糖尿病大鼠角膜超微結(jié)構(gòu)的變化及角膜上皮損傷修復(fù)過程中緊密連接蛋白occludin重塑的特點.pdf

1、目的：探討糖尿病大鼠和正常大鼠角膜超微結(jié)構(gòu)的變化及角膜上皮修復(fù)過程中緊密連接蛋白occludin重塑的特點。
　　方法：100只SD大鼠隨機分為糖尿病組和正常組各50只（糖尿病組均高脂喂養(yǎng)），通過腹腔注射STZ誘導(dǎo)形成Ⅱ型糖尿病大鼠模型，于造模成功3個月后，將糖尿病大鼠和正常大鼠先用4mm的中央角膜環(huán)鉆標(biāo)記，然后用鈍的眼科手術(shù)刀片去除標(biāo)記內(nèi)的角膜上皮，形成創(chuàng)傷。于損傷后0h（未損傷）、16h、48h、72h、120h（每組每個時間

2、點各5只）處死大鼠取角膜。觀察糖尿病大鼠和正常大鼠角膜上皮的超微結(jié)構(gòu)；間接免疫熒光和Western blot分析occludin蛋白在損傷修復(fù)過程中的變化。
　　結(jié)果：1.正常大鼠與糖尿病大鼠體重的比較,在高脂喂養(yǎng)4周后（注射STZ之前）正常對照組大鼠平均體重（370g）較糖尿病大鼠（400g）低7.5％（P<0.01），但在第16周時糖尿病大鼠的平均體重（410g）較正常對照組大鼠（510g）低19.6%（P<0.01）。在高脂

3、喂養(yǎng)4周后（注射STZ之前）正常對照組空腹血糖值約為4mmol/l，糖尿病組約為6mmol/l，但在第16周時糖尿病大鼠的空腹血糖值約為20mmol/l（P<0.05），正常對照組的血糖值仍為5mmol/l（P<0.01）。2.角膜上皮創(chuàng)傷修復(fù)觀察,正常對照組在術(shù)后16h和24h的損傷愈合率達55%和84%，（P<0.01）而糖尿病組在術(shù)后16h和24h的損傷愈合率為34%和56%（P<0.01）。糖尿病大鼠的角膜損傷愈合率較正常對照組

4、大鼠有明顯的延遲3.電鏡下觀察糖尿病大鼠角膜上皮可見大量片狀剝脫，上皮細胞間隙增大，細胞連接松弛；上皮表面微絨毛數(shù)量減少，可見水腫和斷裂脫落。正常大鼠角膜上皮平坦，細胞間連接緊密；角膜上皮表面微絨毛排列和密度良好，無水腫和斷裂現(xiàn)象。4.HE染色觀察大鼠在角膜上皮去除術(shù)前正常對照組大鼠的角膜上皮為多層上皮細胞，在上皮去除術(shù)后16h和48h，可以觀察到單層或多層角膜上皮細胞覆蓋在缺損表面的邊緣，72h時角膜上皮的重建已經(jīng)完成。糖尿病大鼠在角

5、膜上皮去除術(shù)前其角膜上皮基底細胞和基質(zhì)層水腫，上皮去除術(shù)后16h時缺損表面仍沒有被覆蓋，在上皮去除術(shù)后48h和72h時可以觀察到較正常對照組只有少量的角膜上皮細胞覆蓋在上皮的缺損處。5.免疫熒光檢測角膜上皮發(fā)現(xiàn)，occludin蛋白分布在表層角膜上皮細胞的邊緣。角膜上皮未去除時糖尿病組和正常組之間未觀察到有明顯的差別。角膜上皮去除16h后，可以觀察到糖尿病組角膜上皮 occludin表達較正常組明顯更弱，且排列不規(guī)則。角膜上皮去除48h

6、后，可以觀察到糖尿病角膜上皮occludin的表達較糖尿病組16h時明顯增強，排列也更規(guī)則，但仍比48h時正常組 occludin的表達低。角膜上皮去除后72h，兩組 occludin的表達都更規(guī)則與未損傷時無明顯差別。在角膜上皮去除120h后，兩組間未觀察到明顯區(qū)別。6.通過Western blot觀察occludin蛋白的表達。觀察未損傷大鼠的角膜上皮 occludin的表達發(fā)現(xiàn)正常對照組和糖尿病組之間的表達量無明顯的差別(P>0.