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文檔簡介
1、本文利用PCR技術(shù)克隆榕小蜂核糖體28S、線粒體細(xì)胞色素b(Cytb)、細(xì)胞色素氧化酶I(COI)基因序列和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)分析方法,結(jié)合GenBank中相應(yīng)序列對薜荔和愛玉子的傳粉小蜂(Wiebesia pumilae)、大葉榕(Ficus virens var.sublanceolata(Miq.)Comer)榕果中非傳粉小蜂(Camarothorax bimasculinus)、傳粉小蜂(Platyscapa cor
2、onata)、高榕(Ficus altissima)傳粉小蜂(Eupr&tina altissima)的突變類型、核苷酸多態(tài)性、種內(nèi)平均遺傳距離以及系統(tǒng)進(jìn)化等進(jìn)行比較分析。主要研究結(jié)果如下:
1.28S分析結(jié)果顯示:①堿基組成計(jì)算結(jié)果表明,各樣品間的堿基組成差別不大,A、G、T、C的平均含量為22.2%、30.08%、22.51%、25.20%,GC含量平均為55.28%,略高于AT;②進(jìn)行Kimura2-paramter
3、 distance(K2P)遺傳距離計(jì)算,愛玉子傳粉小蜂樣品間的平均遺傳距離0.0161;薜荔傳粉小蜂樣品間的遺傳距離為0.0103;愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的平均遺傳距離0.0532;而C.bimasculinus的兩形態(tài)差異很大的雄性小蜂間的遺傳距離僅為0.0069;⑨運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析,愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂分別聚集呈簇,形態(tài)差異較大的雄性小蜂親緣關(guān)系較近。結(jié)果表明:愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的變異
4、主要來自群體間,C.bimasculinus的不同雄性小蜂間的親緣關(guān)系近,為雄性多型現(xiàn)象,NJ法和UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹同樣說明了以上的結(jié)論。
2.線粒體Cytb、COI分析結(jié)果顯示:(1)對Cytb基因片段的測序結(jié)果進(jìn)行如下分析:①進(jìn)行堿基組成的計(jì)算表明,各樣品間堿基的差異不大,所有實(shí)驗(yàn)樣品A、G、T、C的平均含量為32.9%、11.2%、41.9%、14.1%,平均GC含量為25.3%,呈現(xiàn)出了較低的GC含量,G堿
5、基的含量要低于其它三種堿基的含量,總體上顯示出了G堿基的缺乏;②測序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析,愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂基因之間的保守位點(diǎn)為86.67%,變異位點(diǎn)為13.09%;③進(jìn)行K2P遺傳距離計(jì)算,愛玉子傳粉小蜂間的平均遺傳距離0.0244,薜荔傳粉小蜂間的遺傳距離為0.0097,兩群體間的平均遺傳距離0.1305;④運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析。(2)對COI基因片段的測序結(jié)果進(jìn)行如下分析:①進(jìn)行堿基組成的計(jì)算,A、G、T、C的
6、平均含量為31.5%、16.9%、40.6%、11.0%,平均GC含量為27.9%,其中密碼子第三位點(diǎn)上C堿基的含量要低于其它三種堿基的含量,顯示出了C堿基總體含量的缺乏;②測序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析,愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的保守位點(diǎn)占89.08%,變異位點(diǎn)占10.92%;③進(jìn)行K2P遺傳距離計(jì)算,愛玉子傳粉小蜂樣品間的平均遺傳距離0.0068,薜荔傳粉小蜂樣品間的遺傳距離為0,兩群體間的平均遺傳距離0.0956,是個(gè)群體內(nèi)遺傳
7、距離的10倍以上;④運(yùn)用NJ和UPGMA法建樹分析。以上數(shù)據(jù)說明,兩個(gè)基因片段的建樹結(jié)果都顯示愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂的親緣關(guān)系是穩(wěn)定可信的,愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂均達(dá)到物種分異的水平,可認(rèn)定為隱種。
3.SRAP分析結(jié)果顯示:在篩選出來的17對隨進(jìn)引物對12個(gè)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,共獲得491個(gè)位點(diǎn),擴(kuò)增條帶主要在100-2000bp之間,兩群體間的平均遺傳距離0.210908,平均遺傳相似指數(shù)在為0.78909
8、2;C.bimasculinus的兩雄性之間的遺傳距離為0.150713,遺傳相似指數(shù)為0.849287。結(jié)果顯示:愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂之間的遺傳距離較近,由于種內(nèi)遺傳距離一般小于0.2,種問遺傳距離一般在0.2-0.8之間,所以,愛玉子傳粉小蜂和薜荔傳粉小蜂已達(dá)到了物種分異程度;同樣,C.bimasculinus的兩種雄性之間的親緣關(guān)系較近,為同種。通過Ntsys軟件生成的聚類結(jié)果也符合以上結(jié)論。
綜上所述:結(jié)合
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