發(fā)夾型熒光分子探針用于DNA甲基化酶的研究.pdf

1、DNA甲基化是DNA與甲基化酶相互作用的結(jié)果，是DNA分子重要的堿基修飾方式之一，它可以影響到核酸的結(jié)構(gòu)以及與蛋白質(zhì)的相互作用等，進(jìn)而影響到基因表達(dá)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展，因而是一個(gè)引起廣泛興趣的研究領(lǐng)域。本論文利用熒光分子探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)便、靈活的特點(diǎn)，著眼于研究DNA與甲基化酶相互作用，開展的工作主要包括以下三個(gè)方面： 1.發(fā)夾型熒光分子探針用于DNA甲基化酶的活性分析及其在藥物篩選中的應(yīng)用 設(shè)計(jì)了莖部較長(zhǎng)的發(fā)夾型熒光分子探針，

2、該探針比傳統(tǒng)的分子信標(biāo)熒光探針具有更高的穩(wěn)定性，甲基化酶和相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)被設(shè)計(jì)在發(fā)夾型探針的莖部，熒光基團(tuán)被連接在探針的5'端，其熒光被連在3'端的熄滅基團(tuán)所熄滅。限制性內(nèi)切酶可切割未發(fā)生甲基化修飾的探針，導(dǎo)致探針的發(fā)夾結(jié)構(gòu)遭到破壞，引起熒光基團(tuán)熒光信號(hào)的恢復(fù)。根據(jù)熒光信號(hào)的恢復(fù)程度可實(shí)現(xiàn)對(duì)甲基化酶活性的分析。在此基礎(chǔ)上，建立了一種簡(jiǎn)便、快速分析抗腫瘤藥物對(duì)DNA甲基化酶活性的影響的方法，為篩選針對(duì)基因甲基化異常引起的惡性

3、腫瘤的治療藥物提供了一種新的思路和方法。 2.發(fā)夾型熒光分子探針用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)TaqⅠ甲基化酶對(duì)DNA的甲基化 利用發(fā)夾型熒光分子探針設(shè)計(jì)的靈活性，根據(jù)TaqⅠ甲基化酶和DpnⅠ限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列關(guān)系，在分子探針的莖部設(shè)計(jì)了兩個(gè)相鄰的TaqⅠ甲基化酶的識(shí)別位點(diǎn)，當(dāng)探針莖部?jī)蓚€(gè)識(shí)別位點(diǎn)被TaqⅠ甲基化酶修飾時(shí)可形成限制性內(nèi)切酶DpnⅠ的切割位點(diǎn)，發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖部被DpnⅠ切割而釋放熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)TaqⅠ甲基化酶對(duì)分