電針大鼠腦缺血耐受和鎮(zhèn)痛效應的穴位特異性研究.pdf

1、目的:
　　探索電針(EA)足三里穴(ST36)在大鼠腦缺血再灌注(CI/R)中的腦缺血耐受作用及研究其可能機制，并且探索電針(EA)百會穴(GV20)是否改善大鼠炎性痛(CFA)中的痛覺過敏，從而通過比較兩個穴位在兩種大鼠模型中的療效初步說明穴位特異性的問題。
　　方法:
　　(1)在CI/R模型中，將實驗分為假手術組(sham)，大腦中動脈栓塞模型組(MCAO),電針預處理百會穴加MCAO組(EA GV20)，電針

2、預處理足三里加MCAO組(EAST36),ST36不予以電針刺激(SE)。大腦中動脈栓塞(middle cerebral arteryocclusion，MCAO)模型即前段燒成圓頭的4-0尼龍線栓自大鼠頸外動脈(ECA)插入，經(jīng)頸總動脈(CCA)交叉處調節(jié)角度置入頸內動脈(ICA)，圓頭直至大腦中動脈分叉處，缺血120 min后，拔除線栓恢復再灌注24 h;假手術組予以相同手術操作，但線栓不插入大腦中動脈;電針組在造模前120 min

3、分別在百會穴(GV20)和足三里(ST36)予以電針刺激(1mA，2/15Hz，持續(xù)時間30 min)，然后造MCAO模型;假電針組在造模前120min扎針于足三里但不予以電刺激。利用longa評分觀察大鼠行為學改變，利用2％ triphenyltetrazolium chloride(TTC)觀察腦梗死體積，利用蛋白印跡法(WB)檢測海馬凋亡蛋白bc1-2和bax的表達情況，利用實時熒光定量PCR觀察皮層炎癥因子的轉錄情況，利用氧化應

4、激試劑盒檢測皮層SOD(superoxidedismutase)和MDA(malondialdehyde)水平。
　　(2)在CFA模型中，將實驗分為生理鹽水組(Sal)，完全弗氏佐劑組(CFA)，電針足三里加CFA組(EA ST36)，電針百會穴加CFA組（EA GV20），GV20不予以電針刺激(SE)。CFA組即將100 ul完全弗氏佐劑注射入大鼠右后足趾皮下制各小鼠炎癥性痛模型(n=8)，以注100μ l生理鹽水作為對照。

5、電針組在造模后立即予以電針（1mA，2/15Hz，持續(xù)時間30 min），第90 min予以第二次電針，分別作用于百會穴(GV20)和足三里(ST36)。假電針組扎針于百會穴處但不予以電刺激。利用機械閡值(mechanical withdrawal threshold MWT)和熱閾值(thermal withdrawal latency TWL)檢測大鼠行為學改變，主要記錄造模前和造模后150 min大鼠抬腿時間和抬腿力度。此外，利用

6、fos免疫熒光技術觀察脊髓背角疼痛信號的神經(jīng)元標記。
　　結果:
　　(1)相對與sham組，MCAO組表現(xiàn)出明顯的行為學缺陷和嚴重的腦梗死，增加MDA含量、bax蛋白和促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)的轉錄水平（＃＃P＜0.01），減少SOD活性和bcl-2蛋白（＃＃P＜0.01），然而，電針預處理均能夠明顯減輕MCAO所產(chǎn)生的損害如減少行為學評分(*P＜0.05)和腦梗死體積(**P＜0.01)，減少bax蛋

7、白（**P＜0.01）、MDA含量（*P＜0.05）以及各種炎癥因子的轉錄水平，增加bcl-2蛋白(*P＜0.05)和SOD活性(**P＜0.01)，而SE沒有產(chǎn)生相應的作用。此外電針預處理5T36和GV20相比，兩者之間均沒有統(tǒng)計學意義。
　　(2)予以CFA之前，各組之間MWT和TWL行為學表現(xiàn)沒有統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。給予CFA后150 min，CFA組的MWT和TWL明顯降低相對于Sal組（＃＃P＜0.01），而脊髓

8、背角同側fos表達在淺層(laminaeⅠ-Ⅱ;＃＃P＜0.01)以及深層(laminaeⅢ-Ⅴ;＃P＜0.05)明顯增多。相比于CFA組，EA GV20明顯改善CFA誘發(fā)的痛覺過敏在MWT(*P＜0.05)和TWL（*P＜0.05），然而SEA GV20組沒有統(tǒng)計學意義。相似地，EA ST36與CFA相比也明顯增加MWT(**P＜0.01)和TWL(*P＜0.05)。此外，EA GV20和EAST36均能在脊髓背角的淺層（**P＜0.

9、01 vs CFA）顯著減少CFA誘發(fā)的活化神經(jīng)元c-fos的表達，而在脊髓背角的深層不產(chǎn)生抑制作用。然而，不管是行為學還是fos活化情況，EA GV20與EA ST36相比，都沒有統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　(1)通過抗炎、抗氧化應激以及抗凋亡作用，EA ST36預處理在缺血再灌注24h后能夠產(chǎn)生腦缺血耐受作用，并且與EA GV20預處理作用相似。
　　(2) EA GV20能夠在短期階段(2.5 h)緩解CFA-