鄰苯二甲酸二丁酯暴露對小鼠哮喘的影響研究.pdf

1、鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）因具有優(yōu)良的化學(xué)性質(zhì)而成為當(dāng)前廣泛使用的一種增塑劑，主要用于塑料、樹脂溶劑、潤滑劑、膠黏劑、化妝品、農(nóng)藥載體、印刷油墨等領(lǐng)域。DBP與材料分子是以氫鍵或者范德華力非共價結(jié)合，易隨著產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用和廢棄被釋放到環(huán)境中，進(jìn)而通過多種途徑進(jìn)入人體內(nèi)造成危害。研究表明，DBP作為一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，可通過類雌激素、抗雄激素和甲狀腺激素干擾等機(jī)制對機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用。除此之外，

2、DBP還具有神經(jīng)發(fā)育毒性、免疫毒性、生殖毒性等。近幾十年來，世界范圍內(nèi)，特別是發(fā)達(dá)國家，過敏性疾病的發(fā)病率逐年上升，但是人們所處環(huán)境中過敏原的種類和數(shù)量卻沒有發(fā)生顯著的變化。流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室研究表明，環(huán)境中鄰苯二甲酸脂類(phthalateesters，PAEs)物質(zhì)的含量與過敏性疾病的發(fā)生存在著重要的聯(lián)系，PAEs物質(zhì)持續(xù)地暴露可以通過類似免疫佐劑的作用增加過敏原誘導(dǎo)型哮喘的發(fā)病幾率及嚴(yán)重程度。
　　本研究中，我們通過建立T

3、h2型小鼠哮喘模型來探究持續(xù)經(jīng)口暴露DBP是否會加重小鼠哮喘模型中哮喘樣的相關(guān)癥狀，并探究其中可能的分子機(jī)制。無特定病原體（specific-pathogen-free，SPF）級的雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為5組:生理鹽水對照組、DBP單獨(dú)染毒組、卵清蛋白(ovalbumin，OVA)致敏組、OVA和DBP聯(lián)合染毒組、褪黑素(melatonin，MT)保護(hù)組。各組小鼠在0～27天內(nèi)連續(xù)按照小鼠體重進(jìn)行生理鹽水或DBP(10 mg/kg

4、/day)灌胃，OVA致敏組及聯(lián)合染毒組小鼠在第6、13、20、27天行腹腔和皮下多點(diǎn)注射OVA以啟動小鼠免疫反應(yīng)，而保護(hù)組中在OVA致敏時提前半小時腹腔注射濃度為10 mg/kg的抗氧化劑MT。第28～34天，OVA致敏組進(jìn)行1％ OVA(30 min/day)霧化激發(fā)，誘發(fā)小鼠哮喘樣癥狀。完成霧化激發(fā)24 h后，通過測定小鼠肺功能、肺部組織切片病理觀察、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)

5、中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4，IL-4)和γ-干擾素(γ-interferon，IFN-γ)的水平、小鼠血清中總免疫球蛋白-E(Total Immunoglobulin-E，T-IgE)的含量以及小鼠肺部組織氧化應(yīng)激水平來研究DBP對哮喘的作用以及可能的機(jī)制。
　　結(jié)果顯示，DBP單獨(dú)染毒組相較于對照組，所有指標(biāo)均沒有顯著差異，表明DBP作為一種小分子物質(zhì)，不能起始小鼠的免疫應(yīng)答反應(yīng)。OVA致

6、敏組中，肺部組織Th2型反應(yīng)加劇，主要表現(xiàn)為:細(xì)胞因子IL-4含量上升，血清中T-IgE含量升高，氣道高反應(yīng)性(airway hyper responsiveness，AHR)增強(qiáng)，氣道重塑嚴(yán)重，肺部組織纖維化程度增加、氣管上皮細(xì)胞粘液分泌增多以及BALF中各炎癥細(xì)胞數(shù)量增多;Th1型反應(yīng)減弱，主要表現(xiàn)為:IFN-γ含量下降以及IFN-γ/IL-4比值下降，并且與生理鹽水對照組相比有顯著差異，表明小鼠哮喘模型構(gòu)建成功，在此過程中Th1/

7、Th2的平衡向Th2類細(xì)胞群平移。此外，OVA致敏組中氧化應(yīng)激水平較對照組有顯著差異，表明氧化應(yīng)激為哮喘的致病機(jī)理之一。在聯(lián)合染毒組中，DBP的持續(xù)暴露均能在一定程度上增加小鼠的哮喘樣癥狀以及氧化應(yīng)激的水平，但是相較于OVA致敏組，除吸氣阻力外均不表現(xiàn)出顯著差異，表明DBP在小鼠哮喘模型中的表現(xiàn)出了較為微弱免疫佐劑效應(yīng)，并且其增加小鼠模型哮喘樣的癥狀現(xiàn)象并不是通過氧化應(yīng)激機(jī)制實(shí)現(xiàn)?？寡趸瘎㎝T的使用，能夠有效地減輕所有的聯(lián)合染毒產(chǎn)生的負(fù)