數字化可視昆蟲之蟲體連續(xù)石蠟切片制備技術研究.pdf

1、沈陽農業(yè)大學碩士學位論文數字化可視昆蟲之蟲體連續(xù)石蠟切片制備技術研究姓名：王海舟申請學位級別：碩士專業(yè)：農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師：王小奇20060501沈陽農業(yè)大學碩士學位論文摘要本文針對昆蟲組織結構的特點，以粘蟲幼蟲為試驗材料，從生物組織制片技術的全過程出發(fā)，對每一步驟的操作，都從試劑的選擇、最佳的用量、合理的處理時間、最適宜的溫度和最優(yōu)的處理方法等方面進行了細致研究，并且在這些研究的基礎上，制成整個蟲體的連續(xù)石蠟切片，又借助顯微數

2、碼照相機實現(xiàn)整個幼蟲內部解剖結構的數字化。具體研究結果如下：第一，利用天然飼料——玉米幼苗，對粘蟲進行散養(yǎng)，在連續(xù)飼養(yǎng)的3代中，卵的孵化率都在90％以上，老熟幼蟲化蛹率的平均值為875％，蛹豹羽化率最高為98O％，每頭雌蛾一生累計產卵量的平均值都在1200粒左右。通過對蟲體形態(tài)學指標的測量(幼蟲頭殼寬度等)和其它幼蟲生物學特性的觀察，很好的區(qū)分了不同齡期的幼蟲，為后續(xù)試驗提供了豐富且齡期整齊的蟲源。第二從生物組織制片中常用的混合固定液里

3、選出Bouin氏、Bra西l氏和camoy氏等18種固定液，通過20℃下對每種固定液的固定時間、是否導致蟲體形變、是否導致蟲體硬化及預切片效果等方面的對比，發(fā)現(xiàn)Bouin氏、Bragil氏和Cd氏等9秘混合固定液對粘蟲幼蟲的固定效果較優(yōu)。對這9種混合固定液的固定效果，在溫度改變和用量倍數不同時的情況進行比較，發(fā)現(xiàn)：隨環(huán)境溫度的升高，固定速率加快，但與此同時蟲體形變量也加大；溫度改變相同幅度時，穿透速率較侵的固定液的固定速率提高較快：綜合

4、比較，35℃是固定耗時相對較短、形變量相對較小、均勻程度相對較高的理想溫度。絕大多數固定液，在20℃下用量倍數應為蟲體的30倍，對于穿透力較強的固定液可以減少到lO倍。幼蟲齡期和蛻皮后時間長短對這9種較優(yōu)固定液的固定效果有影響。幼蟲齡期越高，蟲體越大，固定用時越長。4齡和5齡的幼蟲之間固定時間相差較小，且形變情況和均勻程度完全一致。但基于后期制片操作和顯微觀察時對蟲體大小的要求，5齡幼蟲更加適合。蛻皮后時間越久，固定所需時間越長，其中“

5、10min以內”和“1020min”兩個時段內的幼蟲固定用時間相等且耗時最少，所以幼蟲蛻皮后20min之內為其固定最佳時段。第三，以水作溶劑的固定液要用流水沖洗，以乙醇作溶劑的固定液要用一定濃度的醇洗滌；以酒精、甲醛、冰醋酸、和氯仿為主要固定試劑的固定液很容易清洗干凈，只需更換2—3次洗滌液即可：而含苦味酸和升汞兩種成分的固定液較難清洗，洗滌耗時都在10h左右；重鉻酸鉀和鉻酸兩種試劑最難清洗，都須用流水沖洗24h；以水、低濃度酒精(50