SIRT2在缺血性腦卒中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：SIRT2是sirtuins蛋白家族成員之一，具有NAD+依賴去乙酰化酶功能。SIRT2被證實可通過其去乙?；孜飬⑴c缺血性心肌梗死、神經(jīng)退行性疾病等眾多疾病的病理生理過程。雖然 SIRT2蛋白在腦組織內(nèi)高表達，但目前對 SIRT2在缺血性腦卒中的作用尚不明確。本研究試圖探討缺血性腦卒中的人腦及小鼠 MCAO模型中的表達變化，并進一步研究其作用機制。
　　方法：⑴收集人腦尸檢標本并采用免疫組織化學方法檢測并比較缺血性腦卒中患

2、者腦組織與正常腦組織內(nèi)SIRT2蛋白的表達變化；⑵采用小鼠MCAO模型，在缺血再灌注后不同時間點，采用Western blot、免疫組織化學及免疫熒光雙標等方法檢測小鼠腦組織內(nèi)不同部位SIRT2蛋白的表達變化；⑶在原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的氧糖剝奪細胞模型中，采用Western blot及免疫熒光雙標等方法檢測OGD后不同時間點SIRT2蛋白的表達變化；⑷采用Sirt2基因敲除及野生型小鼠制備MCAO模型，比較兩組之間梗死體積、梗死百分比及術(shù)

3、后神經(jīng)功能評分等指標；⑸采用野生型小鼠制備MCAO模型，比較AGK2藥物抑制SIRT2蛋白組及對照組之間梗死體積、梗死百分比及術(shù)后神經(jīng)功能評分等指標；⑹采用Sirt2基因敲除及野生型小鼠制備MCAO模型，比較兩組之間14-3-3蛋白家族成員表達變化。
　　結(jié)果：①人腦尸檢標本免疫組織化學方法檢測SIRT2蛋白的表達，結(jié)果顯示在正常人腦 SIRT2陽性細胞較少呈零星散在分布，在缺血性腦梗死患者中 SIRT2陽性細胞數(shù)量增多；②在小鼠

4、MCAO后Western blot與免疫組織化學均顯示在缺血再灌注后皮層神經(jīng)元SIRT2表達量增加，表達量峰值出現(xiàn)在再灌注后12小時時間點，免疫熒光雙標發(fā)現(xiàn) SIRT2蛋白的主要表達細胞類型為神經(jīng)元；③Western blot顯示原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元OGD后SIRT2表達量增加，表達量峰值出現(xiàn)在OGD后12小時時間點，免疫熒光雙標確定SIRT2蛋白的主要表達細胞類型為神經(jīng)元；④Sirt2基因敲除與野生型小鼠MCAO后24小時，Sirt2基

5、因敲除組梗死體積大小、梗死百分比大小及術(shù)后神經(jīng)功能評分分值等均下降，兩組各指標相比具有統(tǒng)計學意義；⑤野生型小鼠MCAO后AGK2藥物干預組與對照組相比梗死體積大小、梗死百分比大小及術(shù)后神經(jīng)功能評分分值等均下降，兩組各指標相比具有統(tǒng)計學意義；⑥小鼠MCAO后24小時，免疫組織化學結(jié)果顯示14-3-3τ在Sirt2基因敲除小鼠胼胝體的少突膠質(zhì)細胞胞漿內(nèi)表達量明顯增高，14-3-3γ在Sirt2基因敲除與野生型組缺血再灌注后均有升高趨勢。