年齡因素與大鼠急性酒精性肝損傷的相關(guān)性及骨髓間充質(zhì)干細胞對急性酒精性肝損傷保護作用的初步研究.pdf

1、目的:
　　過量飲酒可引起多器官損傷，其中以肝臟損傷最為顯著。酒精性肝病(alcoholliver disease，ALD)是導(dǎo)致終末期肝病的主要原因之一。酒精性肝病日益成為全球肝病致死的第一大原因。隨著酒精消費向低齡化高齡化的發(fā)展，給各年齡階段的群體帶來深遠的影響。由于不同年齡階段肝臟功能的差異，我們假設(shè)不同年齡階段酒精所引起的肝損傷的程度也應(yīng)該有所差異，并設(shè)計不同年齡階段大鼠的動物模型實驗，來研究年齡因素與酒精性肝損傷的相關(guān)性

2、。隨著對自身干細胞的研究，我們擬通過靜脈注射自身骨髓間充質(zhì)干細胞，初步研究干細胞對酒精性肝損傷的保護作用及可能機制。
　　本研究探討以下問題:①年齡因素與急性酒精性肝損傷和肝細胞凋亡的相關(guān)性;②初步探討B(tài)MSC對酒精性肝損傷的保護作用及相關(guān)機制。
　　方法:
　　1.月齡為1、6、18月的SD大鼠每組各15只，隨機分成實驗組(n=10)和對照組(n=5)，實驗組每只大鼠以15g/kg40％乙醇一次性灌胃，對照組以等比例

3、生理鹽水一次性灌胃。灌胃48 h后取大鼠血液和肝臟組織分別行肝功能和ELISA檢測肝臟炎癥因子表達及TUNEL檢測肝細胞凋亡情況。并進一步研究酒精刺激后肝細胞中Bcl-2、Bax、Caspase3等在凋亡通路中的表達情況，研究年齡因素與急性酒精性肝損傷和肝細胞凋亡的相關(guān)性及可能機制。
　　2.取200-220g的雄性SD大鼠90只，隨機分成空白組、對照組、BMSC治療組(n=30)。其中對照組和BMSC治療組每只大鼠以15g/kg

4、40％乙醇一次性灌胃，灌胃12小時后，BMSC治療組從大鼠尾靜脈注入1ml含有5×106BMSC細胞量的生理鹽水，對照組從大鼠尾靜脈注入1ml生理鹽水。在鼠尾靜脈注射1天、3天、7天后分別取大鼠的血液和肝臟組織行肝功能、肝臟炎癥因子及細胞凋亡情況的研究。分別從大鼠大體情況，存活率，肝功能，炎癥因子及肝細胞凋亡角度觀察BMSC對大鼠酒精性肝損傷的保護作用并初步探討可能機制。
　　結(jié)果:
　　1.對照組及不同年齡組間肝功能、炎癥

5、指標無顯著差異(P＞0.05)，1月齡組和6月齡組的肝細胞凋亡率無明顯差異，18月齡組顯著高于其他兩組(P＜0.05)。實驗組內(nèi)不同年齡組的肝功能、炎癥因子表達和肝細胞凋亡率均顯著高于對照組(P＜0.05)。且不同年齡組間存在差異:實驗組6月齡組的炎癥因子表達顯著高于其他各組(P＞0.05)。而實驗組內(nèi)1月齡組的大鼠細胞凋亡率最高，6月齡組次之，18月齡組最低，各組間差異顯著(P＜0.05)。進一步研究顯示Bcl-2、Bax、Caspa

6、se3在不同年齡實驗組中表達不同，其中Bax、Caspase3的表達1月齡組最高，6月齡次之，18月齡組最低，各組間差異顯著(P＜0.05)，而Bcl-2的表達則趨勢相反，且各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.對照組、BMSC治療組與空白組相比，大鼠活動度降低，存活率降低，而肝功能指標、炎癥因子及細胞凋亡率均有顯著的增高(P＜0.05)。BMSC治療組與對照組相比，存活率顯著增高(P＜0.05)，在BMSC治療后的第

7、1天及第3天時血液肝功能指標、炎癥因子及細胞凋亡情況均顯著好轉(zhuǎn)(P＜0.05)。第7天時各組肝功能、炎癥因子及細胞凋亡較第1天和第3天均有所好轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論:
　　1.生理狀態(tài)下，肝功能、炎癥因子與年齡因素無顯著相關(guān)性，肝細胞凋亡率在老年時有所增加。急性過量飲酒可引起肝臟損傷和凋亡，且損傷程度、凋亡率與年齡呈一定相關(guān)性:以40％乙醇15g/kg劑量一次性灌胃，48小時后，6月齡組大鼠肝臟損傷最重，而1月齡組肝細胞凋亡率最高。

8、表明一次性過量飲酒可引起肝臟損傷和肝細胞凋亡，其程度因鼠齡差異而表現(xiàn)不同。這可能與不同年齡大鼠在酒精刺激下肝臟炎癥細胞的激活量及肝細胞凋亡通路的激活不同有關(guān)。
　　2.酒精性肝病可引起大鼠肝功能、炎癥因子及細胞凋亡的顯著增加;大鼠的肝臟具有很強的自我修復(fù)能力，酒精性肝損傷1周后，各組肝功能及炎癥因子等各項指標均有所恢復(fù)。而靜脈注射BMSC可以提高酒精性肝損害的早期存活率，并從降低肝組織炎癥反應(yīng)及細胞凋亡方面起到對肝臟損傷的保護作用