DNA-PKcs-Gadd45β及GAP-43-Nogo-A在不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度預(yù)處理腦缺血大鼠海馬區(qū)的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：比較不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度預(yù)處理下腦缺血大鼠海馬區(qū)DNA-PKcs/GADD45β及Nogo-A/GAP-43的表達(dá)變化，并探討其意義。
　　方法：80只健康雄性 SD大鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)組（n=20）、腦缺血組（n=20）、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組（n=20），運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組（n=20）。手術(shù)前4周開始對(duì)運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組設(shè)置為16m/min*30min；運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組采取強(qiáng)度遞增的方式進(jìn)行跑

2、臺(tái)訓(xùn)練，設(shè)置開始的速度為10m/min，逐漸提高速度并在3min內(nèi)達(dá)到預(yù)定速度（19.3m/min），保持速度直至力竭。用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備SD大鼠全腦缺血模型，分別于腦缺血后6h、1d、3d、7d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠。通過光鏡觀察HE染色后腦組織形態(tài)變化；分別用黃嘌呤氧化酶法和TBA法檢測(cè)大鼠腦組織SOD活性、MDA含量；通過免疫組化和PCR法觀察各時(shí)間點(diǎn)DNA-PKcs、GADD45β以及Nogo-A、GAP-

3、43在海馬區(qū)的蛋白及mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、形態(tài)觀察結(jié)果：與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元排列不規(guī)整，胞漿增多，核仁消失，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元細(xì)胞壞死率降低，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)核深染、固縮變性的情況有所減輕（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)較腦缺血組神經(jīng)元壞死率進(jìn)一步升高，可

4、見較多腫脹的神經(jīng)元，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、深染的情況進(jìn)一步加重（P＜0.01）。腦缺血各組神經(jīng)元細(xì)胞壞死率隨時(shí)間點(diǎn)呈遞增趨勢(shì)，于7d時(shí)最為嚴(yán)重（P＜0.01）。2、SOD活性測(cè)定結(jié)果：與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)SOD活性明顯降低（P＜0.01）。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)SOD活性明顯升高（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)SOD活性

5、明顯降低（P＜0.01）。3、MDA含量測(cè)定結(jié)果：與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)MDA含量明顯升高（P＜0.01）。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)MDA含量明顯降低（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)MDA含量明顯升高（P＜0.01）。4、DNA-PKcs、GADD45β免疫組化與RT-PCR分析結(jié)果：免疫組化：DNA-PKcs、GADD45β在假

6、手術(shù)組中有胞漿弱表達(dá)，而在腦缺血各組各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞核中有強(qiáng)陽性表達(dá)，染色呈棕黃色。與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)DNA-PKcs、GADD45β的表達(dá)水平明顯增加(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組DNA-PKcs、GADD45β在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)呈較高水平表達(dá)（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組DNA-PKcs、GADD45β的表達(dá)水平顯著降低，且下降幅度大（P＜0.01）。RT-

7、PCR：與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn) DNA-PKcs、GADD45βmRNA的表達(dá)水平明顯增加(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組DNA-PKcs、GADD45βmRNA在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)呈較高水平表達(dá)（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組DNA-PKcs、GADD45βmRNA的表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。5 Nogo-A、GAP-43免疫組化與RT-PCR分析結(jié)果：免疫組

8、化：Nogo-A、GAP-43在假手術(shù)組中有胞漿弱表達(dá)，而在腦缺血各組各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞核中有強(qiáng)陽性表達(dá)，染色呈棕黃色。與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)Nogo-A、GAP-43的表達(dá)明顯增加（P＜0.01)。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)GAP-43呈較高水平表達(dá)，Nogo-A表達(dá)減少（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組GAP-43表達(dá)水平顯著降低，Nogo-A表達(dá)持續(xù)增高（P＜0

9、.01）。RT-PCR：與假手術(shù)組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn) GAP-43mRNA的表達(dá)明顯增加，Nogo-A mRNA表達(dá)減少(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ預(yù)處理組在6h、1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)GAP-43mRNA呈較高水平表達(dá)，Nogo-A mRNA表達(dá)降低（P＜0.01）；而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度Ⅱ預(yù)處理組GAP-43mRNA表達(dá)水平顯著降低，Nogo-A mRNA表達(dá)持續(xù)增高（P＜0.01）。
　　結(jié)論：