不同產(chǎn)地玄參的遺傳多樣性研究.pdf

1、目的：本研究旨在運用近紅外光譜、DNA條形碼和ISSR分子標記三種技術從玄參成分含量和遺傳兩方面對不同產(chǎn)地栽培玄參進行多樣性分析，為玄參產(chǎn)地鑒別、優(yōu)良種質(zhì)的培育、藥材的規(guī)范化栽培和可持續(xù)發(fā)展提供研究基礎。
　　方法：（1）實驗前期查閱相關文獻，了解玄參的生物學特性、產(chǎn)地分布和市場行情等基本情況。在初步了解玄參的基本情況后，進行產(chǎn)地走訪調(diào)查和樣品采集。（2）采集到14個不同產(chǎn)地的28份玄參藥材或飲片，進行干燥、打粉、過篩，裝瓶壓實，

2、設置相關參數(shù)進行近紅外光譜掃描。（3）采集到10個省市22個不同產(chǎn)地93份玄參的新鮮葉片，用DNA提取試劑盒進行DNA提取，得到樣品的總DNA，用ITS2序列和psbA-trnH序列的引物進行PCR擴增，PCR產(chǎn)物送檢測序，用CodonCode Aligner軟件進行序列拼接，用MEGA6.06、DnaSP軟件對最終序列進行分析。（4）將不同產(chǎn)地和不同單倍型的玄參樣品共33份進行總DNA提取和純度檢測，確定PCR擴增反應程序，尋找能擴增

3、玄參DNA的ISSR隨機引物及對各引物的最佳退火溫度進行梯度篩選，用正交實驗篩選PCR擴增反應體系各底物最適宜的濃度，用瓊脂糖凝膠電泳方法檢測結果，將最終得到的條帶進行統(tǒng)計和聚類分析。
　　結果和結論：（1）近紅外光譜實驗中找到了有關不同產(chǎn)地玄參的特征光譜，能區(qū)分長江以南和以北產(chǎn)地的玄參樣本，說明玄參內(nèi)在的成分和含量在長江以南和以北區(qū)域可能產(chǎn)生了差別，但此結論還需增加樣本量來進一步證明。不過近紅外光譜分析技術在玄參藥材化學多樣性的

4、應用上還是具有較好的前景。（2）93份玄參樣品的ITS2序列共產(chǎn)生10個單倍型，其中A1和A2單倍型頻率分別為63.44％和12.90%，是頻率最高的兩種，分布范圍最廣，代表了絕大部分產(chǎn)地玄參 ITS2這個片段的遺傳特征。psbA-trnH序列屬于母系遺傳，能很好地體現(xiàn)母本特性，所有樣品共產(chǎn)生4種單倍型，其中C1和C2單倍型相近，且浙江產(chǎn)地的玄參樣品的單倍型均為C1和C2，說明大部分產(chǎn)地的玄參與道地藥材浙玄參來自于同一母本。對全部樣品的

5、 ITS2序列進行分析，各居群的總遺傳分化系數(shù) Gst為0.70536，基因流Nm為0.08；對psbA-trnH序列分析結果是：各居群的總遺傳分化系數(shù)Gst為0.89007，基因流Nm為0.06，說明各群體間基因交流水平很低，遺傳分化現(xiàn)象嚴重。（3）ISSR分子標記最終采用了13條引物，共擴增出137個位點，其中多態(tài)性位點109個，多態(tài)位點百分率為79.56%，平均每條引物擴增條帶數(shù)為10.5條，當聚類圖距離為21.5時，所有產(chǎn)地樣品