帕瑞昔布鈉對膿毒癥腸屏障功能的保護效應及機制研究.pdf

1、目的：膿毒癥是機體對感染產生的一種全身炎癥反應，至今仍是重癥監(jiān)護病房引起患者死亡的主要原因之一[1-3]。腸粘膜屏障功能障礙和通透性增加常常伴隨著膿毒癥的發(fā)生和發(fā)展。腸粘膜屏障功能受損后引發(fā)的細菌移位會成為繼發(fā)膿毒癥的重要原因，而膿毒癥導致的腸組織血液供應下降及炎癥因子風暴可進一步加重腸粘膜的損傷，逐漸形成了惡性循環(huán)。評估腸屏障功能的狀態(tài)已經是判斷危重病人預后的重要環(huán)節(jié)，腸道的損傷是啟動MODS的重要因素，因此，如何保護和維持腸屏障的正

2、常功能已成為當前危重癥醫(yī)學領域重要的研究方向[4,5]。帕瑞昔布鈉（NSAIDs）是一種 COX-2特異性抑制劑，屬于非甾體類抗炎藥，可經靜脈注射或肌內注射，用藥后由肝臟羧酸酯酶水解為伐地昔布而起作用，其主要作用機制是阻斷花生四烯酸在 COX-2作用下合成前列腺素，降低前列腺素(PG)的水平[6]。研究發(fā)現(xiàn)，高水平前列腺素可導致腸屏障功能的損傷，而環(huán)氧合酶-2抑制劑通過抑制COX-2的表達來減少前列腺素合成，可能對膿毒癥導致的腸屏障功能

3、障礙具有改善作用[7-10]。本課題擬研究環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉對膿毒癥大鼠腸屏障功能的作用，并進一步探討帕瑞昔布鈉對腸粘膜屏障功能的保護作用的相關機制。
　　方法：第一部分：采用盲腸結扎穿孔法（CLP）誘導膿毒癥大鼠腸損傷模型。72只 Wistar大鼠隨機分為6組（n=12/組）：假手術組（Sham組）、假手術組+10mg/kg帕瑞昔布鈉（Sham+10mg/kg Parecoxib組），膿毒癥組（CLP組）、膿毒癥+0.

4、1mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+0.1mg/kg Parecoxib組）、膿毒癥+1.0mg/kg帕瑞昔布鈉（ CLP+1.0mg/kg Parecoxib組）、膿毒癥+10mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+10mg/kg Parecoxib組）。帕瑞昔布鈉治療組大鼠于假手術或CLP后20min腹腔注射帕瑞昔布鈉，建模12h后重復給藥一次。CLP組和Sham組大鼠僅經腹腔注射等量生理鹽水。觀察各組大鼠術后7天內的存活情況，并篩選最佳治療方案

5、。于假手術或CLP后24h，通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）或比色法檢測各組大鼠血漿二胺氧化酶（DAO）和 D-乳酸的濃度來觀察各組大鼠腸損傷的情況；通過Western Blot法檢測各組大鼠腸組織緊密連接蛋白ZO-1和Claudin-1的蛋白表達情況；通過比色法檢測腸組織髓過氧化物酶 MPO的活性水平來觀察各組大鼠腸組織的炎癥水平。
　　第二部分：利用盲腸結扎穿孔法建立膿毒癥大鼠模型。32只Wistar大鼠隨機分為4組（n=8/

6、組）：假手術組（Sham）、假手術組+10mg/kg帕瑞昔布鈉（Sham+10mg/kg Parecoxib），膿毒癥組（CLP）、膿毒癥+10mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+10mg/kg Parecoxib）。模型建立后20min，向大鼠腹腔注射帕瑞昔布鈉，每隔12小時重復注射一次，給予假手術組和CLP組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水。于大鼠頸動脈進行插管以連續(xù)監(jiān)測基礎血流動力學（MAP、HR）且便于行血氣分析監(jiān)測，與造模后0h、6h和1

7、2h行血氣分析，于造模后6h、12h和24h測定小腸腸系膜的微循環(huán)變化[總血管密度（TVD）、灌注血管密度（PVD）、灌注血管比例（PPV）及微血管血流指數（MFI）]。
　　第三部分：利用盲腸結扎穿孔法建立膿毒癥大鼠模型。將48只 Wistar雄性大鼠隨機分為6個實驗組，假手術組（Sham組）、膿毒癥組（CLP組）、假手術+帕瑞昔布鈉組（Sham+Parecoxib組）、膿毒癥+帕瑞昔布鈉組（CLP+Parecoxib組）、膿毒

8、癥+NS-398組（CLP+NS-398組）和膿毒癥+帕瑞昔布鈉+NS-398組（CLP+Parecoxib+NS-398組）。CLP+NS-398組和 CLP+ Parecoxib+NS-398組于術前2h腹腔注射NS-39810mg/kg。于假手術或CLP后6、12和24 h，檢測各組大鼠血清和腸組織中TNF-α，IL-6和IL-10的水平，PGE2、mPGES-1和EP4的蛋白表達和mRNA水平。給予COX-2抑制劑（NS-398

9、）預處理后，于術后24 h檢測各組大鼠腸組織TNF-α，IL-6和IL-10的水平。
　　結果：第一部分：腹腔注射10mg/kg帕瑞昔布鈉能有效提高膿毒癥大鼠7 d內的存活率（P<0.05）。帕瑞昔布鈉治療明顯降低腸組織病理損傷的評分，減少腸組織MPO的活性（P<0.05），降低膿毒癥大鼠腸組織DAO和D-乳酸的水平（ P<0.05）。帕瑞昔布鈉治療膿毒癥大鼠后腸組織緊密連接蛋白 ZO-1和Claudin-1的蛋白表達上調（P<0

10、.05）。
　　第二部分：環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可明顯提高膿毒癥大鼠平均動脈壓（MAP）和降低心率（HR）（P<0.05），改善血流動力學；環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可有效改善膿毒癥大鼠的動脈血氣指標，降低乳酸水平（P<0.05）；環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可增加膿毒癥大鼠腸系膜微循環(huán)總血管的密度、灌注血管密度及微循環(huán)的血流指數（P<0.05）。
　　第三部分：環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉明顯降低膿毒癥