幾種榕小蜂的分子學(xué)鑒定研究.pdf

1、本文利用PCR技術(shù)克隆榕小蜂核糖體28S、線粒體細(xì)胞色素b（Cytb）、細(xì)胞色素氧化酶I（COI）基因序列和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（SRAP）分析方法，結(jié)合GenBank中相應(yīng)序列對(duì)薜荔和愛玉子的傳粉小蜂（Wiebesia pumilae）、大葉榕（Ficus virens var.sublanceolata（Miq.）Comer）榕果中非傳粉小蜂（Camarothorax bimasculinus）、傳粉小蜂（Platyscapa cor

2、onata）、高榕（Ficus altissima）傳粉小蜂（Eupr&tina altissima）的突變類型、核苷酸多態(tài)性、種內(nèi)平均遺傳距離以及系統(tǒng)進(jìn)化等進(jìn)行比較分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.28S分析結(jié)果顯示：①堿基組成計(jì)算結(jié)果表明，各樣品間的堿基組成差別不大，A、G、T、C的平均含量為22.2％、30.08％、22.51％、25.20％，GC含量平均為55.28％，略高于AT；②進(jìn)行Kimura2-paramter

3、 distance（K2P）遺傳距離計(jì)算，愛玉子傳粉小蜂樣品間的平均遺傳距離0.0161；薜荔傳粉小蜂樣品間的遺傳距離為0.0103；愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的平均遺傳距離0.0532；而C.bimasculinus的兩形態(tài)差異很大的雄性小蜂間的遺傳距離僅為0.0069；⑨運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析，愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂分別聚集呈簇，形態(tài)差異較大的雄性小蜂親緣關(guān)系較近。結(jié)果表明：愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的變異

4、主要來自群體間，C.bimasculinus的不同雄性小蜂間的親緣關(guān)系近，為雄性多型現(xiàn)象，NJ法和UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹同樣說明了以上的結(jié)論。
　　 2.線粒體Cytb、COI分析結(jié)果顯示：（1）對(duì)Cytb基因片段的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行如下分析：①進(jìn)行堿基組成的計(jì)算表明，各樣品間堿基的差異不大，所有實(shí)驗(yàn)樣品A、G、T、C的平均含量為32.9％、11.2％、41.9％、14.1％，平均GC含量為25.3％，呈現(xiàn)出了較低的GC含量，G堿

5、基的含量要低于其它三種堿基的含量，總體上顯示出了G堿基的缺乏；②測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析，愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂基因之間的保守位點(diǎn)為86.67％，變異位點(diǎn)為13.09％；③進(jìn)行K2P遺傳距離計(jì)算，愛玉子傳粉小蜂間的平均遺傳距離0.0244，薜荔傳粉小蜂間的遺傳距離為0.0097，兩群體間的平均遺傳距離0.1305；④運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析。（2）對(duì)COI基因片段的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行如下分析：①進(jìn)行堿基組成的計(jì)算，A、G、T、C的

6、平均含量為31.5％、16.9％、40.6％、11.0％，平均GC含量為27.9％，其中密碼子第三位點(diǎn)上C堿基的含量要低于其它三種堿基的含量，顯示出了C堿基總體含量的缺乏；②測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析，愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的保守位點(diǎn)占89.08％，變異位點(diǎn)占10.92％；③進(jìn)行K2P遺傳距離計(jì)算，愛玉子傳粉小蜂樣品間的平均遺傳距離0.0068，薜荔傳粉小蜂樣品間的遺傳距離為0，兩群體間的平均遺傳距離0.0956，是個(gè)群體內(nèi)遺傳

7、距離的10倍以上；④運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析。以上數(shù)據(jù)說明，兩個(gè)基因片段的建樹結(jié)果都顯示愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂的親緣關(guān)系是穩(wěn)定可信的，愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂均達(dá)到物種分異的水平，可認(rèn)定為隱種。
　　 3.SRAP分析結(jié)果顯示：在篩選出來的17對(duì)隨進(jìn)引物對(duì)12個(gè)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共獲得491個(gè)位點(diǎn)，擴(kuò)增條帶主要在100-2000bp之間，兩群體間的平均遺傳距離0.210908，平均遺傳相似指數(shù)在為0.78909

8、2；C.bimasculinus的兩雄性之間的遺傳距離為0.150713，遺傳相似指數(shù)為0.849287。結(jié)果顯示：愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的遺傳距離較近，由于種內(nèi)遺傳距離一般小于0.2，種問遺傳距離一般在0.2-0.8之間，所以，愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂已達(dá)到了物種分異程度；同樣，C.bimasculinus的兩種雄性之間的親緣關(guān)系較近，為同種。通過Ntsys軟件生成的聚類結(jié)果也符合以上結(jié)論。
　　 綜上所述：結(jié)合