TROP2在肺腺癌中的表達及其意義.pdf

1、第一章：TROP2在肺腺癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　目的：探討TROP2在人肺腺癌細胞系、人肺腺癌組織中的表達及其臨床意義。
　　方法：免疫組織化學(xué)方法檢測68例肺腺癌組織其中包含有20例癌旁組織的TR OP2的表達，用統(tǒng)計學(xué)方法分析其與臨床病理特征的相關(guān)性；RT-qPCR檢測標(biāo)本：38例肺腺癌組織及其癌旁組織和肺腺癌細胞系 H1299、SPCA-1、PC-9、A549及正常人支氣管上皮細胞株 HBE中TRO

2、P2 mRNA的表達情況，Western Blot檢查肺腺癌細胞株中TROP2蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、TROP2在癌旁組織未見或少見表達，支氣管黏膜、肺泡壁是其表達的主要部位，其陽性表達率為15％（3/20）。TROP2在肺腺癌組織中表達于腫瘤細胞的胞漿和胞膜，為大小不等的棕黃顆粒，細胞核不著色；TROP2的陽性表達率為54.4%（38/68）；肺腺癌組TROP2陽性表達率高于癌旁組織組。在肺腺癌組中，TROP

3、2的表達與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期表現(xiàn)出正相關(guān)性，而與年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤T分期呈現(xiàn)出無相關(guān)性。
　　2、癌旁組織中TROP2 mRNA的相對表達量為（0.159±0.009），而TROP2 mRNA在肺腺癌組織中相對表達量為（1.153±0.077），明顯高于癌旁組織中的表達量。
　　3、RT-q PCR檢測肺腺癌細胞系中 TROP2 mRNA表達，結(jié)果顯示：TROP2的表達量由高到低依次為：PC-9>

4、SPCA-1>H1299>A549>HBE。 Western Blot檢測TROP2蛋白表達，結(jié)果顯示：TROP2的表達量由高到低依次為PC-9>SPCA-1>H1299>A549>HBE。
　　結(jié)論：
　　1、TROP2在肺腺癌組織中高表達，與癌旁組織中的表達比較存在統(tǒng)計學(xué)差異；
　　2、TROP2的表達與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期表現(xiàn)出正相關(guān)性，而與年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤T分期呈現(xiàn)出無相關(guān)性；

5、>　　3、TROP2在肺腺癌細胞系中高表達，在PC-9細胞中更高。
　　第二章：TROP2基因表達質(zhì)粒和TROP2-shRNA質(zhì)粒構(gòu)建及肺腺癌細胞株的篩選
　　目的：為了進一步研究肺腺癌中TROP2的作用機制，我們構(gòu)建TROP2基因表達質(zhì)粒pcDNA3.1-TROP2和干擾質(zhì)粒shRNA-TROP2質(zhì)粒，并構(gòu)建TROP2高/低表達肺腺癌細胞模型。
　　方法：
　　1、通過基因克隆技術(shù)獲得人TROP2基因cDNA序

6、列，然后將該cDNA序列經(jīng)克隆，酶切，并連接到載體pcDNA3.1上，構(gòu)建TROP2基因表達質(zhì)粒pc DNA3.1-TROP2，并構(gòu)建過表達TROP2的肺腺癌A549穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，利用RT-q PCR及免疫印跡法鑒定表達產(chǎn)物；
　　2、針對人TROP2基因設(shè)計三條shRNA后，應(yīng)用PLKO.1載體構(gòu)建TROP2-shRNA干擾質(zhì)粒，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染PC-9細胞并進行RT-qPCR及免疫印跡法鑒定表達產(chǎn)物，篩選出干擾效果最佳的sh

7、R NA。并構(gòu)建低表達TROP2的肺腺癌細胞模型。
　　結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建pcDNA3.1-TROP2表達質(zhì)粒；
　　2、以A549細胞為基礎(chǔ)成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達TROP2的肺腺癌細胞系模型；
　　3、成功構(gòu)建TROP2干擾質(zhì)粒T ROP2-shRNA，經(jīng) Western Blot及RT-qPCR鑒定顯示TROP2-shRNA-2的干擾效果最好；
　　4、將TROP2-shRNA-2轉(zhuǎn)染到PC-9肺腺