糖尿病大鼠病程不同階段角膜上皮緊密連接蛋白claudin-1表達(dá)的變化.pdf

1、目的：動(dòng)態(tài)觀察不同階段糖尿病大鼠和正常大鼠角膜上皮緊密連接蛋白 claudin-1的表達(dá)變化。
　　方法：雄性SD大鼠80只，隨機(jī)均等分為糖尿病組和正常對(duì)照組各40只，以高脂飲食聯(lián)合小劑量 STZ腹腔注射建立Ⅱ型糖尿病模型，分別于造模后4周、8周、16周處死大鼠，取角膜組織，以 HE染色法比較糖尿病組和正常對(duì)照組大鼠角膜形態(tài)學(xué)變化，以免疫熒光染色和 Western blot法檢測(cè)并分析大鼠角膜上皮緊密連接蛋白claudin-1的表

2、達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.正常對(duì)照組大鼠與糖尿病組大鼠體質(zhì)量的比較。高脂喂養(yǎng)8周后（注射STZ之前），正常對(duì)照組大鼠的平均體質(zhì)量（381g）較糖尿病組大鼠（412g）低7.5％（P<0.01），但在造模成功后正常對(duì)照組大鼠維持正常體質(zhì)量增長，而糖尿病組大鼠體質(zhì)量增長緩慢。造模成功后第4周時(shí)，糖尿病組大鼠平均體質(zhì)量（418g）較正常對(duì)照組大鼠（447g）低6.4%（P<0.01），第8周時(shí)，糖尿病組大鼠平均體質(zhì)量（422g）較正常對(duì)照

3、組（509g）低17.1%（P<0.01），第16周時(shí)，糖尿病組大鼠平均體質(zhì)量（428g）較正常對(duì)照組（566g）低24.4%（P<0.01）。2.正常對(duì)照組大鼠與糖尿病組大鼠空腹血糖的比較。高脂喂養(yǎng)8周后（注射 STZ之前），正常對(duì)照組大鼠的空腹血糖值約為5mmol/L，糖尿病組約為6mmol/L（P<0.01），造模成功后糖尿病組大鼠空腹血糖濃度升高并維持在約21mmol/L，而正常對(duì)照組大鼠的空腹血糖仍為5mmol/L，兩組間造模

4、后第4周、8周、16周空腹血糖值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。3.造模成功后，HE染色分別觀察并比較兩組大鼠角膜形態(tài)學(xué)變化。任一時(shí)間點(diǎn)的正常對(duì)照組大鼠角膜形態(tài)無明顯變化，各層清晰可見，排列整齊，均無水腫，角膜上皮細(xì)胞輪廓清楚，細(xì)胞核呈圓形，基質(zhì)層排列緊密；糖尿病組大鼠角膜在第8周和第16周時(shí)，角膜上皮細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞數(shù)量較正常減少，基質(zhì)層水腫，膠原纖維排列不規(guī)則。4.角膜上皮通透性分析。染色結(jié)果顯示造模后第4周、第

5、8周和第16周，正常對(duì)照組和糖尿病組角膜屏障功能均正常，未觀察到角膜上皮通透性有明顯差別。5.免疫熒光染色分別檢測(cè)并比較正常對(duì)照組與糖尿病組角膜上皮claudin-1蛋白的表達(dá)。染色發(fā)現(xiàn) claudin-1蛋白主要在角膜上皮的表層細(xì)胞和翼狀細(xì)胞層表達(dá)。造模成功后第4周和第8周，未觀察到兩組間有明顯差別。造模成功后第16周，染色結(jié)果顯示糖尿病組的角膜上皮 claudin-1蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯更弱且不規(guī)則。6. Western blo