帕瑞昔布鈉對(duì)膿毒癥腸屏障功能的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、目的：膿毒癥是機(jī)體對(duì)感染產(chǎn)生的一種全身炎癥反應(yīng)，至今仍是重癥監(jiān)護(hù)病房引起患者死亡的主要原因之一[1-3]。腸粘膜屏障功能障礙和通透性增加常常伴隨著膿毒癥的發(fā)生和發(fā)展。腸粘膜屏障功能受損后引發(fā)的細(xì)菌移位會(huì)成為繼發(fā)膿毒癥的重要原因，而膿毒癥導(dǎo)致的腸組織血液供應(yīng)下降及炎癥因子風(fēng)暴可進(jìn)一步加重腸粘膜的損傷，逐漸形成了惡性循環(huán)。評(píng)估腸屏障功能的狀態(tài)已經(jīng)是判斷危重病人預(yù)后的重要環(huán)節(jié)，腸道的損傷是啟動(dòng)MODS的重要因素，因此，如何保護(hù)和維持腸屏障的正

2、常功能已成為當(dāng)前危重癥醫(yī)學(xué)領(lǐng)域重要的研究方向[4,5]。帕瑞昔布鈉（NSAIDs）是一種 COX-2特異性抑制劑，屬于非甾體類抗炎藥，可經(jīng)靜脈注射或肌內(nèi)注射，用藥后由肝臟羧酸酯酶水解為伐地昔布而起作用，其主要作用機(jī)制是阻斷花生四烯酸在 COX-2作用下合成前列腺素，降低前列腺素(PG)的水平[6]。研究發(fā)現(xiàn)，高水平前列腺素可導(dǎo)致腸屏障功能的損傷，而環(huán)氧合酶-2抑制劑通過(guò)抑制COX-2的表達(dá)來(lái)減少前列腺素合成，可能對(duì)膿毒癥導(dǎo)致的腸屏障功能

3、障礙具有改善作用[7-10]。本課題擬研究環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉對(duì)膿毒癥大鼠腸屏障功能的作用，并進(jìn)一步探討帕瑞昔布鈉對(duì)腸粘膜屏障功能的保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：第一部分：采用盲腸結(jié)扎穿孔法（CLP）誘導(dǎo)膿毒癥大鼠腸損傷模型。72只 Wistar大鼠隨機(jī)分為6組（n=12/組）：假手術(shù)組（Sham組）、假手術(shù)組+10mg/kg帕瑞昔布鈉（Sham+10mg/kg Parecoxib組），膿毒癥組（CLP組）、膿毒癥+0.

4、1mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+0.1mg/kg Parecoxib組）、膿毒癥+1.0mg/kg帕瑞昔布鈉（ CLP+1.0mg/kg Parecoxib組）、膿毒癥+10mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+10mg/kg Parecoxib組）。帕瑞昔布鈉治療組大鼠于假手術(shù)或CLP后20min腹腔注射帕瑞昔布鈉，建模12h后重復(fù)給藥一次。CLP組和Sham組大鼠僅經(jīng)腹腔注射等量生理鹽水。觀察各組大鼠術(shù)后7天內(nèi)的存活情況，并篩選最佳治療方案

5、。于假手術(shù)或CLP后24h，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）或比色法檢測(cè)各組大鼠血漿二胺氧化酶（DAO）和 D-乳酸的濃度來(lái)觀察各組大鼠腸損傷的情況；通過(guò)Western Blot法檢測(cè)各組大鼠腸組織緊密連接蛋白ZO-1和Claudin-1的蛋白表達(dá)情況；通過(guò)比色法檢測(cè)腸組織髓過(guò)氧化物酶 MPO的活性水平來(lái)觀察各組大鼠腸組織的炎癥水平。
　　第二部分：利用盲腸結(jié)扎穿孔法建立膿毒癥大鼠模型。32只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組（n=8/

6、組）：假手術(shù)組（Sham）、假手術(shù)組+10mg/kg帕瑞昔布鈉（Sham+10mg/kg Parecoxib），膿毒癥組（CLP）、膿毒癥+10mg/kg帕瑞昔布鈉（CLP+10mg/kg Parecoxib）。模型建立后20min，向大鼠腹腔注射帕瑞昔布鈉，每隔12小時(shí)重復(fù)注射一次，給予假手術(shù)組和CLP組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水。于大鼠頸動(dòng)脈進(jìn)行插管以連續(xù)監(jiān)測(cè)基礎(chǔ)血流動(dòng)力學(xué)（MAP、HR）且便于行血?dú)夥治霰O(jiān)測(cè)，與造模后0h、6h和1

7、2h行血?dú)夥治?，于造模?h、12h和24h測(cè)定小腸腸系膜的微循環(huán)變化[總血管密度（TVD）、灌注血管密度（PVD）、灌注血管比例（PPV）及微血管血流指數(shù)（MFI）]。
　　第三部分：利用盲腸結(jié)扎穿孔法建立膿毒癥大鼠模型。將48只 Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，假手術(shù)組（Sham組）、膿毒癥組（CLP組）、假手術(shù)+帕瑞昔布鈉組（Sham+Parecoxib組）、膿毒癥+帕瑞昔布鈉組（CLP+Parecoxib組）、膿毒

8、癥+NS-398組（CLP+NS-398組）和膿毒癥+帕瑞昔布鈉+NS-398組（CLP+Parecoxib+NS-398組）。CLP+NS-398組和 CLP+ Parecoxib+NS-398組于術(shù)前2h腹腔注射NS-39810mg/kg。于假手術(shù)或CLP后6、12和24 h，檢測(cè)各組大鼠血清和腸組織中TNF-α，IL-6和IL-10的水平，PGE2、mPGES-1和EP4的蛋白表達(dá)和mRNA水平。給予COX-2抑制劑（NS-398

9、）預(yù)處理后，于術(shù)后24 h檢測(cè)各組大鼠腸組織TNF-α，IL-6和IL-10的水平。
　　結(jié)果：第一部分：腹腔注射10mg/kg帕瑞昔布鈉能有效提高膿毒癥大鼠7 d內(nèi)的存活率（P<0.05）。帕瑞昔布鈉治療明顯降低腸組織病理?yè)p傷的評(píng)分，減少腸組織MPO的活性（P<0.05），降低膿毒癥大鼠腸組織DAO和D-乳酸的水平（ P<0.05）。帕瑞昔布鈉治療膿毒癥大鼠后腸組織緊密連接蛋白 ZO-1和Claudin-1的蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0

10、.05）。
　　第二部分：環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可明顯提高膿毒癥大鼠平均動(dòng)脈壓（MAP）和降低心率（HR）（P<0.05），改善血流動(dòng)力學(xué)；環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可有效改善膿毒癥大鼠的動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)，降低乳酸水平（P<0.05）；環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉治療可增加膿毒癥大鼠腸系膜微循環(huán)總血管的密度、灌注血管密度及微循環(huán)的血流指數(shù)（P<0.05）。
　　第三部分：環(huán)氧合酶-2抑制劑帕瑞昔布鈉明顯降低膿毒癥