纈沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠腎臟水通道蛋白-1、2、5表達的影響.pdf

1、目的：觀察纈沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血壓的影響，并檢測大鼠腎臟水通道蛋白-1、2、5（AQP1、AQP2、AQP5）mRNA和蛋白的表達變化，為纈沙坦治療高血壓的藥效學(xué)機制提供新的理論依據(jù)，并為抗高血壓藥的研發(fā)提供可能的作用靶點。
　　方法：自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）和Wistar Kyoto（WKY）大鼠分別12只，隨機分為纈沙坦灌胃組（SHR-V組、WKY-V組）和生理鹽水灌胃組（SHR-N組、WKY-N組），每組各6

2、只。灌胃劑量：纈沙坦為每天10mg/kg體重，生理鹽水為換算出的不含纈沙坦的相應(yīng)體積。每周稱量大鼠體重并以此調(diào)整一次藥物劑量，用無創(chuàng)血壓儀測量尾動脈收縮壓一次，持續(xù)至第40周時腹主動脈采血并收集腎臟，用ELISA和化學(xué)發(fā)光法分別測定血漿精氨酸加壓素（AVP）和血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）濃度，用蘇木素-伊紅（HE）染色，觀察各組大鼠腎臟形態(tài)學(xué)變化，用實時熒光定量PCR和Western blot分別檢測腎臟AQP1,2,5 mRNA和蛋白的表

3、達變化，用免疫組織化學(xué)（IHC）法觀測腎臟AQP1,2,5蛋白的定位和表達。
　　結(jié)果：1.SHR血壓值在第12周開始灌胃時明顯高于WKY大鼠；在第16周時SHR-V組血壓值比SHR-N組已有明顯降低（P<0.05）；第40周時，血壓進一步降低，但仍明顯高于WKY-N組和WKY-V組，而WKY-N組與WKY-V組之間無明顯差異（P>0.05）。2.第40周血漿AngⅡ濃度：SHR-V組比SHR-N組、WKY-V比WKY-N組均明顯

4、升高（P<0.05）；SHR-N組比WKY-N組、SHR-V組比WKY-V組均略有升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。血漿AVP濃度：SHR-V組比SHR-N組明顯降低（P<0.05）；WKY-V組比WKY-N組明顯升高（P<0.05）；而SHR-N組比WKY-N組、SHR-V組比WKY-V組均明顯降低（P<0.05）。3.第40周腎臟HE染色顯示，WKY-N組與WHY-V組腎小球毛細血管壁薄，基底膜未見明顯增厚，腎小管腔刷狀緣及腎小囊腔清晰可見。S

5、HR-N組可見部分腎小球增大，腎小管管腔及毛細血管擴張，部分腎小球萎縮，囊腔內(nèi)分葉狀增多，毛細血管結(jié)構(gòu)不清，系膜細胞及基質(zhì)增生，腎小管間質(zhì)增多，管腔變窄，SHR-V組中上述病變明顯減輕。4.第40周腎臟RT-PCR結(jié)果顯示，SHR-V組比SHR-N組AQP1,2,5 mRNA相對表達量均明顯升高（P<0.05）；WKY-V組比WKY-N組均無明顯改變（P>0.05）；SHR-N組比WKY-N組AQP1,5明顯降低（P<0.05），而AQ

6、P2則明顯升高（P<0.05）；SHR-V組比WKY-V組AQP1,5無明顯變化（P>0.05），而AQP2則明顯升高（P<0.05）。5.第40周腎臟Western blot結(jié)果顯示，SHR-V組比SHR-N組 AQP1,2,5相對灰度值均明顯升高（P<0.05）；WKY-V組比 WKY-N組AQP1,2,5均無明顯改變（P>0.05）；SHR-N組比WKY-N組AQP1,5明顯降低（P<0.05），而AQP2則無明顯改變（P>0.0

7、5）；SHR-V組比WKY-V組AQP1,2,5均無明顯改變（P>0.05）。6.第40周腎臟IHC結(jié)果顯示，AQP1在皮質(zhì)主要表達于近端小管，在髓質(zhì)主要表達于髓袢降支細段，WKY-N組平均光密度值皮質(zhì)明顯高于髓質(zhì)（P<0.05）， WKY-V組以及SHR-V組皮質(zhì)均明顯低于髓質(zhì)（P<0.05），SHR-N組則無明顯差異（P>0.05）；AQP2在皮質(zhì)主要表達于連接小管和皮質(zhì)集合管，在髓質(zhì)主要表達于髓質(zhì)集合管，WKY-N組、WKY-V組

8、、SHR-N組以及SHR-V組皮質(zhì)平均光密度值均明顯低于髓質(zhì)（P<0.05）；AQP5在皮質(zhì)主要表達于連接小管和皮質(zhì)集合管，在髓質(zhì)主要表達于髓質(zhì)集合管，WKY-N組、WKY-V組、SHR-N組以及SHR-V組皮質(zhì)平均光密度值均明顯低于髓質(zhì)（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.在自發(fā)性高血壓后期，SHR腎臟內(nèi)局部RAS更加活躍，AVP的體液調(diào)節(jié)作用相對增強，纈沙坦可以使SHR的體液調(diào)節(jié)效應(yīng)進一步加強。2.血壓的長期變化過程會引起大鼠腎臟