核仁磷酸蛋白B23在調(diào)控微管動力學(xué)的功能.pdf

1、核仁磷酸蛋白(B23)是一種多功能的磷酸蛋白，它主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，并且快速的穿梭于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間。目前對于B23的研究主要集中在細(xì)胞核內(nèi)它對細(xì)胞周期和增值調(diào)控，關(guān)于B23在胞質(zhì)內(nèi)對微管的調(diào)控研究還知之甚少。
　　 微管是由微管蛋白的異二聚體構(gòu)成的管狀空間網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，它是維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞行使各種生理功能的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞對微管的效調(diào)控極其精細(xì)和復(fù)雜生物學(xué)過程，微管動力學(xué)主要分為兩種狀態(tài)：一種是增長，另一種是解聚，這兩種狀態(tài)的互

2、換是快速并且隨機(jī)的。微管由長聚合態(tài)解聚成短的解聚態(tài)的過程叫做catastrophe；由解聚態(tài)聚合成長聚合態(tài)的過程叫做rescue。這兩種過程(增長/解聚)受到各種因子的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞解聚的因子叫做解聚因子，行使相反作用的因子是聚合因子。
　　 本文主要研究核仁磷酸蛋白(B23)調(diào)控微管的動力學(xué)過程。我們發(fā)現(xiàn)作為一種微管穩(wěn)定因子，B23可以調(diào)控微管的動力學(xué)過程，并且通過抑制其下游解聚因子的從而保護(hù)微管解聚。
　　 通過解聚

3、態(tài)/聚合態(tài)微管分離實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)B23的敲除使細(xì)胞內(nèi)的聚合態(tài)微管量下降，并且這種解聚不受微管聚合藥物紫杉醇的恢復(fù)。我們發(fā)現(xiàn)，通過同時敲除B23下游微管解聚因子Eg5可以恢復(fù)由B23敲除引起的微管解聚，這就說明B23調(diào)控微管是依賴于Eg5的解聚功能的。我們通過體內(nèi)免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)B23可以和Eg5結(jié)合，并且這種結(jié)合是直接的蛋白質(zhì)相互作用。我們進(jìn)一步通過體外偶聯(lián)-酶活實(shí)驗(yàn)證明B23可以直接通過抑制Eg5的水解酶活抑制微管解聚。