2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩160頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、當(dāng)昆蟲受到微生物感染后,體內(nèi)會(huì)被誘導(dǎo)產(chǎn)生一系列的小分子活性多肽--抗微生物肽(AMPs)。在黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)中,目前已發(fā)現(xiàn)鑒定的AMPs有7種。其中Drosomycin等4種AMPs存在數(shù)目不等的同系物(isoforms)基因成員,構(gòu)成該種AMPs的“多基因家族”(multigenefamily)(簡稱“基因家族”)。
   黑腹果蠅的Drosomycin(Drs)是第一個(gè)從昆蟲中鑒定的

2、抗真菌肽(AFP),它只對絲狀真菌有抗菌活性,而對細(xì)菌和酵母沒有活性。在黑腹果蠅基因組中,有1個(gè)成員Drs、Drs-lD、Drs-lE、Drs-lF、Drs-lG、Drs-lC和Drs-lI共同構(gòu)成Drs基因家族。前期研究表明黑腹果蠅的Drs基因家族成員之間存在明顯的抗真菌活性差異,其中Drs的抗菌譜最廣,Drs-II則對供試的菌種沒有抗菌活性,其它5個(gè)成員顯示差異的抗菌譜。
   為深入研究果蠅Drs基因家族的免疫誘導(dǎo)模式及其

3、遺傳調(diào)控機(jī)制,本文進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的研究:(1)分析Drs基因家族成員在11種果蠅基因組中的分布及分子進(jìn)化;(2)通過常規(guī)RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Fluoresencequantitative real time RT-PCR)方法,檢測分析黑腹果蠅成蟲中Drs基因家族的轉(zhuǎn)錄表達(dá)差異,揭示它們抗菌活性差異與免疫誘導(dǎo)活性差異的關(guān)系;(3)通過對Drs基因家族上游啟動(dòng)子及相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的實(shí)驗(yàn)和分析,初步探討Drs基因家族

4、的免疫誘導(dǎo)活性與上游調(diào)控元件的關(guān)系;(4)對果蠅Toll途徑下游轉(zhuǎn)錄因子Dif和其功能結(jié)構(gòu)域RHD進(jìn)行克隆表達(dá),獲得與NF-kB位點(diǎn)結(jié)合實(shí)驗(yàn)的靶蛋白,采用電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)方法,初步鑒定Drs基因上游與免疫誘導(dǎo)活性相關(guān)的NF-kB位點(diǎn)。
   本文研究獲得的主要結(jié)果如下:
   1.除了黑腹果蠅D.melanogaster存在Drs基因家族的7個(gè)成員外,在D。simulans、D.yakuba、D.erect

5、a、D.sechellis和D.ananassae5個(gè)種的基因組中也存在4~7個(gè)數(shù)目不等的Drs基因家族成員。到目前為止發(fā)現(xiàn)的Drosomycin或Drosomycin-like序列均來自于果蠅屬(Drosophila genus)的melanogaster種群(melanogaster species-group)。從DNA序列相似性角度分析,這些基因成員可以分成2大枝,第1枝由Drs-lD、Drs-lE和Drs-lF組成,包括D.t

6、riauraria中的tri-Drs-lA/B;第2枝Drs、Drs-lC、Drs-lG和Drs-lI組成,包括了D.ananassae的ana-Drs-la,ana-Drs-le,ana-Drs-lc和ana-Drs-lb,表明兩大枝的分化事件早于melanogaster種群各種亞群分化之前,而各種亞群分化后又發(fā)生了這兩枝中個(gè)基因成員的分化,而當(dāng)各成員分化完畢后才發(fā)生了melanogaster種亞群(melanogasterspeci

7、es-subgroup)中五個(gè)物種的物種分化。
   2.用4種細(xì)菌和6種真菌對黑腹果蠅成蟲進(jìn)行免疫誘導(dǎo)處理,在常規(guī)RT-PCR初步檢測Drs基因家族成員轉(zhuǎn)錄活性的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步用大腸桿菌(E.coli K12D31)、金黃葡萄球菌(S.aureus)和尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)對黑腹果蠅成蟲進(jìn)行免疫誘導(dǎo),采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測Drs基因家族的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性和誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活性,結(jié)果表明:(1) Drs

8、基因具有最強(qiáng)的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性,微生物免疫誘導(dǎo)后可顯著加強(qiáng)其表達(dá);(2) Drs-lF有較強(qiáng)的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性,但創(chuàng)傷刺激和微生物的誘導(dǎo)不能上調(diào)Drs-lF的表達(dá);(3)Drs-lG、Drs-lD和Drs-lE具有微弱的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性,創(chuàng)傷刺激可誘導(dǎo)基因的表達(dá)上調(diào),但供試微生物的免疫誘導(dǎo)不能使基因的表達(dá)上調(diào);(4) Drs-lC和Drs-lI既無基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性,也無誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)合課題組前期關(guān)于“黑腹果蠅Drs基因家族中Drs的抗菌譜最廣”的研究

9、結(jié)果,推測Drs在黑腹果蠅Drs基因家族的免疫防御中發(fā)揮主導(dǎo)作用。
   3.通過對黑腹果蠅Drs基因家族上游啟動(dòng)子的搜索,發(fā)現(xiàn)除Drs-lC外,在其他6個(gè)基因上游-150bp內(nèi)均可搜索到1~2個(gè)核心啟動(dòng)子元件。通過5'RACE實(shí)驗(yàn),確定了Drs、Drs-lD、Drs-lE、Drs-lF和Drs-lG的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),沒有鑒定到Drs-lC和Drs-lI的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),推測Drs-lC和Drs-lI不存在起主導(dǎo)作用的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。

10、根據(jù)Drs-lI對供試菌無抗菌活性和Drs-lC和Drs-lI在黑腹果蠅體內(nèi)無轉(zhuǎn)錄活性,推測這2個(gè)基因?yàn)榧倩蚧蛘谙蚣倩蚍较虬l(fā)展。
   4.通過對黑腹果蠅Drs基因家族上游NF-kB/Rel、GATA、NF-IL6 RE和ICRE等順式調(diào)控元件的搜索分析,發(fā)現(xiàn)具有創(chuàng)傷刺激或微生物免疫誘導(dǎo)活性的Drs、Drs-lD、Drs-lE和Drs-lG基因的上游均存在NF-kB位點(diǎn),而不存在NF-kB位點(diǎn)的Drs-lF、Drs-lC和

11、Drs-lI則喪失了免疫誘導(dǎo)活性,暗示NF-kB位點(diǎn)與Drs基因家族的免疫誘導(dǎo)特性直接相關(guān)。
   5.根據(jù)Dif轉(zhuǎn)錄因子與NF-kB位點(diǎn)的結(jié)合可能在果蠅成蟲階段促進(jìn)Drs基因家族誘導(dǎo)表達(dá)活性的推理,克隆表達(dá)了果蠅Dif的Rel同源功能區(qū)(Rel homologydomain,RHD),獲得用于檢測NF-kB位點(diǎn)的靶蛋白。采用EMSA技術(shù),在Drs基因的上游靠近轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的位置鑒定到一個(gè)NF-kB位點(diǎn),該位點(diǎn)可能參與了Drs基

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論