殼聚糖蜂膠PRP復合材料的制備及其對兔創(chuàng)面愈合的影響.pdf

1、富含血小板血漿（PRP）富含有VEGF、TGF-β、EGF等多種細胞因子，對潰瘍創(chuàng)面具有促愈作用。臨床上通常采用外敷或者局部注射的方式使用，但是PRP中細胞因子局部使用后，生長因子不能長效作用，只能短時間對創(chuàng)面愈合起到促進作用。殼聚糖材料由于其具有多孔吸附性能，可以將藥物吸附于其類似于海綿的微孔中，然后長時間、持續(xù)釋放藥物活性成分，增強藥物的促愈合功效，且殼聚糖也有一定程度的促愈作用，因此其被廣泛用作藥物載體。蜂膠是我們課題組長期的研究

2、方向，其具有良好的抗菌、抗炎、抗氧化作用，對創(chuàng)面愈合的有效促進作用也已經(jīng)得到國內(nèi)外研究人員的廣泛肯定。國外有將蜂膠與殼聚糖聯(lián)合構(gòu)建復合材料，應(yīng)用于臨床與基礎(chǔ)研究并取得良好療效的研究。因此我們希望通過制備殼聚糖蜂膠復合物，然后采用殼聚糖蜂膠復合物吸附PRP制備復合材料，利用殼聚糖多孔吸附特性有效協(xié)調(diào)PRP促愈功效及蜂膠的抗炎促愈功效。通過建立新西蘭兔背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型，觀察殼聚糖蜂膠PRP復合材料對創(chuàng)面愈合的影響，探討其對創(chuàng)面的促愈

3、調(diào)控機制。
　　目的：制備殼聚糖蜂膠PRP復合材料，檢測殼聚糖蜂膠PRP復合材料對PRP中細胞因子緩釋功效，以及其對新西蘭兔背部全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合過程中的上皮爬行、肉芽組織中膠原沉積和血管生成的影響，探討制備殼聚糖蜂膠PRP復合材料可能性及促愈調(diào)控機制。
　　方法：
　　1、將蜂膠50％醇提取液（由生命科學技術(shù)學院研究人員提供）與殼聚糖材料融合后，經(jīng)過干燥儀干燥，形成殼聚糖蜂膠復合材料。并采用掃描電子顯微鏡掃描觀察其

4、微觀結(jié)構(gòu)。
　　2、進行血小板計數(shù)，對PRP提取效果進行評估；采用ELISA技術(shù)檢測提取PRP初期與PRP經(jīng)過與復合材料融合、低溫保存后血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）含量有無差異。
　　3、建立新西蘭兔背部全層皮膚缺損模型，d=1.5cm，共12只，96個潰瘍創(chuàng)面。依次分為對照組、殼聚糖蜂膠組、PRP組、殼聚糖蜂膠PRP組。在皮膚缺損模型建立后分組干預，在第

5、3、6、9、12天收集創(chuàng)面標本，并將標本采用10%甲醛固定保存用于病理染色。4、采用蘇木素-伊紅染色，觀察殼聚糖蜂膠PRP復合材料對創(chuàng)面愈合過程中創(chuàng)面愈合率、創(chuàng)面炎性細胞浸潤、上皮爬行等的影響。
　　5、采用Masson染色，觀察殼聚糖蜂膠PRP復合材料對創(chuàng)面愈合過程中膠原生成與沉積的影響。
　　6、采用免疫組織化學技術(shù)觀察殼聚糖蜂膠復合材料對創(chuàng)面愈合過程中新血管的生成的影響。
　　結(jié)果：
　　1、殼聚糖蜂膠復合

6、材料具有蜂窩狀多孔立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可有效吸附藥物進入其微孔中。
　　2、新西蘭兔全血中血小板濃度為(261.4±27.0×109/L），PRP提取后血小板計數(shù)為（1251.0±95.8×109/L），提取倍數(shù)為（4.82±0.53）倍；新鮮提取的PRP與復合材料復合后凍存1周復融后的PRP中VEGF含量，發(fā)現(xiàn)分別為：（976±175pg/mL）、（863+193pg/mL），即兩組PRP中VEGF含量差別并不明顯
　　3、第3

7、天各組創(chuàng)面愈合率差異無統(tǒng)計學意義。第6、9天創(chuàng)面愈合率為殼聚糖蜂膠PRP組＞PRP組＞殼聚糖蜂膠組＞對照組，其中三組與對照組相比有統(tǒng)計學差異，PRP組與殼聚糖蜂膠組差異無統(tǒng)計學意義。第12天，創(chuàng)面愈合率依次為殼聚糖蜂膠PRP組＞PRP組＞殼聚糖蜂膠組＞對照組，其中殼聚糖蜂膠組與對照組相比在統(tǒng)計學上無顯著差異性（P＜0.05），PRP組、殼聚糖蜂膠PRP組與對照組相比存在統(tǒng)計學差異。
　　4、HE染色中可見第3天對照組與PRP組創(chuàng)面

8、水腫，炎性細胞浸潤程度最重，殼聚糖蜂膠組與殼聚糖蜂膠PRP組組織水腫較輕，炎癥細胞數(shù)最少。第12天各組創(chuàng)面炎癥細胞無明顯差異，殼聚糖蜂膠PRP組與PRP組創(chuàng)面基本由新生上皮覆蓋。（Figure5）。第3天創(chuàng)面上皮爬行距離比較依次為：PRP組＞殼聚糖蜂膠PRP組＞殼聚糖蜂膠組＞對照組。第6天依次為：殼聚糖蜂膠PRP組＞PRP組＞殼聚糖蜂膠組＞對照組。
　　5、第3天，殼聚糖蜂膠PRP組膠原纖維明顯多于對照組。第6天殼聚糖蜂膠PRP組

9、與PRP組膠原纖維含量明顯多于殼聚糖蜂膠組與對照組。第9天含量以殼聚糖蜂膠PRP復合材料組最多。
　　6、第3、6天創(chuàng)面肉芽組織中新生血管數(shù)目比較依次為：聚糖蜂膠PRP復合材料組＞PRP組＞殼聚糖蜂膠組＞對照組，第12天差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1、殼聚糖蜂膠復合材料具有多孔吸附性能，可吸附并緩釋藥物活性成分。
　　2、PRP經(jīng)過與殼聚糖蜂膠復合材料融合、凍存后VEGF含量減少并不明顯。
　　3、