞數(shù)量增多；②在小鼠

4、MCAO后Western blot與免疫組織化學(xué)均顯示在缺血再灌注后皮層神經(jīng)元SIRT2表達(dá)量增加，表達(dá)量峰值出現(xiàn)在再灌注后12小時時間點(diǎn)，免疫熒光雙標(biāo)發(fā)現(xiàn) SIRT2蛋白的主要表達(dá)細(xì)胞類型為神經(jīng)元；③Western blot顯示原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元OGD后SIRT2表達(dá)量增加，表達(dá)量峰值出現(xiàn)在OGD后12小時時間點(diǎn)，免疫熒光雙標(biāo)確定SIRT2蛋白的主要表達(dá)細(xì)胞類型為神經(jīng)元；④Sirt2基因敲除與野生型小鼠MCAO后24小時，Sirt2基

5、因敲除組梗死體積大小、梗死百分比大小及術(shù)后神經(jīng)功能評分分值等均下降，兩組各指標(biāo)相比具有統(tǒng)計學(xué)意義；⑤野生型小鼠MCAO后AGK2藥物干預(yù)組與對照組相比梗死體積大小、梗死百分比大小及術(shù)后神經(jīng)功能評分分值等均下降，兩組各指標(biāo)相比具有統(tǒng)計學(xué)意義；⑥小鼠MCAO后24小時，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示14-3-3τ在Sirt2基因敲除小鼠胼胝體的少突膠質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)量明顯增高，14-3-3γ在Sirt2基因敲除與野生型組缺血再灌注后均有升高趨勢。