不同pH值酸性氧化電位水對多重耐藥菌及生物被膜殺滅作用的應用研究.pdf

1、目的：
　　1、觀察不同pH值EOW對臨床分離的MRSA與MDR-PA的殺滅效果。
　　2、以硅膠膜為載體，建立體外細菌生物被膜模型，明確體外生物被膜形成時間。
　　3、觀察不同pH值EOW對臨床分離的MDR-PA與MRSA生物被膜殺滅效果。
　　方法：
　　1、收集臨床分離的MDR-PA和MRSA各十株，制備合適濃度的菌懸液備用。根據(jù)不同pH值，將EOW分為三組，pH<3.0、pH在4.0-5.0之間和p

2、H在6.0-7.0之間，對照組為苯扎溴銨組和生理鹽水組。將制備好的菌懸液加入到以上不同的處理組，采用懸液殺菌實驗，監(jiān)測不同pH值EOW作用1 min、3 min和5 min對MDR-PA和MRSA的殺滅效果。通過活菌計數(shù)，比較各組殺菌率。
　　2、建立生物被膜體外模型，將臨床收集的MDR-PA和MRSA制成合適濃度的菌懸液備用。將硅膠膜進行高壓蒸汽滅菌放入到24孔板中，加入菌懸液和培養(yǎng)液，培養(yǎng)1 d和3 d，用銀染法和掃描電鏡觀察

3、被膜形成情況。
　　3、將制備好的生物被膜片加入到三組不同pH值的EOW中，分別作用5 min、10 min、20 min后，觀察不同pH值EOW對MDR-PA和MRSA生物被膜的殺菌效果。用平板計數(shù)法進行活菌計數(shù)，計算殺菌率；并用掃描電鏡觀察作用前后各組被膜形態(tài)的變化；熒光顯微鏡觀察作用前后被膜表面死菌量的變化，評估殺菌效果。
　　結(jié)果：
　　1、通過懸液殺菌實驗，三組不同pH值EOW作用1 min，對MDR-PA的

4、殺菌率分別為98.51％、99.53%、99.74%，作用3 min和5 min，殺菌率均達100%，三組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。而苯扎溴銨組對MDR-PA作用1 min、3 min、5 min殺菌率分別為，48.71%、70.75%、84.51%，與三組 EOW組差異明顯，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；三組不同pH值EOW和苯扎溴銨對MRSA作用1 min、3 min、5 min殺菌率均為100%，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.

5、05）。
　　2、培養(yǎng)1 d，銀染法發(fā)現(xiàn)載體表面有散在的黑色斑點，掃描電鏡顯示硅膠膜表面有散在的菌落聚集，表明生物被膜未形成；培養(yǎng)3 d，銀染法發(fā)現(xiàn)載體表面有片狀黑色絮狀物形成，掃描電鏡顯示載體表面已經(jīng)形成片狀的菌落聚集，表明生物被膜已經(jīng)形成。
　　3、生物被膜殺菌結(jié)果顯示，三組不同pH值EOW對MDR-PA生物被膜，作用5 min和10 min殺菌率均達99%以上，作用20 min均達100%，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.

6、05）；對MRSA生物被膜作用5 min殺菌率均達99%以上，作用10 min和20 min殺菌率均達99.99%以上，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4、掃描電鏡在作用不同時間觀察被膜形態(tài)變化，作用5min，細菌開始變皺，形態(tài)發(fā)生輕微變化，作用10 min，細菌皺折明顯，個別細菌破裂，作用20 min發(fā)現(xiàn)大量細菌破裂。熒光染色結(jié)果顯示，與對照組相比，作用5 min、10 min、20 min，死菌數(shù)量明顯增多，且差異不

7、明顯，這與活菌計數(shù)一致。
　　結(jié)論：
　　1、三組不同pH值EOW對MDR-PA殺菌效果相同且均優(yōu)于苯扎溴銨，對MRSA的殺菌效果與苯扎溴銨相同，但苯扎溴銨殺菌譜窄，推薦使用EOW。
　　2、以硅膠膜為載體，培養(yǎng)3d可以形成細菌生物被膜。
　　3、三組不同pH值EOW對MDR-PA和MRSA生物被膜殺菌效果一致，而偏中性氧化電位水，無腐蝕性且能穩(wěn)定有效氯，保證殺菌效果，推薦將NEW用于臨床耐藥菌感染或已形成生物被